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题名应用生物发光技术定量检测PCR扩增产物
被引量：1
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作者
姚群峰
宁勇
徐顺清
周宜开
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机构
湖北药检高等专科学校
华中科技大学同济医学院
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出处
《临床输血与检验》
CAS
2003年第3期179-182,共4页
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文摘
目的 建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法 首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含量。利用 2次PCR法扩增HBVDNA目的片段 ,并进行回收纯化定量 ,以之作为阳性标准模板制作标准曲线。选择适当的循环次数扩增样品中HBVDNA ,利用化学发光法检测扩增产物中PPi的量 ,进而确定样品中HBVDNA模板的量。结果 当起始模板量为 (10～ 5 )× 10 5拷贝 ,循环次数为 2 5 ,发光值与起始模板浓度呈现良好的相关。检测 32份样品血清 ,其中 2 3例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 1 6× 10 5拷贝 / μl,9例HBsAg(+)、HBeAg(- )、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 5 6× 10 3 拷贝 / μl。结论 本方法是一种操作简便。
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关键词
应用
生物发光技术
定量检测
PCR扩增产物
聚合酶链反应
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Keywords
bioluminescence polymerase chain reaction
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分类号
R446
[医药卫生—诊断学]
Q75
[医药卫生—临床医学]
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