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Role of T cell death in maintaining immune tolerance during persistent viral hepatitis 被引量:2
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作者 Juan Ramón Larrubia Megha Uttam Lokhande +3 位作者 Silvia García-Garzón Joaquín Miquel Dolores Subirá Eduardo Sanz-de-Villalobos 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第12期1877-1889,共13页
Virus-specific T cells play an important role in the resolution of hepatic infection. However, during chronic hepatitis infection these cells lack their effector functions and fail to control the virus. Hepatitis B vi... Virus-specific T cells play an important role in the resolution of hepatic infection. However, during chronic hepatitis infection these cells lack their effector functions and fail to control the virus. Hepatitis B virus and hepatitis C virus have developed several mechanisms to generate immune tolerance. One of these strategies is the depletion of virus-specific T cells by apoptosis. The immunotolerogenic liver has unique property to retain and activate na ve T cell to avoid the over reactivation of immune response against antigens which is exploited by hepatotropic viruses to persist. The deletion of the virus-specific T cells occurs by intrinsic (passive) apoptotic mechanism. The pro-apoptotic molecule Bcl-2 interacting mediator (Bim) has attracted increasing attention as a pivotal involvement in apoptosis, as a regulator of tissue homeostasis and an enhancer for the viral persistence. Here, we reviewed our current knowledge on the evidence showing critical role of Bim in viral-specific T cell death by apoptotic pathways and helps in the immune tolerance. 展开更多
关键词 T cell DEATH Specific CYTOTOXIC T lymphocytes HEPATITIS C virus immune TOLERANCE Apoptosis bcl-2 interacting mediator Liver TOLERANCE APOPTOTIC pathways Viral HEPATITIS
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细胞外信号调节蛋白激酶5/凋亡调节蛋白信号途径在低温诱导心肌细胞损伤及凋亡中的调控作用 被引量:7
2
作者 王耀晟 程晓曙 +2 位作者 洪葵 吴宗贵 李毅刚 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2014年第7期540-544,共5页
目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式... 目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式细胞仪检测;各蛋白表达水平通过Western blot检测;细胞内钙离子、活性氧簇(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)通过荧光标记及流式细胞仪检测。结果:在低温刺激下的心肌细胞中,ERK5 siRNA可加剧Bim蛋白表达;Bim siRNA不影响ERK5,但减轻p-ERK5表达;ERK5 siRNA导致更高的细胞凋亡率,Bim siRNA则可减弱ERK5 siRNA的促凋亡作用;ERK5 siRNA加重了细胞内钙离子超载、ROS激活、线粒体膜电位破坏,Bim siRNA则可对抗上述损伤性作用。结论:在低温干预下的心肌细胞中,下调ERK5可释放对Bim的表达抑制,加重凋亡、细胞内钙离子超载、ROS爆发,造成更严重的线粒体膜电位破坏,而下调Bim则产生反向的保护作用。结果显示ERK5/Bim途径在低温诱导心肌细胞损伤中的重要调控作用。 展开更多
关键词 低温刺激 心肌细胞 细胞外信号调节蛋白激酶5 凋亡调节蛋白Bim
