球形芽孢杆菌C_3-41二元毒素基因在苏云金芽孢杆菌以色列亚种中的克隆和表达 被引量：5

1

作者 袁志明 Nielsen-LeRoux C +3 位作者 Pasteur N Delecluse A Charles J-F Frutos R 《微生物学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期29-35,共7页

球形芽孢杆菌Ｃ３４１是我国分离的一株对蚊幼虫有毒杀作用的高毒力菌株，对库蚊、按蚊幼虫的毒性高于２３６２菌株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明Ｃ３４１总ＤＮＡ中３５ＫｂＨｉｎｄＩＩ片段上带有４１９和５１４ｋＤ二元毒素... 球形芽孢杆菌Ｃ３４１是我国分离的一株对蚊幼虫有毒杀作用的高毒力菌株，对库蚊、按蚊幼虫的毒性高于２３６２菌株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明Ｃ３４１总ＤＮＡ中３５ＫｂＨｉｎｄＩＩ片段上带有４１９和５１４ｋＤ二元毒素基因，该片段由３４７９个核苷酸组成，核苷酸序列同２３６２菌株的二元毒素基因序列完全相同。含二元毒素基因的重组质粒ｐＣＷ１和ｐＣＷ２能在大肠杆菌中表达产生二元毒素蛋白，但表达量低，重组子杀蚊毒性低。无晶体型苏云金芽孢杆菌以色列亚种重组子在其芽孢形成中能产生以晶体形式存在的二元毒素蛋白，其全发酵液和纯化晶体蛋白的杀蚊活性与Ｃ３４１相近。 展开更多

关键词 球形芽孢杆菌 苏云金芽孢杆菌 二元毒素基因

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淡色库蚊对苏云金杆菌及化学杀虫剂的抗性研究 被引量：5

2

作者 宋晓 程鹏 +7 位作者 王海防 刘宏美 郭秀霞 刘丽娟 张崇星 赵玉强 王怀位 公茂庆 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2019年第1期13-16,共4页

目的探讨苏云金杆菌以色列亚种(Bti)与常用化学杀虫剂联合使用对东平湖地区淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法采用幼虫浸渍法测试现场淡色库蚊幼虫对Bti及5种化学杀虫剂的抗性,采用简单复配法检测Bti分别与5种化学杀虫剂混用的增效效果,增... 目的探讨苏云金杆菌以色列亚种(Bti)与常用化学杀虫剂联合使用对东平湖地区淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法采用幼虫浸渍法测试现场淡色库蚊幼虫对Bti及5种化学杀虫剂的抗性,采用简单复配法检测Bti分别与5种化学杀虫剂混用的增效效果,增效明显的2组再次进行复配验证。结果现场淡色库蚊幼虫对Bti、溴氰菊酯、氯氰菊酯、敌敌畏、残杀威、三氯杀虫酯的抗性倍数分别为1. 04、106. 00、83. 00、5. 03、3. 51、1. 01。Bti分别与5种化学杀虫剂简单复配时均有增效效果,Bti+残杀威增效效果最佳(19. 63),其次为Bti+氯氰菊酯(11. 59)。进一步复配结果显示,残杀威与Bti以不同比例复配时都具有增效作用,其中以1∶3比例复配时共毒系数最高(189);当氯氰菊酯与Bti以1∶1及1∶3比例复配时,表现出增效作用(共毒系数:114、135)。结论将Bti与化学杀虫剂联合应用(尤其是残杀威)对山东省东平湖地区淡色库蚊有较好的灭杀效果,可延缓抗药性的发展,是蚊虫抗性治理中较为重要的防治策略。 展开更多

关键词 苏云金杆菌以色列亚种 化学杀虫剂 淡色库蚊 联合应用 增效作用

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球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用 被引量：3

3

作者 孙钒 袁志明 +2 位作者 张用梅 余健秀 庞义 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第S1期119-122,共4页

本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协... 本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 球形芽孢杆菌 杀蚊毒素 协同作用

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蚊浓核病毒·Bti油悬剂与常用杀蚊幼剂对蚊幼防制效果比较

4

作者 王唐 刘曜 +3 位作者 宋灿磊 许峰 董兆鹏 刘洪霞 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第5期557-560,共4页

