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化滞柔肝颗粒抑制内质网应激改善非酒精性脂肪性肝炎的作用机制研究
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作者 操颖 陈泌链 +2 位作者 余思雨 张莉 季光 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2195-2203,共9页
目的:探究中药复方化滞柔肝颗粒改善非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用机制。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组,模型组,化滞柔肝颗粒低、高剂量组,以蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导NASH模型并予化滞柔肝颗粒干预;检测小鼠体质量、肝... 目的:探究中药复方化滞柔肝颗粒改善非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用机制。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组,模型组,化滞柔肝颗粒低、高剂量组,以蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导NASH模型并予化滞柔肝颗粒干预;检测小鼠体质量、肝重、肝体比、血清肝酶[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)]、肝脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)]及血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平,结合肝组织病理染色结果评估化滞柔肝颗粒对NASH小鼠表型的影响;通过RNAseq、RT-qPCR、Western Blot、ELISA和TUNEL染色等方法探究化滞柔肝颗粒调节内质网应激(ERS)与细胞凋亡改善NASH的效应机制。结果:化滞柔肝颗粒可降低NASH小鼠血清ALT、AST,肝脏TC、TG和血清炎症因子水平(P<0.01,P<0.05),减轻肝脏脂肪变和炎症浸润,下调ERS相关基因和蛋白的表达;其有效成分大黄素能降低Raw264.7细胞的炎症因子水平,下调Bcl-2/Bax/Caspase3信号通路基因和蛋白的表达,抑制细胞凋亡。结论:化滞柔肝颗粒能有效改善NASH,其机制可能与通过Bcl-2/Bax/Caspase3信号通路抑制巨噬细胞凋亡,改善ERS有关。 展开更多
关键词 化滞柔肝颗粒 非酒精性脂肪性肝炎 内质网应激 bcl-2/bax/caspase3信号通路 细胞凋亡
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橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡 被引量:1
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作者 刘嘉烁 彭灿 +2 位作者 汤少勋 韩雪峰 谭支良 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3037-3046,共10页
【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg... 【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著上升,细胞凋亡比例极显著降低,且DNA片段的梯状条带减少。在Bax、Bcl-2和Caspase3基因及其蛋白表达方面,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞中的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著或极显著高于CK组,而Bcl-2基因及其蛋白表达水平较低;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著低或极显著于CK组,Bcl-2基因及其蛋白表达水平则均高于CK组;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达极显著下调,而Bcl-2基因及其蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡,有效提高细胞活性,故推测橙皮苷对促进乳腺器官发育和维持泌乳能力具有良好的正向效应。 展开更多
关键词 奶牛 橙皮苷 乳腺上皮细胞 细胞凋亡 bcl-2/bax-caspase3信号通路
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马鞭草总黄酮靶向拓扑异构酶Ⅱ诱导肝癌HepG-2细胞凋亡 被引量:7
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作者 李先佳 任丽平 金少举 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1147-1152,共6页
目的探讨马鞭草总黄酮靶向拓扑异构酶诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及机制。方法采用质量浓度为50、100、200 mg·L^(-1)的马鞭草总黄酮处理HepG-2细胞,TUNEL-DAPI双染色法检测HepG-2细胞凋亡;超螺旋p BR322 DNA松弛实验分析TopⅡ活性;Rea... 目的探讨马鞭草总黄酮靶向拓扑异构酶诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及机制。方法采用质量浓度为50、100、200 mg·L^(-1)的马鞭草总黄酮处理HepG-2细胞,TUNEL-DAPI双染色法检测HepG-2细胞凋亡;超螺旋p BR322 DNA松弛实验分析TopⅡ活性;Real time PCR法分析TOP Ⅱα、TOP ⅡβmRNA表达水平;Western blot法分析Bcl-2、Bax、TOP Ⅱα、TOP Ⅱβ和caspase-3蛋白表达水平。结果质量浓度为50、100、200 mg·L^(-1)的马鞭草总黄酮能促进HepG-2细胞凋亡(P<0.05),抑制TopⅡ的活性,降低TOP Ⅱα、TOP ⅡβmRNA表达水平(P<0.05);马鞭草总黄酮可通过抑制Bcl-2、TOP Ⅱα、TOP Ⅱβ蛋白,增加Bax和caspase-3蛋白水平,诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论马鞭草总黄酮抑制TopoⅡ活性是诱导HepG-2细胞凋亡的直接因素,并通过Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路启动级联反应,是其体外抗肿瘤作用的重要分子机制。 展开更多
关键词 马鞭草总黄酮 HEPG-2 细胞凋亡 Top bcl-2/bax/caspase-3信号通路
