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枯草芽孢杆菌Q125降解黄曲霉毒素B1发酵条件优化及活性物质分析 被引量:12
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作者 刘亚楠 彭丹丹 +3 位作者 王敏 张明丹 黄继红 刘娜 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2021年第4期9-15,共7页
为了提高枯草芽孢杆菌Q125(Bacillus subtilis)降解黄曲霉毒素B_(1)的能力,在单因素试验基础上,结合响应面法对显著影响AFB_(1)降解影响显著的发酵条件进行了优化。结果表明:最优发酵条件为发酵时间38.6 h、接种量5.8%、发酵温度36℃;... 为了提高枯草芽孢杆菌Q125(Bacillus subtilis)降解黄曲霉毒素B_(1)的能力,在单因素试验基础上,结合响应面法对显著影响AFB_(1)降解影响显著的发酵条件进行了优化。结果表明:最优发酵条件为发酵时间38.6 h、接种量5.8%、发酵温度36℃;经发酵和降解条件优化后,上清液对AFB_(1)的降解率从69.24%升高至100%,降解效率明显提高;热处理1和热处理2分别提高了AFB_(1)的降解率;蛋白酶K和SDS处理分别使AFB_(1)降解率降低了5.05%和36.72%(P<0.05)。初步推测蛋白或酶可能是菌株Q125培养上清液降解AFB_(1)的活性物质成分。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 黄曲霉毒素B 1 降解 发酵条件 响应面分析
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内生枯草芽孢杆菌SWB8菌株β-1,3-1,4-葡聚糖酶的抗菌作用及细胞毒性(英文) 被引量:11
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作者 金志雄 周围 +5 位作者 王娅 王燕 李雯静 史朝金 刘永贵 万永继 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1527-1537,共11页
【目的】本文研究从药用植物黄姜中分离的内生枯草芽孢杆菌菌株SWB8分泌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的抗菌活性和细胞毒性。【方法】利用液体发酵、凝胶渗透色谱(GPC)、十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相层析串联质谱(LC-MS/MS)... 【目的】本文研究从药用植物黄姜中分离的内生枯草芽孢杆菌菌株SWB8分泌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的抗菌活性和细胞毒性。【方法】利用液体发酵、凝胶渗透色谱(GPC)、十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相层析串联质谱(LC-MS/MS)等方法纯化和鉴定枯草芽孢杆菌株SWB8合成的β-1,3-1,4-葡聚糖酶;利用纸片扩散法,检测葡聚糖酶抑制临床致病性细菌和真菌生长的活性;应用MTT法和流式细胞术(FCM)评估此葡聚糖酶对人肺腺癌细胞(A549)和骨髓间质干细胞(MSCs)的细胞毒性。【结果】细菌性β-1,3-1,4-葡聚糖酶显示了广谱的抗菌活性;抗肿瘤活性主要以细胞凋亡的方式选择性的抑制人肺腺癌细胞系A549细胞的增殖,而对人骨髓间质干细胞系MSC细胞无明显影响。【结论】首次报道β-1,3-1,4-葡聚糖酶的抗菌和抗肿瘤细胞的活性。内生枯草芽孢杆菌SWB8菌株有可能成为抗菌和高效低毒的抗肿瘤药物的潜在来源。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 抗菌作用 细胞毒性
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枯草芽孢杆菌Natto3的筛选及其降解黄曲霉毒素B_1的初步研究 被引量:11
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作者 张盼 李培武 +5 位作者 万霞 江木兰 龚阳敏 胡传炯 丁小霞 张银波 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期234-239,245,共7页
从可食用的纳豆中筛选出一株能够高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,简称AFB1)的细菌,该细菌的发酵上清液经浓缩后制成的粗酶液对AFB1降解率达到91.4%。对该菌进行了分类地位鉴定并初步研究了粗酶液的酶学性质。结果表明,该菌经生理生... 从可食用的纳豆中筛选出一株能够高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,简称AFB1)的细菌,该细菌的发酵上清液经浓缩后制成的粗酶液对AFB1降解率达到91.4%。对该菌进行了分类地位鉴定并初步研究了粗酶液的酶学性质。结果表明,该菌经生理生化和16S r DNA序列比对鉴定为枯草芽孢杆菌,并命名为Natto3。Natto3的粗酶液降解AFB1的最适培养时间为72h,最适反应温度为37℃,最适p H值是8.5,Zn2+、Mn2+、Mg2+、Cu2+、Li+五种金属离子均会不同程度地抑制降解活性。此外,将该粗酶液添加在被黄曲霉毒素高度污染的花生样品中进行脱毒实验,可使花生中AFB1的浓度从192μg/kg降至43μg/kg。 展开更多