目的评价蚊浓核病毒·Bti油悬剂在实验室条件下对淡色库蚊幼虫和白纹伊蚊幼虫的防制效果,为蚊幼控制的药剂选择提供参考。方法采用幼虫浸渍法,将30只蚊幼分别置于含有不同杀蚊幼剂的搪瓷盆中,观察并记录幼虫的死亡时间、化蛹及羽化... 目的评价蚊浓核病毒·Bti油悬剂在实验室条件下对淡色库蚊幼虫和白纹伊蚊幼虫的防制效果,为蚊幼控制的药剂选择提供参考。方法采用幼虫浸渍法,将30只蚊幼分别置于含有不同杀蚊幼剂的搪瓷盆中,观察并记录幼虫的死亡时间、化蛹及羽化情况;利用SPSS 18.0软件计算半数致死时间(LT50)及95%可信区间(CI)、毒力回归方程,并进行统计学分析。结果蚊浓核病毒·Bti油悬剂、双硫磷和Bs对淡色库蚊低龄幼虫的LT50分别为85.7、73.2和109.8 min,对淡色库蚊高龄幼虫的LT50分别为82.8、71.6和128.2 min;蚊浓核病毒·Bti油悬剂、双硫磷、Bs对淡色库蚊低龄幼虫100%的死亡率所需的时间分别为260、160和200 min,对淡色库蚊高龄幼虫100%的死亡率所需的时间分别为240、140和300 min;Bti对淡色库蚊低龄幼虫和高龄幼虫的24 h死亡率均为0;新药1、新药2和新药3对白纹伊蚊高龄幼虫100%的死亡率所需时间分别为280、260和180 min,LT50分别为95.8、68.8和54.3 min;双硫磷和Bti对白纹伊蚊幼虫24 h死亡率均为100%,LT50分别为222.0和272.5 min。结论蚊浓核病毒·Bti油悬剂在实验室条件下对淡色库蚊和白纹伊蚊幼虫均具有较好的控制效果,且与常用的3种杀蚊幼剂相比防治效果各有优势,可用于蚊幼的防治。 展开更多

关键词 蚊浓核病毒 苏云金杆菌以色列亚种 淡色库蚊 白纹伊蚊 杀蚊幼剂

原文传递

cry4Aa、cry4Ba和cry11Aa基因在苏云金杆菌无晶体型菌株中的表达 被引量：3

5

作者 孙钒 袁志明 +2 位作者 李田勇 蔡全信 张用梅 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期61-64,共4页

利用穿梭载体pBU4,将苏云金杆菌以色列亚种 (Bti)的cry4Aa、cry4Ba和cry1 1Aa基因分别转入Bti无晶体突变株 4Q7中 ,获得了转化菌株Bt B60 1、Bt B61 1和Bt B640。SDS PAGE结果显示 :Cry4Aa、Cry4Ba和Cry1 1Aa蛋白均分别获得了表达。透... 利用穿梭载体pBU4,将苏云金杆菌以色列亚种 (Bti)的cry4Aa、cry4Ba和cry1 1Aa基因分别转入Bti无晶体突变株 4Q7中 ,获得了转化菌株Bt B60 1、Bt B61 1和Bt B640。SDS PAGE结果显示 :Cry4Aa、Cry4Ba和Cry1 1Aa蛋白均分别获得了表达。透射电镜下观察 ,转化菌株能产生球形或菱形伴胞晶体。转化菌株对敏感和抗性致倦库蚊及白纹伊蚊幼虫的生物测定结果显示 :Cry4Aa、Cry4Ba和Cry1 1Aa蛋白对库蚊和伊蚊的毒力较低 。 展开更多

