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Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 王颖 蒲江 +6 位作者 齐乃松 文海若 王欣 胡燕平 宋捷 张海洲 王雪 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2015年第4期288-293,共6页
目的:建立Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并应用于染料木黄酮(GEN)潜在致癌性的检测中。方法:建立Bhas42细胞转化试验方法,比较细胞灶法和H2O2法对结果判定的影响。细胞灶法试验组在第21天直接固定染色。H2O2法试验组在细胞接种后... 目的:建立Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并应用于染料木黄酮(GEN)潜在致癌性的检测中。方法:建立Bhas42细胞转化试验方法,比较细胞灶法和H2O2法对结果判定的影响。细胞灶法试验组在第21天直接固定染色。H2O2法试验组在细胞接种后第19天采用H2O2处理,染色并测定D(450)以确定细胞转化率。计算转化率以验证两种方法的相关性。并通过细胞生长试验选择适宜的GEN浓度进行细胞转化试验,H2O2法判定转化试验结果。结果:在细胞灶法中,启动试验3-甲基胆蒽(3-MCA)组、促癌试验佛波醇酯(TPA)组的转化灶个数分别与启动、促癌试验DMSO组相比明显升高(P<0.01)。在H2O2法中,启动试验3-MCA组、促癌试验TPA组的转化灶个数、D(450)分别与启动、促癌试验DMSO组相比均明显升高(P<0.01)。启动试验中,GEN各浓度组(0.03、0.1、0.3、1、3μg/m L)相对于阴性组差异均无统计学意义,而在促癌试验中GEN浓度为0.03、1、3μg/m L时的D(450)相对于阴性组有显著差异(P<0.01)。结论:成功建立了Bhas 42细胞转化试验的H2O2法并实现了高通量检测,该法进一步缩短了实验周期并提高了结果的客观性,适用于非遗传毒性致癌物的体外早期筛选。GEN在促癌试验中呈阳性,但在启动试验中呈阴性,提示其可能是非遗传毒性致癌物。 展开更多
关键词 遗传毒性 bhas 42细胞转化 促癌活性 非遗传毒性致癌物 染料木黄酮
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佛波酯及3-甲基胆蒽对Bhas 42细胞系的诱癌和促癌作用 被引量:2
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作者 宋征 刘全海 马璟 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期42-44,共3页
根据化学致癌物在肿瘤形成过程中作用的不同阶段,可将化学致癌物分为诱癌化合物和促癌化合物,化学致癌物可使得Bhas细胞系产生突变从而形成集落。本研究通过考察促癌化合物佛波酯(TPA)及诱癌化合物3-甲基胆蒽(MCA)对Bhas 42细胞系的转... 根据化学致癌物在肿瘤形成过程中作用的不同阶段,可将化学致癌物分为诱癌化合物和促癌化合物,化学致癌物可使得Bhas细胞系产生突变从而形成集落。本研究通过考察促癌化合物佛波酯(TPA)及诱癌化合物3-甲基胆蒽(MCA)对Bhas 42细胞系的转化作用,验证Bhas 42细胞转化试验检验诱癌物及促癌物的准确性。 展开更多
关键词 细胞转化 bhas 42细胞系 诱癌 促癌
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Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立
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作者 黄鹏程 李若婉 +3 位作者 李申宁 王敬婷 宋征 李华 《药物评价研究》 CAS 2019年第5期878-883,共6页
目的建立基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并探讨此方法用于药物非临床阶段体外致癌性评价的前景。方法建立Bhas 42细胞转化试验96孔板高通量检测方法,使用已知阳性诱癌物苯并芘(Benzoapyrene,BaP)和环磷酰胺(Cyclophosp... 目的建立基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并探讨此方法用于药物非临床阶段体外致癌性评价的前景。方法建立Bhas 42细胞转化试验96孔板高通量检测方法,使用已知阳性诱癌物苯并芘(Benzoapyrene,BaP)和环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)为对照品,比较转化灶人工计数法和过氧化氢高通量96孔板法对结果判定的影响。