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宫颈癌组织中BIM和Girdin蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性分析 被引量:5
3
作者 冯艳 冯蓓 刘宁宁 《空军医学杂志》 2020年第1期53-57,共5页
目的分析宫颈癌组织中Bcl-2相互作用细胞凋亡调节因子(Bcl-2 interacting mediator of cell death,BIM)和Girdin蛋白的表达情况,并探讨BIM和Girdin蛋白与宫颈癌患者临床病理特征及预后的相关性。方法选取延安大学附属医院2011年6月-2013... 目的分析宫颈癌组织中Bcl-2相互作用细胞凋亡调节因子(Bcl-2 interacting mediator of cell death,BIM)和Girdin蛋白的表达情况,并探讨BIM和Girdin蛋白与宫颈癌患者临床病理特征及预后的相关性。方法选取延安大学附属医院2011年6月-2013年6月收治的136例宫颈癌患者作为研究对象,采用系统回顾性分析法分析所有患者的临床及随访资料,收集宫颈癌患者其136份癌组织标本(研究组)及136份其他良性宫颈疾病的正常组织标本(对照组)作为研究对象,所有组织标本均行BIM与Girdin蛋白的检测,分析宫颈癌组织中BIM与Girdin蛋白的表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果宫颈癌组织中BIM及Girdin蛋白阳性表达率分别为36.03%、58.09%(P<0.05);BIM及Girdin蛋白的表达与宫颈癌患者年龄、病理类型差异均无统计学意义(P>0.05);BIM及Girdin蛋白的表达与宫颈癌患者淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及肌层浸润深度差异有统计学意义(P<0.05);经单因素分析得出:FIGO分期、分化程度、肌层浸润深度、BIM蛋白及Girdin蛋白患者其5年生存率率差异有统计学意义(P<0.05);多因素COX比例风险回归模型分析显示,FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2、BIM蛋白阴性及Girdin蛋白阳性均为影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论在宫颈癌癌变组织中BIM呈低表达,Girdin蛋白呈高表达,随着患者FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2时BIM低表达率和Girdin蛋白高表达率均上升,且联合FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2共同为影响宫颈癌患者预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 宫颈癌 bcl-2相互作用细胞凋亡调节因子 Girdin蛋白 临床病理特征 预后
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运动对胰岛素抵抗大鼠肝脏BIM信号通路的影响 被引量:4
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作者 完建永 张勇 +2 位作者 刘世强 华田苗 孙庆艳 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期115-118,共4页
目的:探究运动干预对肥胖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏BIM-JNK1-IRS1-Akt信号通路的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分4组(n=10):对照组(普通膳食喂养16周);高脂膳食安静组(高脂膳食喂养16周);慢性运动组(高脂膳食喂养16周且后8周进行慢性... 目的:探究运动干预对肥胖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏BIM-JNK1-IRS1-Akt信号通路的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分4组(n=10):对照组(普通膳食喂养16周);高脂膳食安静组(高脂膳食喂养16周);慢性运动组(高脂膳食喂养16周且后8周进行慢性运动干预,5%体重负重的游泳运动,1 h/d,5天/周)和急性运动组(高脂膳食喂养16周后进行同样5%体重负重的6 h急性运动干预,分两个3 h进行,中间间隔休息45 min)。干预结束后,所有大鼠称重后进行口服糖耐量和胰岛素释放实验,分别使用罗氏血糖仪和大鼠胰岛素ELISA试剂盒测定血糖含量和血清胰岛素含量,以胰岛素敏感性指数衡量胰岛素抵抗状态。Western blot方法检测肝脏Bcl-2细胞死亡调节因子(BIM),磷酸化c-Jun氨基末端激酶1(p-JNK1),磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平。结果:与对照组大鼠相比,高脂膳食安静组大鼠体重和内脏脂肪质量显著增加(P<0.01),胰岛素敏感性指数显著下降((P<0.01);肝脏中BIM蛋白水平显著增加(P<0.01),JNK1和IRS1磷酸化水平显著增加(P<0.01),Akt磷酸化水平显著下降(P<0.01)。与高脂膳食安静组相比,慢性运动组大鼠体重和内脏脂肪质量显著降低(P<0.01),急性运动组大鼠体重和内脏脂肪质量无明显变化。与高脂膳食安静组相比,慢性运动组和急性运动组大鼠的胰岛素敏感性指数显著提高(P<0.05),肝脏中BIM蛋白水平显著减少(P<0.01),JNK1和IRS1磷酸化水平显著降低(P<0.01),Akt磷酸化水平显著增加(P<0.01)。结论:慢性运动降低大鼠体重和内脏脂肪质量,急性运动并不影响大鼠体重和内脏脂肪质量,但两种运动方式都可以改善肥胖诱导的胰岛素抵抗,这可能与大鼠肝脏中BIM调节的JNK1-IRS1-Akt信号通路的改变有关。 展开更多