关键词 苏云金杆菌以色列亚种 球形芽孢杆菌 毒素 基因表达 交叉抗性 杀蚊毒素蛋白 伴胞晶体

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利用污泥制备微生物灭蚊剂的研究 被引量：2

6

作者 罗刚 周顺桂 +1 位作者 王少林 倪晋仁 《应用基础与工程科学学报》 EI CSCD 2008年第4期465-471,共7页

以活菌数、芽孢数和毒效为参数,通过摇瓶发酵试验探讨了污泥为原料制备微生物灭蚊剂的可行性.结果表明,在含固率适宜的条件下,污泥是微生物灭蚊菌株Bacillus thuringiensissubsp.israelensis187(简称Bti 187)和Bacillussphaericus2362(... 以活菌数、芽孢数和毒效为参数,通过摇瓶发酵试验探讨了污泥为原料制备微生物灭蚊剂的可行性.结果表明,在含固率适宜的条件下,污泥是微生物灭蚊菌株Bacillus thuringiensissubsp.israelensis187(简称Bti 187)和Bacillussphaericus2362(简称Bs 2362)的优良产孢产毒培养基.Bti 187和Bs 2362在污泥中发酵42h,活菌数分别可达3.7×108CFU/mL、3.6×108CFU/mL;抗热性芽孢数分别可达2.6×108CFU/mL、3.5×108CFU/mL,均显著高于常规LB培养基.毒力测定表明,在污泥中发酵42h后,Bti 187发酵液对淡色库蚊和白纹伊蚊的LC50分别为1.05μg/mL、0.93μg/mL,Bs 2362发酵液对淡色库蚊和白纹伊蚊的LC50分别为0.69μg/mL和103.4μg/mL.与常规LB培养基相比,杀蚊幼虫毒效显著提高.采用污泥发酵制备微生物灭蚊剂可降低生产成本,且发酵性能优良,为污泥资源化开辟了新途径. 展开更多

关键词 城市污泥 微生物灭蚊剂 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 球形芽孢杆菌

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苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)发酵液的浓缩工艺研究

7

作者 陈伟 廖先清 +2 位作者 刘芳 饶犇 周荣华 《湖北农业科学》 2019年第22期111-113,共3页

通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜... 通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜浓缩方式最终得到的产物质量是离心浓缩方式得到产物质量的176%,效价回收率提高了36%。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌以色列亚种(bacillus thuringiensis subsp. israelensis) 真空薄膜浓缩 离心浓缩

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高效微生物杀虫剂对蚊虫的杀灭作用 被引量：2

8

作者 田东 白迪 +5 位作者 蔡全信 张经常 金玉华 刘海舟 袁志明 闫建平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期340-345,共6页

新疆阿勒泰北屯地区位于额尔齐斯河下游,夏季蚊虫泛滥,严重威胁当地人民的身体健康。本研究跟踪调查了各种水体的幼蚊滋生情况,确定了幼蚊发生的2个高峰期分别出现在5月下旬至6月上旬及6月下旬至7月上旬,同时确定了洪水型积水、排碱渠... 新疆阿勒泰北屯地区位于额尔齐斯河下游,夏季蚊虫泛滥,严重威胁当地人民的身体健康。本研究跟踪调查了各种水体的幼蚊滋生情况,确定了幼蚊发生的2个高峰期分别出现在5月下旬至6月上旬及6月下旬至7月上旬,同时确定了洪水型积水、排碱渠积水和漫灌林带积水是幼蚊高发的孳生地类型。采集并对蚊虫样品进行形态学鉴定,确定了该地区的优势蚊种为刺扰伊蚊Aedes vexans。用苏云金芽胞杆菌以色列亚种Bacillus thuringiensis subsp.israelensis(Bti)水剂对该蚊种进行了室内生测,其LC50和LC90分别为0.055和0.198 mg/L。分别选取3种高发孳生地的3处积水进行野外试验,发现48 h后该药剂对幼蚊的杀灭率均在96%以上,对大面积孳生地也有很好的杀灭作用。监测显示成蚊出现的高峰时间是每年的6月上旬至6月中旬及7月中旬至7月下旬。连续施药3年后,2013年的成蚊数量相比2011年时下降幅度超过50%。本研究对于北屯地区蚊虫的进一步控制以及Bti制剂在新疆的推广有重要的意义。 展开更多

关键词 刺扰伊蚊 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 生测 孳生地

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苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因的克隆及表达产物的效果测定 被引量：1

9

作者 张昕 刘相萍 +4 位作者 闫歌 甄天民 王新国 孙传红 王怀位 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期274-277,共4页

目的　　克隆、表达苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因并测定其杀蚊毒效。　 方法　采用PCR技术 ,扩增得到CryIVD基因片段 ;通过双酶切及连接反应 ,将该基因克隆入大肠杆菌质粒 pUC18构建重组克隆及表达载体 ;转化E .coliDH5α,... 目的　　克隆、表达苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因并测定其杀蚊毒效。　 方法　采用PCR技术 ,扩增得到CryIVD基因片段 ;通过双酶切及连接反应 ,将该基因克隆入大肠杆菌质粒 pUC18构建重组克隆及表达载体 ;转化E .coliDH5α,提取重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列测定 ;以IPTG诱导表达CryIVD蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物并进行杀蚊毒效测定。　结果　CryIVD基因成功克隆并在宿主菌中正确表达 ,表达产物对蚊幼的杀灭毒效测定显示其对淡色库蚊Ⅱ～Ⅲ龄健康幼虫的LC50 为 2 .3 8× 10 6 cells ml,对白纹伊蚊健康幼虫的LC50 为 1.6× 10 7cells ml。　结论　CryIVD基因被成功克隆和表达 ,且其表达产物有明显杀蚊幼活性。 展开更多

