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牛肉风味强化肽(BMP)表达载体的构建 被引量：8
1
作者 王艳萍 高文 +1 位作者 侯建华 孟琦 《天津科技大学学报》 CAS 2008年第3期16-20,共5页
牛肉风味强化肽(Beefy Meaty Peptide,BMP)最初是从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的八肽,它与味精和盐具有较好的协同作用,可以呈现出牛肉风味.为了能够大量、廉价地得到这种风味小肽物质,本文根据毕赤酵母密码子偏爱性设计出4拷贝... 牛肉风味强化肽(Beefy Meaty Peptide,BMP)最初是从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的八肽,它与味精和盐具有较好的协同作用,可以呈现出牛肉风味.为了能够大量、廉价地得到这种风味小肽物质,本文根据毕赤酵母密码子偏爱性设计出4拷贝头尾相连的BMP表达基因,并将其进行体外串联,得到8拷贝、12拷贝和16拷贝的BMP表达基因,将其插入到表达载体pPIC9,从而得到4种不同的毕赤酵母的表达载体. 展开更多
关键词 牛肉风味强化肽 载体构建 串联基因
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牛肉风味强化肽(BMP)在毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量：5
2
作者 白小佳 高文 王艳萍 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第8X期26-28,共3页
牛肉风味强化肽(BeefyMeaty Peptide,BMP)是从牛肉的木瓜蛋白酶水解物中分离得到的一种风味强化八肽,与食盐、MSG有较好的协同呈味的作用,能增强鲜味。将BMP串联基因整合在毕赤酵母GS115基因组中,获得工程菌株P.pastoris GS115-4BMP、P.... 牛肉风味强化肽(BeefyMeaty Peptide,BMP)是从牛肉的木瓜蛋白酶水解物中分离得到的一种风味强化八肽,与食盐、MSG有较好的协同呈味的作用,能增强鲜味。将BMP串联基因整合在毕赤酵母GS115基因组中,获得工程菌株P.pastoris GS115-4BMP、P.pastoris GS115-8BMP、P.pastoris GS115-12BMP和P.pastoris GS115-16BMP。将工程菌在BMMY培养基中诱导表达后的蛋白抽提物利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测,结果表明:构建的工程菌可以高效表达4拷贝、8拷贝、12拷贝和16拷贝的BMP,为BMP的高效表达和制备奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 牛肉风味强化肽 毕赤酵母 串联基因 表达
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利用GAP启动子在毕赤酵母中表达牛肉风味强化肽 被引量：4
3
作者 王金菊 孟琦 +2 位作者 张永生 王菁蕊 王艳萍 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期46-51,共6页
牛肉风味强化肽是1种从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的风味强化八肽。为了提供能够大量且廉价得到这种小肽物质的表达基因,本实验室工作人员构建以甲醇为诱导物并带有16拷贝BMP基因的表达载体pPIC9-16BMP。本文为了提高食品的安全... 牛肉风味强化肽是1种从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的风味强化八肽。为了提供能够大量且廉价得到这种小肽物质的表达基因,本实验室工作人员构建以甲醇为诱导物并带有16拷贝BMP基因的表达载体pPIC9-16BMP。本文为了提高食品的安全性,避免甲醇作为诱导物,探索用GAP启动子(PGAP)取代AOX1启动子(PAOX1),在毕赤酵母中组成型表达外源蛋白的可能性。应用PCR方法从毕赤酵母染色体中扩增GAP启动子,以其取代诱导型表达载体pPIC9-16BMP上的PAOX1,构建了组成型表达载体pGAP9-16BMP。转化毕赤酵母GS115,对获得的高拷贝转化子毕赤酵母GS115(pGAP9-16BMP)进行组成型表达,并用SDS-PAGE检测到目的产物。 展开更多
关键词 牛肉风味强化肽 GAP启动子 组成型表达 毕赤酵母
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发酵液中牛肉风味肽分离纯化方法的比较研究 被引量：4
4