关键词 运动 胰岛素抵抗 bcl-2细胞死亡调节因子 c-Jun氨基末端激酶1 大鼠
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过表达miR-17—92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制 被引量:3
5
作者 周鹏 马亮 +3 位作者 周珺 徐晶晶 刘菲 国风 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期325-331,共7页
目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞,并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control... 目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞,并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和DU145-17-92细胞的生长能力,采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况,采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期,采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达。结果xCelligence系统监测显示,从接种24 h后,DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-control细胞(P〈0.01)。细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为(56.57±1.68)%、(85.48±0.26)%和(90.85±2.08)%,DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为(73.64±0.68)%、(93.43±1.23)%和(97.36±0.86)%,两组仅在培养24 h时差异有统计学意义(P〈0.01)。细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的细胞凋亡率分别为(6.76±0.09)%、(14.51±0.86)%和(20.73±1.64)%,DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为(1.86±0.15)%、(7.90±0.40)%和(4.92±0.48)%,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。Western blot检测显示,DU145-control和DU145-17-92细胞中,Bcl-2家族促凋亡蛋白(BIM)的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00, 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B(Akt)中丝氨酸473位点(p-Akt-473)的磷酸化,但对308位点(p-Akt-308)的磷酸化无明显影响。DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01,� 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 miR-17-92基因簇 bcl-2家族促凋亡蛋白 人第10号染色体缺失 的磷酸酶及张力蛋白同源物 蛋白激酶B 细胞外调节蛋白激酶
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Bim蛋白、端粒酶蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及临床意义 被引量:3
6
作者 李盛 李伟 《解放军医药杂志》 CAS 2014年第8期46-49,共4页
目的探讨淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相互作用的细胞凋亡调节因子(bcl-2 interacting mediator of cell death,Bim)蛋白、端粒酶蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组化(EnVisionTM)法分别检测40例骨恶性纤维组织细... 目的探讨淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相互作用的细胞凋亡调节因子(bcl-2 interacting mediator of cell death,Bim)蛋白、端粒酶蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组化(EnVisionTM)法分别检测40例骨恶性纤维组织细胞瘤组织(观察组)及40例骨恶性纤维组织细胞瘤旁组织(对照组)中Bim、端粒酶蛋白的表达情况。结果 Bim蛋白、端粒酶蛋白在观察组、对照组阳性率的差异均有统计学意义(χ2=8.71,P<0.01;χ2=22.17,P<0.01)。Bim蛋白、端粒酶蛋白的表达均与骨恶性纤维组织细胞瘤直径、临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤部位及组织学类型无关(P>0.05)。Bim蛋白与端粒酶蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤组织中的表达呈显著负相关(r=-0.56,P<0.01)。结论 Bim蛋白和端粒酶蛋白均参与了骨恶性纤维组织细胞瘤的形成,同时检测这2项指标有利于判断肿瘤恶性程度及预后。 展开更多