关键词 苏云金杆菌以色列亚种 CryIVD基因 PCR 基因表达 基因克隆 生物杀虫剂

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1200ITU/mg Bti浓悬浮剂的研制

10

作者 廖先清 刘芳 +2 位作者 周荣华 张遵霞 杨自文 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第24期5113-5115,共3页

通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种Bti L-10菌株进行培养基的改良优化得到一种理化性质好、利于后处理的配方。200 L罐发酵效价达395 ITU/μL;通过后处理工艺的优化,得到一种制备1 200 ITU/mgBti浓悬浮剂路线,即发酵液2次离心并高倍浓缩... 通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种Bti L-10菌株进行培养基的改良优化得到一种理化性质好、利于后处理的配方。200 L罐发酵效价达395 ITU/μL;通过后处理工艺的优化,得到一种制备1 200 ITU/mgBti浓悬浮剂路线,即发酵液2次离心并高倍浓缩得到菌浆,添加各种助剂经砂磨机研磨,得到Bti浓悬浮剂产品效价达到1 245 ITU/mg。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 浓悬浮剂 制备工艺

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Bti的溶血特性及其在Bti制剂毒力检测中的应用

11

作者 但汉斌 陈勇强 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期326-330,共5页

实验利用Bti(苏云金杆菌以色列亚种）对兔红细胞（RBC）的溶血特性，以A541特征光吸收对Bti毒蛋白溶液体积或其对数作回归分析。结果表明：二者具有良好的直线关系。相关系数r≥0．95。方差分析表明：不同梯度的Bti每蛋白溶液处理之间... 实验利用Bti(苏云金杆菌以色列亚种）对兔红细胞（RBC）的溶血特性，以A541特征光吸收对Bti毒蛋白溶液体积或其对数作回归分析。结果表明：二者具有良好的直线关系。相关系数r≥0．95。方差分析表明：不同梯度的Bti每蛋白溶液处理之间差异极显著，处理内各重复之间差异不显著，同一天内的重复检测没有显著差异。本又给出了Bti制剂毒力检测的参考程度，并就该程度应用于Bti毒力快速检测作了较为详尽的探讨。 展开更多

关键词 苏云金杆菌 以色列亚种 溶血实验 毒力检测

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苏云金芽孢杆菌以色列亚种毒性蛋白基因的克隆及其原核表达

12

作者 唐建霞 赵松 +5 位作者 戴洋 顾晓红 刘琴 徐健 管晓虹 朱荫昌 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期119-123,共5页

目的从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bti)以色列亚种中获得cry4B、cry11A和cyt1A3种主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行克隆和原核表达。方法根据GenBank上3种基因的已知序列设计合成引物,应用PCR技术扩增目的基因,克隆入pUC19质... 目的从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bti)以色列亚种中获得cry4B、cry11A和cyt1A3种主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行克隆和原核表达。方法根据GenBank上3种基因的已知序列设计合成引物,应用PCR技术扩增目的基因,克隆入pUC19质粒,阳性克隆质粒经酶切和测序鉴定。将测序鉴定的3种蛋白基因克隆入原核表达载体(pET32c)进行原核表达。结果PCR扩增获得特异性的基因片段,重组质粒经酶切后获得预计大小的基因片段,并测序鉴定。序列结果与已知序列一致。原核表达载体经ITPG诱导,获得预计大小的目的蛋白。结论成功克隆了苏云金芽孢杆菌以色列亚种的3个主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行原核表达。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 基因克隆 原核表达

原文传递

苏云金杆菌以色列亚种L-10菌株培养基优化研究

13

作者 刘芳 廖先清 +2 位作者 周荣华 张志刚 张遵霞 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第22期4603-4605,共3页