进行试验的细胞在接种后第19天以一定浓度的过氧化氢处理细胞24 h。24 h后,洗去含过氧化氢的培养基,加入新鲜培养基并加入CCK-8染色孵育2~4 h后测定450 nm波长吸光度以确定细胞转化率。同时,转化灶人工计数法细胞在第21天经甲醇固定,吉姆萨染液染色后计数每孔克隆数,对比两种方法的差异性。结果转化灶人工计数法中,与阴性对照组比较,BaP和CP在启动试验中均被评价为阳性;过氧化氢高通量法得到与转化灶人工计数法相同的结果。结论成功建立了基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验的过氧化氢高通量检测方法,该方法相比于传统方法可简单、快速地检测化合物诱导Bhas42细胞的转化效率,并提高了结果评判的客观性。 展开更多
关键词 bhas 42细胞 高通量方法 细胞转化试验
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体外细胞转化试验的研究与应用进展 被引量:2
4
作者 王丹 耿兴超 +2 位作者 李波 王雪 文海若 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第4期310-314,共5页
细胞转化试验(CTAs)是利用体外培养的动物细胞模拟致癌物的体内致癌作用,从而进行致癌物检测的一种技术。它可以在不考虑致癌机制的情况下衡量化学物的致癌能力,能够满足对潜在致癌物致癌能力预测的需求。与动物试验相比,CTAs既可以充... 细胞转化试验(CTAs)是利用体外培养的动物细胞模拟致癌物的体内致癌作用,从而进行致癌物检测的一种技术。它可以在不考虑致癌机制的情况下衡量化学物的致癌能力,能够满足对潜在致癌物致癌能力预测的需求。与动物试验相比,CTAs既可以充分反映细胞与致癌物之间的相互作用,也明显缩短了试验周期,减少了动物的使用。通过不断地对方法进行优化和改良,已形成更为客观准确的CTAs细胞转化灶判定标准,其必将在临床前致癌性早期评价中发挥日益重要的作用。本文就CTAs的背景、优化、影响因素、国际发展趋势等方面进行综述,为今后CTAs的应用提供借鉴。 展开更多
关键词 细胞转化试验 致癌性 非遗传毒性致癌物 叙利亚地鼠胚胎细胞 bhas 42细胞
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应用Bhas 42细胞转化实验检测环磷酰胺、丝裂霉素C和氨苄西林钠致癌作用 被引量:1
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作者 宋征 刘全海 马璟 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期888-892,共5页
目的采用Bhas 42细胞转化实验检测已知有遗传毒性的化学品在化学致癌中的引发和促生长作用,评价Bhas 42细胞转化实验检测化学品致癌作用的可靠性。方法①通过细胞毒性实验确定环磷酰胺、丝裂霉素C和氨苄西林钠进行Bhas 42细胞转化实验... 目的采用Bhas 42细胞转化实验检测已知有遗传毒性的化学品在化学致癌中的引发和促生长作用,评价Bhas 42细胞转化实验检测化学品致癌作用的可靠性。方法①通过细胞毒性实验确定环磷酰胺、丝裂霉素C和氨苄西林钠进行Bhas 42细胞转化实验的浓度。②引发实验:细胞接种当日为第0天,第1天换成含有相应最终浓度的受试物或0.5%DMSO的DF5F培养基,培养72 h,第4天换成不含药物的DF5F培养基,培养至第21天。第22天将细胞固定、染色、并计数细胞数大于50的集落数。③促生长实验:接种当日为第0天,第4天换成含有相应受试物或0.5%DMSO的DF5F培养基并连续培养至第14天,期间第7天,第11天更换同样培养基,每15天换成不含药物的DF5F培养基,培养至第21天。第22天固定、染色细胞、计数细胞数大于50的集落数。结果按照70%的细胞存活率以及前期文献结果确定最终浓度为:氨苄西林钠1750 mg·L-1;环磷酰胺1300 mg·L-1;丝裂霉素C 0.01 mg·L-1;3-甲基胆蒽1 mg·L-1,佛波酯0.05 mg·L-1。引发实验结果显示,3-甲基胆蒽,丝裂霉素C和环磷酰胺集落数显著多于空白对照、并且两者比值>2,判定为有引发作用的致癌化学品。促生长实验结果显示,佛波酯集落数显著多于空白对照、并且两者比值大于2,因此判定为有促生长作用的致癌化学品。结论 Bhas42细胞转化实验不仅可以检测出遗传实验可检测出的致癌阳性化学品和非致癌化学品,还可检测出遗传实验结果为假阴性的致癌阳性化学品,可以作为一种快速易操作的致癌物预测体外模型。 展开更多
关键词 bhas42细胞 引发实验 促生长实验
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应用Bhas42细胞实验检测佛波酯对22个肿瘤促长基因表达的影响 被引量:1
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作者 宋征 韩峻松 +1 位作者 汪溪洁 马璟 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期274-278,共5页