作者 杨超 杨明 +4 位作者 韩英素 林伟利 曾松荣 高辉 王艳萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2007年第2期24-27,共4页
使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对重组酵母发酵液中一种牛肉风味肽(BMP)的稳定性进行了研究,并分别运用D301离子交换层析和Sephadex G-25凝胶过滤层析对其进行了分离纯化,最后利用RP-HPLC对目标肽进行分析检测。结果表明,在pH值为7.4条... 使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对重组酵母发酵液中一种牛肉风味肽(BMP)的稳定性进行了研究,并分别运用D301离子交换层析和Sephadex G-25凝胶过滤层析对其进行了分离纯化,最后利用RP-HPLC对目标肽进行分析检测。结果表明,在pH值为7.4条件下,发酵液中的目标肽于室温下放置0h～8h后仍呈现良好的稳定性。分离纯化结果显示,Sephadex G-25凝胶过滤层析的分离纯化效果优于D301离子交换层析,更适合于分离复杂体系发酵液中的风味肽。 展开更多
关键词 牛肉风味肽 稳定性 离子交换层析 凝胶过滤层析 分离纯化
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表达牛肉风味肽的重组毕赤酵母部分生物学特性的研究 被引量：1
5
作者 曾松荣 王艳萍 杨明 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第1期32-35,共4页
对分泌表达16拷贝牛肉风味肽毕赤酵母工程菌株)的生物表型、生长特性、表达特性及遗传稳定性等进行了研究。结果表明:该重组菌株的表型为Mut+;在5L发酵罐中,采用BSM培养基,设定适合的菌体培养温度和pH值,通过调节搅拌速度、通气量和罐... 对分泌表达16拷贝牛肉风味肽毕赤酵母工程菌株)的生物表型、生长特性、表达特性及遗传稳定性等进行了研究。结果表明:该重组菌株的表型为Mut+;在5L发酵罐中,采用BSM培养基,设定适合的菌体培养温度和pH值,通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施使溶氧(DO)维持在20%～35%,当诱导90h后(发酵110h),目的产物BMP的表达量达到最高为54mg/L,是其摇瓶水平的5.4倍;遗传稳定性分析实验及PCR检测结果证明,重组菌株具有良好的遗传稳定性和重组蛋白表达的稳定性。 展开更多
关键词 毕赤酵母 牛肉风味肽 工程菌 生物学特性
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表达牛肉风味强化肽P.postoris GS115(pGAP9-16BMP)摇瓶发酵条件的优化
6
作者 孟琦 张宝持 +1 位作者 王金菊 王艳萍 《天津科技大学学报》 CAS 2010年第4期1-5,共5页
从碳源种类及质量浓度、氮源质量浓度、温度、pH等方面对构建的工程菌P.postoris GS115(pGAP9-16BMP)摇瓶发酵条件进行了优化.结果表明,最佳表达条件为:甘油30 g/L,蛋白胨40 g/L,酵母粉20 g/L,挡板三角瓶装液量为30%,菌体生长阶段控制温... 从碳源种类及质量浓度、氮源质量浓度、温度、pH等方面对构建的工程菌P.postoris GS115(pGAP9-16BMP)摇瓶发酵条件进行了优化.结果表明,最佳表达条件为:甘油30 g/L,蛋白胨40 g/L,酵母粉20 g/L,挡板三角瓶装液量为30%,菌体生长阶段控制温度32℃,初始pH 6.0,培养96 h.在此条件下,牛肉风味强化肽BMP(Beefy Meaty Peptide)表达量最高为41.9 mg/L. 展开更多
关键词 牛肉风味强化肽 组成型表达 毕赤酵母 发酵
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重组毕赤酵母发酵牛肉风味肽的中试研究 被引量：7
7
作者 曾松荣 王艳萍 杨明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期43-48,共6页
研究分泌表达16拷贝牛肉风味肽(beefy meaty peptide,BMP)毕赤酵母工程菌株(Pichia pastoris GS115-16B2)的500L发酵罐中试发酵工艺。在500L发酵罐中采用三步发酵法进行了3批次中试发酵实验,设定菌体培养阶段温度为30℃,pH5.0,诱导表达... 研究分泌表达16拷贝牛肉风味肽(beefy meaty peptide,BMP)毕赤酵母工程菌株(Pichia pastoris GS115-16B2)的500L发酵罐中试发酵工艺。在500L发酵罐中采用三步发酵法进行了3批次中试发酵实验,设定菌体培养阶段温度为30℃,pH5.0,诱导表达阶段温度为28℃,pH3.0。在发酵过程中通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施来使DO维持在20%～35%左右,总共发酵126h(诱导时间为96h),当诱导88h后(发酵118h),600nm波长下的光密度值(OD600)达到184.5,菌体湿重达到318.7g/L,目的产物BMP的表达量达到最高为172mg/L,实现了BMP的高效表达。通过中试发酵初步建立了工程菌P.pastoris GS115-16B2的中试发酵工艺,为BMP的进一步研究开发奠定了良好基础。 展开更多