关键词 纳豆 枯草芽孢杆菌 降解 AFB1
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枯草芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:5
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作者 蒋思婧 马立新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期145-152,共8页
本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)HB0 0 2的基因组文库 ,经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对 硝基苯 α D 葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆 ,经鉴定均含克隆了寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶基因的重组质粒 (命名为pHBM0 ... 本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)HB0 0 2的基因组文库 ,经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对 硝基苯 α D 葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆 ,经鉴定均含克隆了寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶基因的重组质粒 (命名为pHBM0 0 1~pHBM0 0 6 )。选择pHBM0 0 3 ,对其插入片段测序分析 ,此片段内有一编码 5 6 1个氨基酸的开放阅读框 ,该蛋白质的计算分子量为 6 5 985kD。HB0 0 2的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶的氨基酸序列与Bacillussp .和凝结芽孢杆菌 (Bacilluscoagulans)的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶的氨基酸序列一致性分别为 81 %、6 7% ,相似性分别为 89%、79%。从pHBM0 0 3中扩增出寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶基因 ,克隆到pBV2 2 0上 ,转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)DH5α ,得到三个能水解对 硝基苯 α D 葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆HBM0 0 3 1~HBM0 0 3 3 ,将此三个菌株热诱导表达 ,SDS PAGE电泳可检测到特异表达的蛋白质 ,其中HBM0 0 3 1、HBM0 0 3 2表达的蛋白约 6 6kD ,为完整的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶 ,而HBM0 0 3 3表达的蛋白质偏小 ;表达的蛋白质均有寡聚 1 ,6 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 寡聚-1 6-葡萄糖苷酶 鸟枪法克隆 基因表达
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黄瓜根际促生菌Bacillus subtilis S1的分离鉴定与促生抗病
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作者 章梦婷 王二兴 +3 位作者 张雅婷 刘敬一 徐鲁荣 陈云鹏 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2141-2157,共17页
【背景】黄瓜白粉病作为黄瓜种植过程中常见的真菌病害之一,在世界范围内广泛发生,造成黄瓜品质和产量下降,引起严重的经济损失。【目的】分离鉴定对黄瓜白粉病具有防治效果的原始生防细菌菌株,验证其防病促生作用。【方法】利用平板筛... 【背景】黄瓜白粉病作为黄瓜种植过程中常见的真菌病害之一,在世界范围内广泛发生,造成黄瓜品质和产量下降,引起严重的经济损失。【目的】分离鉴定对黄瓜白粉病具有防治效果的原始生防细菌菌株,验证其防病促生作用。【方法】利用平板筛选法分离拮抗菌,并结合使用16SrRNA基因序列分析、系统发育分析、全基因组测序、次生代谢物预测及形态特征分析等方法鉴定该菌株对黄瓜白粉病的生防效果以及对黄瓜植株生长的促进作用。【结果】利用玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)作为指示菌,平板筛选得到拮抗细菌S1,并验证该菌对盆栽种植黄瓜植株的促生作用以及对白粉病的防治效果。16S rRNA基因序列分析结果表明该菌株与Bacillus subtilis KZH-E3具有100%的相似性。通过全基因组测序,借助生物信息学分析工具,利用系统发育进化关系,在全基因组水平上菌株S1被鉴定为枯草芽孢杆菌,自主命名为Bacillus subtilis S1。通过温室盆栽防效试验,证明菌株S1对黄瓜白粉病具有显著的防效。【结论】枯草芽孢杆菌S1对黄瓜幼苗具有明显的防病促生作用,具有重要的研究意义。 展开更多