利用单因素筛选和正交试验,对苏云金杆菌以色列亚种Bti-L-10高毒菌株的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为:淀粉3%,氮源B 0.50%,氮源C 0.75%,氮源D 4.00%,氮源G 1.00%。通过200 L和40 000 L发酵罐分别发酵,发酵液效价分别为37... 利用单因素筛选和正交试验,对苏云金杆菌以色列亚种Bti-L-10高毒菌株的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为:淀粉3%,氮源B 0.50%,氮源C 0.75%,氮源D 4.00%,氮源G 1.00%。通过200 L和40 000 L发酵罐分别发酵,发酵液效价分别为379 ITU/mg和327 ITU/mg,发酵液经过后处理,所得原粉效价分别为8 928 ITU/mg和6 837 ITU/mg。 展开更多

关键词 苏云金杆菌以色列亚种 培养基 优化

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食物颗粒和非食物颗粒对苏云金杆菌以色列亚种生物活性的影响

14

作者 王清锋 喻子牛 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期552-554,共3页

以埃及伊蚊幼虫为材料 ,比较了食物和非食物颗粒对苏云金杆菌以色列亚种致病能力的影响 ,结果表明 :食物 (Pharmamedia)和非食物性颗粒 (活性炭及Carmin)皆能显著提高伊蚊幼虫对苏云金芽胞杆菌以色列亚种商品制剂的抵抗力 ,颗粒物的这... 以埃及伊蚊幼虫为材料 ,比较了食物和非食物颗粒对苏云金杆菌以色列亚种致病能力的影响 ,结果表明 :食物 (Pharmamedia)和非食物性颗粒 (活性炭及Carmin)皆能显著提高伊蚊幼虫对苏云金芽胞杆菌以色列亚种商品制剂的抵抗力 ,颗粒物的这种作用与其营养功能无关。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 以色列亚种 埃及伊蚊 颗粒

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苏云金杆菌以色列亚种几丁质酶基因的克隆及序列分析 被引量：8

15

作者 钟万芳 姜丽华 +3 位作者 阎文昭 蔡平钟 张志雄 裴炎 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期364-369,共6页

从苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (Bacillusthuringiensissubspisraelensis)中提取基因组DNA ,通过合成 1对特异性引物 ,用touchdownPCR的方法扩增几丁质酶ichi基因序列 (GenBank登录号 :AF5 2 6 379)。ichi序列全长为 2 5 70bp ,含有 1个 2... 从苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (Bacillusthuringiensissubspisraelensis)中提取基因组DNA ,通过合成 1对特异性引物 ,用touchdownPCR的方法扩增几丁质酶ichi基因序列 (GenBank登录号 :AF5 2 6 379)。ichi序列全长为 2 5 70bp ,含有 1个 2 0 6 7bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 6 88个氨基酸 ,推测分子量为 75 79kDa ,等电点pI=5 90的几丁质酶前体。序列和结构比较分析表明 :Ichi氨基酸序列与蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 2 8 9几丁质酶CW、蜡状芽孢杆菌CH几丁质酶B及苏云金芽孢杆菌墨西哥亚种几丁质酶的同源性分别为 97 2 4 %、97 18%、97 6 3% ,而与苏云金芽孢杆菌巴基斯坦亚种的同源性只有 6 3 0 7%。Ichi编码区由分泌信号肽 (46AA)、催化区 (10 5AA)、粘蛋白Ⅲ型同源区 (74AA)及几丁质结合区 (40AA)组成。 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 几丁质酶基因 克隆 序列分析

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苏云金芽孢杆菌以色列亚种P19基因的初步研究 被引量：2

16

作者 刘子铎 孙明 +3 位作者 喻子牛 ZaritskyA Ben-DovE ManasherobR 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期114-119,共6页

以含有Ｐ１９和ｃｙｔ１Ａ基因的以色列亚种７２ＭＤ质粒的９７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段为模板进行ＰＣＲ扩增，分别获得Ｐ１９基因和ｃｙｔ１Ａ基因片段。与表达载体ｐＵＨＥ２４连接转化大肠杆菌ＸＬ１，获得３个克隆株。ＬＺ１９含有... 以含有Ｐ１９和ｃｙｔ１Ａ基因的以色列亚种７２ＭＤ质粒的９７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段为模板进行ＰＣＲ扩增，分别获得Ｐ１９基因和ｃｙｔ１Ａ基因片段。与表达载体ｐＵＨＥ２４连接转化大肠杆菌ＸＬ１，获得３个克隆株。ＬＺ１９含有Ｐ１９基因；ｐＬＺｃｙｔ１Ａ含有ｃｙｔ１Ａ基因；ＬＺ１９Ａ含有Ｐ１９和ｃｙｔ１Ａ两个基因。利用ｃｙｔ１Ａ蛋白质可使大肠杆菌细胞致死的特性，在ＩＰＴＧ诱导下，测定了各克隆基因表达对大肠杆菌有致死作用；ｐＬＺ１９Ａ对大肠杆菌的起始致死作用明显快于ｐＬＺｃｙｔ１Ａ，这种现象可能是Ｐ１９基因促进ｃｙｔ１Ａ基因高表达的结果。 展开更多