关键词 毕赤酵母 牛肉风味肽 工程菌 中试发酵
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牛肉风味强化肽表达条件的初步研究 被引量：4
8
作者 王艳萍 张建 杨永清 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第1期230-234,共5页
牛肉风味强化肽(BeefyMeatyPeptide,BMP)最初是从牛肉的消化液中分离的八肽,能增强鲜味,可作为一种类似于谷氨酸钠的天然风味强化剂。文章介绍了利用基因工程技术在酵母菌中表达BMP的方法,对构建的Pichiapastoris酵母工程菌株X-33/pPICZ... 牛肉风味强化肽(BeefyMeatyPeptide,BMP)最初是从牛肉的消化液中分离的八肽,能增强鲜味,可作为一种类似于谷氨酸钠的天然风味强化剂。文章介绍了利用基因工程技术在酵母菌中表达BMP的方法,对构建的Pichiapastoris酵母工程菌株X-33/pPICZαA-BMP进行了发酵表达,确定了菌株的表型、高密度生长及表达条件。试验结果显示:构建的工程菌株为甲醇利用慢表型Muts,优化后的种子培养基摇瓶条件下菌体密度OD600达到28。在pH3.0、诱导72h、甲醇添加量为0.5%的条件下BMP有最大表达,选用BSM有利于诱导表达BMP;建立了SephadexG-25分离纯化、RP-HPLC检测BMP的有效方法。 展开更多
关键词 牛肉风味肽 毕赤酵母 表达
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牛肉风味肽的研究进展 被引量：3
9
作者 张宁龙 王文利 刘源 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第8期317-322,共6页
牛肉风味肽(beefy meaty peptide,BMP)是在牛肉中首次发现的一种呈味肽,在不同体系中表现出滋味的多元性。目前,BMP已通过基因工程技术成功表达,这为实现产业化生产提供了理论依据;同时其结构稳定,用于食品调味体系的潜力巨大。BMP的发... 牛肉风味肽(beefy meaty peptide,BMP)是在牛肉中首次发现的一种呈味肽,在不同体系中表现出滋味的多元性。目前,BMP已通过基因工程技术成功表达,这为实现产业化生产提供了理论依据;同时其结构稳定,用于食品调味体系的潜力巨大。BMP的发现和报道引起学者对鲜味短肽的广泛关注和研究,同时其为呈味肽的滋味特性探究起到很好的指导作用。本文将从BMP的呈味特性、呈味机制和生物合成等方面展开论述,以期能为呈味肽的进一步研究提供一些借鉴。 展开更多
关键词 牛肉风味肽(BMP) 呈味特性 呈味机制 呈味肽
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一种小分子生物活性肽(重组BMP)的质谱分析
10
作者 杨永清 董伯森 赵芳 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2011年第6期510-514,共5页
目的对一种小分子生物活性肽(重组BMP)样品进行电喷雾质谱测定,初步确定其一级结构。方法离子化方式:电喷雾离子化;检测方式正离子;质量扫描范围m/z 150～1 000;干燥气(N2)流速5 arb;雾化气(N2)压力35 arb;毛细管出口电压4.5 kV;碎裂器... 目的对一种小分子生物活性肽(重组BMP)样品进行电喷雾质谱测定,初步确定其一级结构。方法离子化方式:电喷雾离子化;检测方式正离子;质量扫描范围m/z 150～1 000;干燥气(N2)流速5 arb;雾化气(N2)压力35 arb;毛细管出口电压4.5 kV;碎裂器电压100 V;碰撞诱导解离技术碎裂器电压为35%;碰撞气流量为电子流量控制器自动控制;进样方式:流动注射进样;流动相为乙腈∶水(50∶50)。结果利用电喷雾质谱技术,初步测定重组BMP样品的一级结构为H-Lys-Gly-Asp-Glu-Glu-Ser-Leu-Pro-OH。结论该方法能够初步测定小分子生物活性肽的一级结构,为实验室生物工程菌构建提供准确有效的检测技术。 展开更多
关键词 生物活性肽 食品感官肽 电喷雾质谱 一级结构
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