关键词 黄瓜 黄瓜白粉病 分离鉴定 bacillus subtilis S1 16S rRNA基因
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Tu-1菌剂替代抗生素对獭兔肠道消化酶活力、盲肠菌群及生长性能的影响 被引量:5
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作者 苏可 刘艳玲 +2 位作者 姜军坡 王世英 梁亚男 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期134-138,共5页
为探讨Tu-1菌剂与抗生素对獭兔肠道消化酶活力、盲肠菌群及生长性能的影响,选取60只40日龄健康断奶獭兔,随机分为对照组(全价日粮)、抗生素组(全价日粮含20 mg/kg硫酸黏杆菌素)和菌剂组(全价日粮添加1.0‰Tu-1菌剂)。预试期5 d,正试期3... 为探讨Tu-1菌剂与抗生素对獭兔肠道消化酶活力、盲肠菌群及生长性能的影响,选取60只40日龄健康断奶獭兔,随机分为对照组(全价日粮)、抗生素组(全价日粮含20 mg/kg硫酸黏杆菌素)和菌剂组(全价日粮添加1.0‰Tu-1菌剂)。预试期5 d,正试期30 d。每天观察和记录獭兔腹泻和健康状况。于正试期开始前和结束后对獭兔空腹称体质量,并结算各组剩余饲料。试验期结束后屠宰獭兔,测定十二指肠、空肠、回肠、盲肠内容物中蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶活力及内容物pH值;检测盲肠中大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量及细菌总数。结果表明,菌剂组的十二指肠、空肠、回肠和盲肠蛋白酶活力比对照组分别提高13.05%、17.95%、21.27%和31.58%(P<0.05),淀粉酶活力比对照组分别提高13.93%、14.23%、45.51%和49.58%(P<0.05),脂肪酶活力比对照组分别提高11.71%、18.17%、19.22%和26.84%(P<0.05),纤维素酶活力比对照组分别提高69.84%、83.43%、111.06%和54.59%(P<0.01);抗生素组的十二指肠、空肠、回肠和盲肠纤维素酶活力比对照组降低了16.67%、28.57%、12.90%和23.41%(P<0.05),其他3种酶活力与对照组基本一致。菌剂组獭兔盲肠中大肠杆菌的数量比对照组极显著降低(P<0.01),乳酸杆菌和双歧杆菌的数量比对照组均显著提高(P<0.05),细菌总数基本一致;抗生素组盲肠中大肠杆菌和细菌总数均极显著低于对照组(P<0.01),乳酸杆菌和双歧杆菌略低。菌剂组盲肠的pH值比对照组降低0.72(P<0.05),其他各肠段的pH值稍低于对照组(P>0.05);抗生素组各肠段pH值与对照组相比无显著变化。菌剂组和抗生素组的日增体质量比对照组分别提高16.61%和13.74%(P<0.05);菌剂组的料重比、腹泻率与对照组相比分别降低了9.51%、68.11%(P<0.05);抗生素组的料重比、腹泻率比对照组分别降低了8.29%、64.03%(P<0.05)。因此,Tu-1菌剂在提高獭兔生产性能和� 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 Tu-1菌剂 獭兔 抗生素 肠道 消化酶 菌群 生长性能
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β-1,3-1,4葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 被引量:4
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作者 宋大新 张胜妹 +2 位作者 黄兴奇 郑伟军 陈永青 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1989年第4期386-392,共7页
以Bacillus subtilis为供体,pBR325载体,采用鸟枪法克隆了β-1,3-1,4葡聚糖酶基因bgl,并转化大肠杆菌后得到表达。结果表明,克隆子中插入的EcoRⅠ酶切片段长度为7.1kb,含有bgl基因。克隆子能合成专一地分解大麦β-葡聚糖的酶。宿主中的p... 以Bacillus subtilis为供体,pBR325载体,采用鸟枪法克隆了β-1,3-1,4葡聚糖酶基因bgl,并转化大肠杆菌后得到表达。结果表明,克隆子中插入的EcoRⅠ酶切片段长度为7.1kb,含有bgl基因。克隆子能合成专一地分解大麦β-葡聚糖的酶。宿主中的pBR325-bgl杂种质粒pFGl在无任何选择压力下较稳定。 展开更多
关键词 葡聚糖酶 大肠杆菌 基因 克隆 表达
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微生物发酵法生产利巴韦林的初步研究 被引量:4
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作者 武改红 赵希景 +2 位作者 徐庆阳 厉市生 陈宁 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期701-704,共4页