关键词 组织细胞瘤 恶性纤维 肿瘤 骨组织 BIM蛋白 端粒酶蛋白 免疫组织化学 基因表达调控 肿瘤
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BIM在EGFR突变非小细胞肺癌中的表达及其意义 被引量:2
7
作者 贺韦东 庞龙滨 +2 位作者 邢春燕 董魁 崔琳 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第12期10-12,17,共4页
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株的凋亡以及促凋亡蛋白(BIM)的表达,探讨吉非替尼对其的影响。方法采用Annexin PI单染法检测吉非替尼作用下各细胞株的凋亡,免疫印迹法检测BIM的表达。结果吉非替尼诱导NSCLC细胞株凋亡,其中对H1650、H... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株的凋亡以及促凋亡蛋白(BIM)的表达,探讨吉非替尼对其的影响。方法采用Annexin PI单染法检测吉非替尼作用下各细胞株的凋亡,免疫印迹法检测BIM的表达。结果吉非替尼诱导NSCLC细胞株凋亡,其中对H1650、H1975突变株的诱导凋亡率高于A549细胞株(P<0.01),H1650的BIM表达随吉非替尼浓度的增加而增强,H1975的BIM表达较高,但受吉非替尼浓度变化的影响不明显,而A549的BIM表达需要更高浓度的吉非替尼作用。结论吉非替尼可以使NSCLC细胞表皮生长因子受体(EGFR)突变株细胞内的BIM表达增高,并且可能通过上调BIM的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 非小细胞肺 细胞凋亡 促凋亡蛋白 吉非替尼
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实时荧光定量PCR构建BIM基因表达标准品质粒和标准曲线 被引量:1
8
作者 付文卓 潘博 +4 位作者 吴英婷 隋雷鸣 王利勇 武文琦 邹林樾 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期39-42,213,共5页
为了能够快速、准确定量BIM基因的mRNA,试验构建了小鼠BIM基因的标准品质粒和标准曲线,根据Gen Bank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增该基因122 bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,... 为了能够快速、准确定量BIM基因的mRNA,试验构建了小鼠BIM基因的标准品质粒和标准曲线,根据Gen Bank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增该基因122 bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定,然后将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立了BIM标准曲线及直线回归方程。结果表明:产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.998,线性关系好。说明成功构建了目的基因BIM的标准品质粒和标准曲线。 展开更多
关键词 BIM 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
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非小细胞肺癌组织中丝苏氨酸激酶11与细胞死亡调解子抗体表达检测的临床意义
9
作者 池菲 张新 +3 位作者 才虹美 赵瑾 张春艳 王维 《医学综述》 2016年第15期3041-3043,3047,共4页
目的探讨非小细胞肺癌组织中丝苏氨酸激酶11(STK11)、细胞死亡调解子抗体(BIM)表达检测的临床意义。方法选取2014年3月至2015年3月河北省胸科医院接收的非小细胞肺癌患者65例,收集切除后的非小细胞肺癌组织标本及癌旁正常组织。采... 目的探讨非小细胞肺癌组织中丝苏氨酸激酶11(STK11)、细胞死亡调解子抗体(BIM)表达检测的临床意义。方法选取2014年3月至2015年3月河北省胸科医院接收的非小细胞肺癌患者65例,收集切除后的非小细胞肺癌组织标本及癌旁正常组织。采用免疫组织化学技术对标本中STK11、BIM的表达进行研究。结果非小细胞肺癌组织中的STK11阳性表达率低于旁癌组织[63.08%(41/65)比92.31%(60/65)](x^2=16.022,P〈0.05),非小细胞肺癌组织中的BIM的阳性表达率高于旁癌组织[61.54%(40/65)比21.54%(14/65)](x^=21.413,P〈0.05)。淋巴结转移患者非小细胞肺癌组织中STK11阳性表达率显著低于未转移淋巴结患者[41.38%(12/29)比80.56%(29/36)](P〈0.05);Ⅰ~Ⅱ期患者非小细胞肺癌组织中STK11的阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期[72.55%(37/51)比28.57%(4/14)](P〈0.05);高分化患者的非小细胞肺癌组织中STK11阳性表达率显著高于中分化、低分化[89.47%(17/19)比51.61%(16/31)、53.33%(8/15)](P〈0.05)。腺癌患者非小细胞肺癌组织中STK11阳性率显著高于鳞癌[78.13%(25/32)比48.48%(16/33)](P〈0.05)。Ⅰ~Ⅱ期的BIM阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期[70.59%(36/51)比28.27%(4/14)](P〈0.05);高分化患者非小细胞肺癌组织阳性表达率显著高于中分化、低分化[89.47%(17/19)比45.16%(14/31)、60.oo%(9/15)](P〈0.05)。腺癌BIM阳性率高于鳞癌[75.oo%(24/32)比48.48%(16/33)](P〈O.05)。结论STK11、BIM表达水平可作为判定非小细胞肺癌转移及预后的生物学指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 丝苏氨酸激酶11 细胞死亡调解子抗体