目的探索目标基因与Bhas42细胞转化试验结合成为检测化合物致癌促长活性新的筛选方法的可能性。方法取促癌化合物佛波酯(TPA)作为阳性物,采用Bhas42转化细胞作为实验体系。接种当日为第0天(d 0),d 4将培养基换成含有TPA 0.05 mg·L-... 目的探索目标基因与Bhas42细胞转化试验结合成为检测化合物致癌促长活性新的筛选方法的可能性。方法取促癌化合物佛波酯(TPA)作为阳性物,采用Bhas42转化细胞作为实验体系。接种当日为第0天(d 0),d 4将培养基换成含有TPA 0.05 mg·L-1或0.5%DMSO的DF5F培养基,在加入相应受试化合物的24,48及72 h后取样。样品经过预处理后对抽提的RNA进行质量评价,采用RT-PCR方法检测Ccnb1,Rif1,Mcm3,Chek1,Jun,Fosl1,Hells,Vegfa,Stmn1,Prl2c3,Scarb1,Phex,Orm1,Orm2,Nup54,Slc2a1,Il1rl1,Rad51ap1,Tfrc,Ab1,Car13和Pik3r5在不同时间点的表达。结果与阴性对照组相比,TPA组加样后24 h有3个基因出现上调,分别为Vegfa,Il1rl1和Pik3r5;加样后48 h有11个基因出现上调,分别为Chek1,Hells,Mcm3,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Rif1;加样后72 h有10个基因出现上调,分别是Chek1,Hells,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Ccnb1。结论 TPA处理后所选取的22个促长阶段相关基因的表达在不同时间点呈现出不同的敏感性,说明22个肿瘤促长基因与Bhas42细胞体系结合,有望成为一种更快捷高速的致癌性筛选方法。 展开更多
关键词 bhas42细胞 致癌 基因标志物
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The role of organic electron donors in the initiation of BHAS base-induced coupling reactions between haloarenes and arenes
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作者 Andrew J.Smith Darren L.Poole John A.Murphy 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS CSCD 2019年第11期1425-1438,共14页
Coupling reactions between haloarenes and arenes(including heteroarenes)that are conducted without added transition metals but in the presence of KOtBu or NaOtBu,have been a topic of great interest since their discove... Coupling reactions between haloarenes and arenes(including heteroarenes)that are conducted without added transition metals but in the presence of KOtBu or NaOtBu,have been a topic of great interest since their discovery in 2008.Diverse organic structures act as additives that assist these reactions.These additives are converted into organic electron donors by the butoxide base and this leads to initiation of the coupling reactions,which proceed by radical chain mechanisms.This review provides an overview of the initiation stages of these reactions. 展开更多
关键词 ORGANIC ELECTRON donor potassium tert-butoxide ELECTRON transfer base-promoted homolytic AROMATIC substitution(bhas) coupling BENZYNE
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