以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TM903(Ade–+8-AGr+MSOr)为生产菌株,考察了前体物1,2,4-三唑-3-甲酰胺(TCA)、MnSO4、温度、pH及培养基装量对发酵法生产利巴韦林的影响,确定了其摇瓶发酵工艺:培养至24h时添加10g/LTCA及10mg/LMnSO4,... 以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TM903(Ade–+8-AGr+MSOr)为生产菌株,考察了前体物1,2,4-三唑-3-甲酰胺(TCA)、MnSO4、温度、pH及培养基装量对发酵法生产利巴韦林的影响,确定了其摇瓶发酵工艺:培养至24h时添加10g/LTCA及10mg/LMnSO4,24h后每6h升温2℃,采用磷酸缓冲液调节pH,在500ml挡板三角瓶中培养基装液量为25ml。该工艺条件下经60h发酵,利巴韦林的摇瓶发酵水平达5.11g/L。 展开更多
关键词 利巴韦林 发酵 枯草芽孢杆菌 1 2 4-三唑-3-甲酰胺
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用转座子TnYLB-1构建枯草芽孢杆菌EDR4突变体库 被引量:4
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作者 陈永轩 王娜娜 +3 位作者 高小宁 秦虎强 黄丽丽 韩青梅 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期123-129,共7页
为筛选枯草芽孢杆菌EDR4拮抗相关基因,利用转座子TnYLB-1构建该菌株的插入突变体库。通过对种子液OD600值、转接培养液Ⅰ继续培养OD600值及转接培养液Ⅱ后的孵育时间3因素设计正交试验,转化过程中加入pMarA质粒的不同量及质粒与感受态... 为筛选枯草芽孢杆菌EDR4拮抗相关基因,利用转座子TnYLB-1构建该菌株的插入突变体库。通过对种子液OD600值、转接培养液Ⅰ继续培养OD600值及转接培养液Ⅱ后的孵育时间3因素设计正交试验,转化过程中加入pMarA质粒的不同量及质粒与感受态细胞共培养的不同时间研究2因素对转化效率的影响,确定pMarA对EDR4的转化体系。通过50℃高温诱导培养产生EDR4的插入突变体,挑取单菌落2 756个,构建EDR4的插入突变体库,随机挑选14株突变体经PCR检测转座子TnYLB-1序列,发现转座子已成功插入到EDR4基因组中;进一步通过Southern杂交验证,发现转座子TnYLB-1主要以单拷贝形式随机插入,也有部分多拷贝插入。此突变体库的建立可为以后筛选该菌株拮抗相关基因等研究奠定基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 转化 转座子TnYLB-1 pMarA质粒 转座诱变 突变体库
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响应面法优化Bacillus subtilis XH-13_UV3-8产葡萄糖-1-磷酸的发酵条件 被引量:4
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作者 史军花 许向华 +1 位作者 赵国罡 郑鸿雁 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期176-179,184,共5页
应用响应面法对Bacillus subtilis XH-13_UV3-8生产葡萄糖-1-磷酸的发酵条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计法对12个相关影响因素的效应进行评价,筛选出了有显著正效应的酵母浸粉浓度和K2HPO4·3H2O浓度和有显著负效应的p... 应用响应面法对Bacillus subtilis XH-13_UV3-8生产葡萄糖-1-磷酸的发酵条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计法对12个相关影响因素的效应进行评价,筛选出了有显著正效应的酵母浸粉浓度和K2HPO4·3H2O浓度和有显著负效应的pH等3个因素;接着用最陡爬坡路径逼近最大响应区域;最后通过Box-Behnken设计法,利用Design-Expert软件进行二次回归分析,得到主要因素的最佳条件为:酵母浸粉0.8%、K2HPO4·3H2O0.7%和pH6.6,在此优化培养条件下,发酵液中葡萄糖-1-磷酸浓度从6.85mg/mL提高到8.56mg/mL。 展开更多
关键词 响应面分析法 枯草芽孢杆菌 Plackett-Burman法 葡萄糖-1-磷酸 优化
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枯草芽胞杆菌9407TnYLB-1转座子突变体库的构建 被引量:4
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作者 范海燕 汝津江 +3 位作者 高坦坦 杨旸 王琦 李燕 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2016年第18期2082-2086,共5页
枯草芽胞杆菌9407(B9407)是1株对苹果轮纹病具有显著防效的生防菌株。为深入研究该菌株防病的分子机制,利用携带转座子TnYLB-1的温敏型质粒pMarA构建了B9407的突变体库。通过电击转化将pMarA转化至B9407,经过30℃培养,37℃转座诱变,50... 枯草芽胞杆菌9407(B9407)是1株对苹果轮纹病具有显著防效的生防菌株。为深入研究该菌株防病的分子机制,利用携带转座子TnYLB-1的温敏型质粒pMarA构建了B9407的突变体库。通过电击转化将pMarA转化至B9407,经过30℃培养,37℃转座诱变,50℃进行pMarA质粒消除,最后通过抗性筛选,获得3 500个转座子插入突变的单克隆,构建了B9407的突变体库。该转座子TnYLB-1的转座效率达到2.4×10-3,pMarA的质粒消除率达97.3%。随机挑选12株突变子进行PCR及Southern blotting杂交,结果表明:转座子TnYLB-1能够随机插入到B9407基因组上,大于90%的突变子为转座子单拷贝插入。B9407TnYLB-1转座子突变体库的构建为筛选和研究影响该菌株生防功能相关的基因并揭示其生防机制奠定了基础。 展开更多