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基于网络药理学和动物实验探讨黄连解毒汤通过Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路抗结直肠腺瘤作用机制
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作者 张艺凡 贾苏杰 +8 位作者 刘静远 郎晓猛 康欣 赵源 刘龙辉 刘悦 翟文静 胡博乾 刘建平 《中医药导报》 2024年第11期32-40,47,共10页
目的:研究黄连解毒汤通过调控Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路发挥抗结直肠腺瘤(CRA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取黄连解毒汤的活性成分及作用靶点;通过在线人类孟德尔遗传病数据库(OMIM)和人类基因组... 目的:研究黄连解毒汤通过调控Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路发挥抗结直肠腺瘤(CRA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取黄连解毒汤的活性成分及作用靶点;通过在线人类孟德尔遗传病数据库(OMIM)和人类基因组数据库(GeneCard)获取CRA疾病靶点;通过Venny 2.1软件获得黄连解毒汤与CRA的交集靶点;通过String数据库和Cytoscape 3.9.1软件绘制蛋白互作网络,并筛选黄连解毒汤治疗CRA的核心作用靶点;通过DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;通过Auto Dock Tools 1.5.6软件将前5位药物活性成分与前5位关键靶点进行分子对接验证。采用随机数字表法将60只小鼠分为正常组、模型组、黄连解毒汤低剂量组、黄连解毒汤中剂量组、黄连解毒汤高剂量组、阿司匹林组,每组10只。采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)联合诱导小鼠CRA模型,同时各组予相应药物进行灌胃干预9周。苏木精-伊红染色法(HE)观察小鼠肠组织的病理变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)观察肠组织细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测腺瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA、细胞色素C(Cyt C)mRNA、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测腺瘤组织Bcl-2、Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达水平。结果:网络药理学共筛选得到黄连解毒汤80个活性成分,药物-疾病交集靶点170个;通过药物-成分-靶点-疾病调控网络的构建,筛选出槲皮素(quercetin)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、黄连素(berberine)、汉黄芩素(wogonin)等核心活性成分;通过构建蛋白互作网络,筛选出AKT1、JUN、HSP90AA1、CASP3、IL-6等关键靶点;GO与KEGG富集分析发现黄连解毒汤可能通� 展开更多
关键词 结直肠腺瘤 黄连解毒汤 bcl-2/bax/caspase-3信号通路 细胞凋亡 网络药理学 分子对接 动物实验 小鼠
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甘草查尔酮A调控人结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制研究 被引量:22
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作者 张九成 陈卫东 邹宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期549-554,共6页
目的:探讨甘草查尔酮A(LCA)对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并分析相关分子机制。方法:通过体外培养人结肠癌HCT116和SW480细胞,MTT实验检测不同浓度(0、1、2. 5、5、10、25、50μmol/L)的LCA对细胞增殖的影响,测定12 h,24 h和48 h的... 目的:探讨甘草查尔酮A(LCA)对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并分析相关分子机制。方法:通过体外培养人结肠癌HCT116和SW480细胞,MTT实验检测不同浓度(0、1、2. 5、5、10、25、50μmol/L)的LCA对细胞增殖的影响,测定12 h,24 h和48 h的细胞增殖抑制率,并计算两组细胞的IC50。随后选择HCT116细胞为研究对象,并将细胞分为4组:对照组,50μmol/L的LCA组,5 mmol/L的ROS抑制剂(NAC)组以及50μmol/L LCA+5 mmol/L NAC组。流式细胞仪检测各组细胞的ROS水平及凋亡状况; Western blot检测内质网应激(ERS)相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4和CHOP以及凋亡相关蛋白Bcl2、Bax和Cleaved-caspase3的表达。结果:随着LCA作用浓度的增大和时间的延长,人结肠癌HCT116和SW480细胞的增殖抑制率增大,具有显著的浓度和时间依赖性; LCA对HCT116和SW480细胞作用48 h的IC50分别为21. 94μmol/L和29. 38μmol/L。与对照组比较,NAC能显著降低细胞ROS及凋亡水平(均P<0. 01),而LCA能显著促进细胞ROS的释放及凋亡(均P<0. 01)。与对照组比较,NAC组细胞内质网应激相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP和促凋亡蛋白Bax、Cleavedcaspase3的表达水平均显著降低(P<0. 05,P<0. 01),抗凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著增加(P<0. 01);而LCA组细胞ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP、Bax和Cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著增加(均P<0. 01),Bcl2的表达水平显著降低(P<0. 01)。结论:甘草查尔酮A能显著抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,促进细胞的凋亡,其作用机制可能与激活氧化应激及调控Bcl2/Bax/Cleaved-caspase3信号通路相关。 展开更多
关键词 甘草查尔酮A 人结肠癌 细胞增殖 细胞凋亡 氧化应激 bcl2/bax/Cleaved-caspase3信号通路
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