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Bim蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及临床研究
10
作者 李盛 《医学综述》 2014年第21期4003-4004,共2页
目的探讨Bim蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及其临床意义。方法收集2005年2月至2008年2月蔚州矿业公司职工医院确诊为骨恶性纤维组织细胞瘤的患者40例,采用免疫组织化学(EnVisionTM)法分别检测40例骨恶性纤维组织细胞瘤及40例骨恶... 目的探讨Bim蛋白在骨恶性纤维组织细胞瘤中的表达及其临床意义。方法收集2005年2月至2008年2月蔚州矿业公司职工医院确诊为骨恶性纤维组织细胞瘤的患者40例,采用免疫组织化学(EnVisionTM)法分别检测40例骨恶性纤维组织细胞瘤及40例骨恶性纤维组织细胞瘤旁组织中Bim的表达情况。结果 Bim在骨恶性纤维组织细胞瘤组织、骨恶性纤维组织细胞瘤旁组织中阳性表达率分别为25.00%、67.50%,差异有统计学意义(P<0.01)。Bim的表达与肿瘤部位、患者性别、年龄及组织学类型无关,差异无统计学意义(P>0.05),但与肿瘤大小、临床分期、5年生存期及紫杉醇治疗有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Bim在骨恶性纤维组织细胞瘤组织中呈现低表达,其低表达可在一定程度上反映骨恶性纤维组织细胞瘤的生物学行为及5年生存期的状况。 展开更多
关键词 骨恶性纤维组织细胞瘤 BIM蛋白 免疫组织化学 生物学行为
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BIM在非小细胞肺癌治疗中的作用及意义 被引量:4
11
作者 王静芳 信涛 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期789-792,共4页
B细胞淋巴瘤-2促细胞凋亡(B-cell lymphoma 2 interacting mediator of cell death,BIM)基因作为抑癌基因,在调控细胞凋亡中起重要作用。在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中,BIM表达水平的下调或功能缺陷会降低酪氨酸... B细胞淋巴瘤-2促细胞凋亡(B-cell lymphoma 2 interacting mediator of cell death,BIM)基因作为抑癌基因,在调控细胞凋亡中起重要作用。在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中,BIM表达水平的下调或功能缺陷会降低酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)及化疗药物的疗效并影响术后患者的预后。本文将对BIM的结构、功能以及BIM在NSCLC治疗中的作用及意义进行介绍。 展开更多
关键词 BIM 肺肿瘤 酪氨酸激酶抑制剂 化疗
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癫痫持续状态大鼠海马Bim与Caspase-3的表达 被引量:3
12
作者 肖品品 耿直 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期477-481,共5页
目的:探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)大鼠模型中,Bcl-2-相互作用细胞死亡介导因子(Bim)与Caspase-3在大鼠海马组织中的表达。方法:雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,应用匹罗卡品产生SE 60 min后终止发作,24 ... 目的:探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)大鼠模型中,Bcl-2-相互作用细胞死亡介导因子(Bim)与Caspase-3在大鼠海马组织中的表达。方法:雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,应用匹罗卡品产生SE 60 min后终止发作,24 h后取材,行HE染色及TUNEL染色,观察海马神经元的损伤及凋亡情况,Western Blot测定海马组织中Bim的表达,免疫组化检测Caspase-3的表达。采用Pearson相关分析法分析Bim与Caspase-3表达的相关性。结果:SE后24 h,海马组织HE染色见神经元数量减少,TUNEL染色阳性细胞数明显增加,Western Blot中Bim出现相对分子量26kD的条带,免疫组化染色可见大量Caspase-3阳性神经元。结论:大鼠SE后24 h,Bim与Caspase-3在海马组织神经元表达增加,且二者的表达呈正相关(r=0.901,P=0.001),海马神经元出现凋亡。 展开更多
关键词 癫痫持续状态 bcl-2相互作用细胞死亡介导因子(Bim) CASPASE-3 细胞凋亡
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