关键词 植物病理学 枯草芽胞杆菌9407 转座子TnYLB-1 pMarA质粒 转座诱变 突变体库
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枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质研究 被引量:3
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作者 黄兴奇 郑伟军 +1 位作者 陈永青 宋大新 《西南农业学报》 CSCD 1990年第2期106-108,共3页
β-葡聚糖是大麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份,约占大麦总重量的10%。β-葡聚糖酶(Endo-1,3-1,4-β-Glucanase)能专一性地分解大麦β-葡聚糖,产生可利用的还原糖。因此,是啤酒酿造业,农副产品加工业中一个亟待开发应用的重要工业用酶... β-葡聚糖是大麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份,约占大麦总重量的10%。β-葡聚糖酶(Endo-1,3-1,4-β-Glucanase)能专一性地分解大麦β-葡聚糖,产生可利用的还原糖。因此,是啤酒酿造业,农副产品加工业中一个亟待开发应用的重要工业用酶。本文报道了对枯草杆菌(B.SubtiliS 1.88)中分离制备的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质的研究结果。1 展开更多
关键词 枯草杆菌 β-萄聚糖酶 酶学性质
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灭活枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响 被引量:3
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作者 赵霏霏 辛雅明 +1 位作者 杨丹 杨银凤 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期56-62,共7页
以体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞(ovine rumen epithelial cells,ORECs)为试验模型,旨在探究灭活枯草芽孢杆菌对ORECs绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。首先用不同浓度的灭活枯草芽孢杆菌(10^(7)、10^(8)、10^(9)、10... 以体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞(ovine rumen epithelial cells,ORECs)为试验模型,旨在探究灭活枯草芽孢杆菌对ORECs绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。首先用不同浓度的灭活枯草芽孢杆菌(10^(7)、10^(8)、10^(9)、10^(10)、10^(11)CFU/mL)诱导ORECs 8 h,通过荧光定量PCR(qPCR)和ELISA的方法检测ORECs SBD-1表达量在mRNA水平和蛋白水平的变化,确定灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECs SBD-1表达最高的菌液浓度为最佳刺激浓度。以该浓度的灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECS不同时间(2 h、4 h、8 h、12 h),通过qPCR和ELISA的方法检测ORECs SBD-1表达量在mRNA水平和蛋白水平的变化,从而筛选出诱导SBD-1表达的最佳时间。结果表明,10^(8)~10^(11)CFU/mL的灭活枯草芽孢杆菌可以显著的促进ORECs SBD-1的表达,其中灭活枯草芽孢杆菌的浓度为10^(10)CFU/mL时诱导ORECs 8h时SBD-1 mRNA表达量最高,与对照组相比差异极显著(P<0.01);SBD-1蛋白表达量以10^(10)CFU/mL灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECs 12 h时达到最大,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结果证明了热灭活后的枯草芽孢杆菌仍可以诱导SBD-1表达,其诱导SBD-1表达的有效成分并未被热灭活,为后续确定枯草芽孢杆菌诱导SBD-1表达的有效成分的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 绵羊瘤胃上皮细胞 枯草芽孢杆菌 β-防御素-1 荧光定量PCR