关键词 苏云金牙孢杆菌以色列亚种 P19基因 cyt1A基因

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大肠埃希菌表达苏云金杆菌cryIVD基因杀蚊幼活性观察 被引量：3

17

作者 刘相萍 张昕 +4 位作者 阎歌 甄天民 孙传红 王新国 黄炳成 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2002年第5期343-344,共2页

目的 :观察表达B .t.icryIVD基因的大肠埃希菌对蚊幼虫的毒效。 方法 :细菌的诱导表达及蚊虫毒效测试。结果 :加入工程菌 48h对淡色库蚊和白纹伊蚊均具有明显的杀灭作用 ,LC50 分别为 2 .3 8× 10 6 、1.6× 10 7个 ml细胞 ,... 目的 :观察表达B .t.icryIVD基因的大肠埃希菌对蚊幼虫的毒效。 方法 :细菌的诱导表达及蚊虫毒效测试。结果 :加入工程菌 48h对淡色库蚊和白纹伊蚊均具有明显的杀灭作用 ,LC50 分别为 2 .3 8× 10 6 、1.6× 10 7个 ml细胞 ,其中对淡色库蚊的杀灭作用要好于对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果。结论 :单独表达B .t . 展开更多

关键词 大肠埃希菌 表达 苏云金杆菌 cryIVD基因 杀蚊幼活性 杀蚊活性

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苏云金杆菌cryIVD基因的表达及杀蚊毒效测定 被引量：2

18

作者 刘相萍 张昕 +3 位作者 闫歌 甄天民 孙传红 王新国 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2004年第4期234-235,共2页

目的 研究苏云金杆菌(B.t.i)cryIVD基因用于蚊虫生物防治。 方法 经IPTG诱导,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western-blot)分析,观察其杀蚊毒效。 结果 经SDS-PAGE... 目的 研究苏云金杆菌(B.t.i)cryIVD基因用于蚊虫生物防治。 方法 经IPTG诱导,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western-blot)分析,观察其杀蚊毒效。 结果 经SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异蛋白带的分子质量单位为72 ku,并且该蛋白对蚊虫具有杀灭作用。 结论 在大肠埃希菌中B.t.i cryIVD基因单独表达,并具有杀蚊活性。 展开更多

关键词 苏云金杆菌 cryIVD 基因表达 杀蚊活性

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表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试 被引量：2

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作者 邓胜群 邓茗芝 +2 位作者 陈嘉婷 郑丽兰 彭鸿娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期750-754,共5页

目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得... 目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果。结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性。表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107cells/m L,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果。当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4∶1、1∶1和1∶4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002)。结论表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果。 展开更多

关键词 AaIT Cyt2Ba 白纹伊蚊 致倦库蚊 苏云金杆菌毒素

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苏云金杆菌cry IVD基因的克隆及序列分析 被引量：1

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作者 刘相萍 张昕 +3 位作者 闫歌 甄天民 孙传红 王新国 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第1期52-54,共3页

目的　克隆苏云金杆菌 ( B.t.i) cry IVD基因并测定其序列。　方法　根据 B.t.i cry IVD已知序列 ,设计合成 1对引物 ,应用 PCR技术扩增 cry IVD基因 ,克隆入 p UC18载体 ,阳性克隆的重组质粒经酶切、电泳鉴定后进行序列测定。　结果　 ... 目的　克隆苏云金杆菌 ( B.t.i) cry IVD基因并测定其序列。　方法　根据 B.t.i cry IVD已知序列 ,设计合成 1对引物 ,应用 PCR技术扩增 cry IVD基因 ,克隆入 p UC18载体 ,阳性克隆的重组质粒经酶切、电泳鉴定后进行序列测定。　结果　 PCR扩增得到特异的 2 .0 kb基因片段。重组质粒经酶切后得到预期大小的基因片段。序列分析证明目的基因被完整且正向克隆。　结论　 B.t.i cry IVD基因被成功克隆。 展开更多

关键词 苏云金杆菌 cryIVD 克隆 序列分析

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