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应用比色法检测枯草芽孢杆菌变异菌株中1-脱氧野尻霉素含量 被引量:2
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作者 龙玲 杨艳 朱乃硕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期187-192,共6页
为寻找测定枯草芽孢杆菌黑色变种突变株Bacillus subtilis var.niger-231(B-231)的发酵液中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)的新方法并提高其产发酵液中DNJ的含量。在有铜离子的存在下,DNJ与二硫化碳反应,用有机溶剂对产物萃取... 为寻找测定枯草芽孢杆菌黑色变种突变株Bacillus subtilis var.niger-231(B-231)的发酵液中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)的新方法并提高其产发酵液中DNJ的含量。在有铜离子的存在下,DNJ与二硫化碳反应,用有机溶剂对产物萃取后在440 nm进行光度测定,得到DNJ含量。再采用紫外诱变方法处理突变株B-231。绘制了检测DNJ标准品的标准曲线,对测定DNJ的新方法做了精密度、灵敏度、准确度以及产物的稳定性的探讨,设计正交试验优化了反应条件,并将此方法运用到细菌发酵液中DNJ含量的测定中,通过遗传诱变手段处理原始细菌B-231,最终筛选到一株高产DNJ的菌株,命名为B.subtilis var.niger-431(B-431),DNJ含量达87.3 mg/L,其产生DNJ的量较原始菌株原突变株提高了4.2倍。首次提出了一种快速测定细菌发酵液中的1-脱氧野尻霉素的新方法,紫外诱变手段使细菌产生DNJ的能力有较大提高。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 1-脱氧野尻霉素 Α-糖苷酶抑制剂 紫外诱变
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表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽孢杆菌的制备及其免疫效果评价 被引量:2
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作者 陈志 丁可欣 +3 位作者 林霞琳 黄潇航 黄志坚 殷光文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期408-413,共6页
枯草芽孢杆菌可以作为外源蛋白的表达系统,其作为重组蛋白的递呈载体具有很大优势,而纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高目标蛋白抗原性的佐剂。为增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,本研究从已构建的重组质粒中扩增E... 枯草芽孢杆菌可以作为外源蛋白的表达系统,其作为重组蛋白的递呈载体具有很大优势,而纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高目标蛋白抗原性的佐剂。为增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,本研究从已构建的重组质粒中扩增EDA-EmIMP1和EmIMP1基因片段,并构建重组表达质粒pHT01-EDA-EmIMP1和pHT01-EmIMP1,将获得的重组质粒转化枯草芽孢杆菌感受态细胞,制备的重组枯草芽孢杆菌鉴定正确后增殖培养。将实验鸡分为5组,分别是:EDA组(免疫pHT01-EDA-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、EmIMP1组(免疫pHT01-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、枯草芽孢杆菌组、空白组(PBS)和攻虫对照组。每组鸡口服相应菌液(0.3mL1010cfu/mL菌液/只)进行免疫,每隔2周免疫1次,共免疫3次,每次免疫2周后采血。三免2周后攻虫。采用ELISA方法检测各组鸡血清中EmIMP1的抗体滴度以及细胞因子IL-10和IL-4的含量;并对攻虫后各组鸡的增重、肠道病变计分以及卵囊排出量进行计算。结果显示:制备的重组枯草芽孢杆菌可以表达目的蛋白,蛋白大小为70ku。ELISA检测结果显示,EDA组的抗体效价最高,约为1∶3200;三免EDA组的IL-10和IL-4的含量均显著高于其它组(p<0.05);EDA组的卵囊排出量显著低于其它组,而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量也均显著低于攻虫组(p<0.05);EDA组对肠道保护效果显著优于其它经过攻虫处理的组(p<0.05),而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组之间无显著差异;EDA组增重显著高于攻虫组和枯草芽孢杆菌组(p<0.05)。本研究证实枯草芽孢杆菌作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 胞内表达 EDA佐剂 EmIMP1 巨型艾美耳球虫
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Effects of nitrogen ion irradiation on endoglucanase activity and gene mutation of Bacillus subtilis Bac01 被引量:2
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作者 LU Jie MAO Peihong +2 位作者 JIN Xiang YU Long YING Hanjie 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 2009年第5期271-276,共6页
Bacillus subtilis Bac01 was mutated by 15 keV N+ ions of 1.5×1016 cm-2. The mutant strain Bac11 with high yield of endoglucanase was isolated using carboxymethylcellulose sodium and congo red indicative plates. I... Bacillus subtilis Bac01 was mutated by 15 keV N+ ions of 1.5×1016 cm-2. The mutant strain Bac11 with high yield of endoglucanase was isolated using carboxymethylcellulose sodium and congo red indicative plates. It exhibited higher endoglucanase activitiy (381.89IU) than the original strain Bac01 (93.33IU). Two 1,500 bp endoglucanase gene fragments were obtained with PCR amplification from B. subtilis Bac01 and mutant strain Bac11. BLAST comparison result indicated that 10 nucleotides mutated. Bioinformatics methods were used to analyze the two predicted amino acid sequences, and it was found that 5 amino acid residues changed, being all in the cellulose-binding domain of endoglucanase. 展开更多
关键词 放射性 能级 核技术 研究 氮离子
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紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选 被引量:1
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作者 马加强 吴明 +1 位作者 马礼鹏 刘博 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期18-20,72,共4页
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌,具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点,是一种重要工业酶和工业制剂的菌种,被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵... 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌,具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点,是一种重要工业酶和工业制剂的菌种,被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵能力,采用紫外线照射的方法诱导筛选高产菌株。对通过紫外线诱导提高枯草芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶、α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,简称α-ALDC)、3-羟基丁酮(Acetoin)和葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,简称G-1-P)能力的条件进行了比较。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 紫外线诱导 酶制剂 3-羟基丁酮 葡萄糖-1-磷酸
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分泌型表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽胞杆菌的构建及其免疫原性研究 被引量:1
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作者 陈志 丁可欣 +3 位作者 林霞琳 李元凯 黄志坚 殷光文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期199-205,共7页
枯草芽胞杆菌有着异源蛋白表达系统,纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高相关蛋白的抗原性的佐剂,为了增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,笔者对枯草芽胞杆菌分泌表达载体作为EDA分子佐剂重组亚单位疫苗的递呈载体的... 枯草芽胞杆菌有着异源蛋白表达系统,纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高相关蛋白的抗原性的佐剂,为了增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,笔者对枯草芽胞杆菌分泌表达载体作为EDA分子佐剂重组亚单位疫苗的递呈载体的功能进行了研究,构建质粒pHT43-EDA-EmIMP1和pHT43-EmIMP1,将获得的重组质粒转化到枯草芽胞杆菌感受态中。将该重组菌对鸡饲喂,进行免疫学试验并做免疫效果评价。结果显示,该重组枯草芽胞杆菌可以成功表达目的蛋白,蛋白大小为70 ku。ELISA检测EDA组的效价最高,其滴度在3 200左右;三免EDA组的IFN-γ浓度显著高于其他组(P<0.05);三免EDA组和EmIMP1组的IL-12/70浓度显著高于PBS组(P<0.05);CD4+T细胞群的检测显示,EDA组的CD4+T细胞群比例显著高于枯草芽胞杆菌组和PBS组(P<0.05);EDA组、枯草芽胞杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量都显著低于攻虫组(P<0.05);病变计分可以看出,EDA组对肠道保护效果显著优于除空白组外的其他组(P<0.05)。以上各项免疫学指标表明,枯草芽胞杆菌分泌型表达载体作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 分泌型蛋白 EDA佐剂 EmIMP1 巨型艾美耳球虫
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氮离子诱变筛选内切葡聚糖酶高产菌株及其基因突变研究 被引量:1
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作者 吕杰 金湘 +3 位作者 马媛 毛培宏 虞龙 应汉杰 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期6-9,共4页
目的:离子注入枯草芽孢杆菌筛选高产内切葡聚糖酶突变菌株,同时进行其酶活性研究,并克隆该基因,研究离子注入对其诱变效应。方法:低能氮离子重复注入枯草芽孢杆菌,筛选获得1株高产内切葡聚糖酶突变菌株Bac11。DNS法测定酶活性。PCR扩增... 目的:离子注入枯草芽孢杆菌筛选高产内切葡聚糖酶突变菌株,同时进行其酶活性研究,并克隆该基因,研究离子注入对其诱变效应。方法:低能氮离子重复注入枯草芽孢杆菌,筛选获得1株高产内切葡聚糖酶突变菌株Bac11。DNS法测定酶活性。PCR扩增获得出发菌株Bac01和突变菌株Bac11内切葡聚糖酶基因,并对核酸序列及预测氨基酸序列进行多重比对。结果:突变菌株Bac11内切葡聚糖酶活性从93.33IU提高到381.89IU。多重比对Bac01和Bac11内切葡聚糖酶基因编码区1500bp序列,当中有10个碱基发生突变,预测氨基酸序列中有5个氨基酸残基发生变化,且都在其基因纤维素结合域部分。结论:低能氮离子重复注入对枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶活性及其基因有明显的诱变累加效应。 展开更多
关键词 离子注入 枯草芽孢杆菌 内切葡聚糖酶 活性 基因突变
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β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因亚克隆研究
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作者 黄兴奇 郑伟军 +1 位作者 陈永青 宋大新 《西南农业学报》 CSCD 1990年第4期113-115,共3页
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(endo-1,3-1,4- -Glucanase)能专一性地分解大麦、燕麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份β-1,3-1,4-葡聚糖,产生还原糖,从而提高大麦和燕麦可利用糖源的含量,促进淀粉的释放。在啤酒酿造中,该酶在提高麦芽利用率,增加... β-1,3-1,4-葡聚糖酶(endo-1,3-1,4- -Glucanase)能专一性地分解大麦、燕麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份β-1,3-1,4-葡聚糖,产生还原糖,从而提高大麦和燕麦可利用糖源的含量,促进淀粉的释放。在啤酒酿造中,该酶在提高麦芽利用率,增加麦汁浸出量,加快糖化液和啤酒的过滤速度,避免啤酒浑浊等方面均有重要作用。最近,作者从Bacillus subtilis 1.88中分离到了含bgls基因的7.1kbEcoRI DNA片段,携带该片段的重组质粒pFG(表达出专一性降解大麦β-1,3-1,4-葡聚糖的酶活性。为了研究bgls基因的结构、功能和表达等特征,我们对bgls基因进行了亚克隆。 展开更多
关键词 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 基因 亚克隆
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