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猪伪狂犬病病毒的分离鉴定 被引量:16
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作者 杨庆芳 宁官保 李俊达 《山西农业科学》 2011年第8期886-889,共4页
从山西某猪场发病猪的脑组织中分离到1株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒株,通过BHK-21细胞培养、病毒毒力滴定、中和试验、PCR检测病毒方法对该分离株进行了鉴定,结果发现:分离的病毒在BHK-21细胞培养盲传4代后出现典型细胞病变;用BHK-21细... 从山西某猪场发病猪的脑组织中分离到1株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒株,通过BHK-21细胞培养、病毒毒力滴定、中和试验、PCR检测病毒方法对该分离株进行了鉴定,结果发现:分离的病毒在BHK-21细胞培养盲传4代后出现典型细胞病变;用BHK-21细胞测定其毒价TCID50为10-8.042/0.1 mL;PCR体外扩增可见其扩增片段与预期目的条带相一致;据此分离病毒株的上述特征,鉴定该病毒为猪伪狂犬病病毒,并命名为SX09。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 分离 鉴定 bhk-21
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动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析 被引量:11
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作者 张德礼 李六金 +21 位作者 夏耕田 何旭玉 高步先 白晓鸿 黄高升 刘尚高 阎隆飞 方福德 胡春雷 王黎军 姜焕宏 冯阿曼 张广民 安社刚 任远强 郭建民 胡淑贤 樊军喜 牛永利 宋占军 李迎 樊胜军 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期327-344,T001,T002,共20页
在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系(F-81、CRFK、MDCK、Vero、Vero-2、MA-104、BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型、G带核型、染色体数目变异率、... 在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系(F-81、CRFK、MDCK、Vero、Vero-2、MA-104、BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型、G带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析,了解7种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照,筛选出无致癌/致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系(F-81、CRFK、Vero、Vero-2)或极低致癌性的MDCK细胞系用于制苗,发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,得到一些100%成瘤和100%不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗,都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移(致恶性横纹肌样瘤的BHK-21和Vero细胞株),其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。 展开更多
关键词 动物肾细胞系 人类子宫颈癌细胞系 猪肾原代细胞 染色体核型 G带核型 遗传变异率 数目变异 结构畸变
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猪伪狂犬病毒的增殖、纯化和鉴定 被引量:8
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作者 王大伟 李学伍 +1 位作者 王丽 史西保 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第11期125-127,共3页
以伪狂犬病毒(PRV)活疫苗Bartha弱毒株接种于幼仓鼠肾细胞(BHK-21)使其增殖,通过PCR方法鉴定了病毒。以组织细胞半数感染剂量(TCID50)对病毒效价进行了评定,利用蔗糖密度梯度离心法纯化了病毒。结果表明,培养的病毒滴度为103.25TCID50/... 以伪狂犬病毒(PRV)活疫苗Bartha弱毒株接种于幼仓鼠肾细胞(BHK-21)使其增殖,通过PCR方法鉴定了病毒。以组织细胞半数感染剂量(TCID50)对病毒效价进行了评定,利用蔗糖密度梯度离心法纯化了病毒。结果表明,培养的病毒滴度为103.25TCID50/mL,纯化后的病毒经SDS-PAGE电泳显示,获得了较纯的蛋白条带。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 仓鼠肾细胞 差速离心 纯化 鉴定
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重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达 被引量:4
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作者 郭爱疆 才学鹏 +5 位作者 贾万忠 房永祥 乔军 刘红霞 潘小梅 景志忠 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期2572-2578,共7页
【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构... 【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 AgR基因 重叠延伸PCR 真核表达 bhk-21
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蓝舌病病毒感染对BHK-21细胞中Ⅰ型干扰素应答的影响
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作者 罗世美 陈韵伊 +15 位作者 李其沙 周艳梅 王怡斐 廖芯玉 胡雪柔 魏远健 李梦琴 朱萌 张迅 陈贝蕊 马鲜平 谢佳芮 寇美玲 苗海生 李芳 易华山 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1639-1644,1690,共7页
蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)是一种严重危害绵羊等反刍动物的一种虫媒病毒,为研究蓝舌病病毒感染与宿主细胞干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。研究以感染复数(MOI)为1的BTV诱导18、24、36 h的BHK-21细胞通过实时荧光定量PCR分析... 蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)是一种严重危害绵羊等反刍动物的一种虫媒病毒,为研究蓝舌病病毒感染与宿主细胞干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。研究以感染复数(MOI)为1的BTV诱导18、24、36 h的BHK-21细胞通过实时荧光定量PCR分析干扰素通路基因mRNA表达特征,以及Western blot分析MDA5、TRAF3、RIG-Ⅰ和TBK1蛋白表达。结果表明,在诱导24 h时,干扰素信号通路基因表达的变化最为明显,IFN-α、IFN-β、RIG-Ⅰ、TBK1、MDA5、VISA、TRAF3基因的mRNA表达水平呈上调表达,而IKKε、TRAF6基因的mRNA表达水平呈下调表达,在蛋白水平上MDA5、TBK1蛋白上调表达而RIG-Ⅰ、TRAF3蛋白下调表达,表明BTV感染诱导BHK-21细胞中Ⅰ型干扰素免疫应答,为进一步探究IFN-Ⅰ信号通路调控基因在BTV感染的宿主细胞抗病毒免疫机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 天然免疫 Ⅰ型干扰素 bhk-21
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BHK-21细胞悬浮驯化及对新城疫病毒悬浮培养工艺研究 被引量:4
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作者 徐宏军 张凌云 +5 位作者 侯野 姜磊 董婷婷 郑杰 张乾顺 马宁宁 《中国兽药杂志》 2020年第7期1-8,共8页
为建立新城疫病毒在BHK-21细胞的无血清全悬浮培养工艺以获得高滴度和高纯度的新城疫悬浮培养抗原,通过悬浮培养驯化和筛选获得了形态良好、稳定传代的BHK-21-sc悬浮细胞株;该细胞以初始密度0.5×10^6 cells/mL接种,培养72 h可增殖... 为建立新城疫病毒在BHK-21细胞的无血清全悬浮培养工艺以获得高滴度和高纯度的新城疫悬浮培养抗原,通过悬浮培养驯化和筛选获得了形态良好、稳定传代的BHK-21-sc悬浮细胞株;该细胞以初始密度0.5×10^6 cells/mL接种,培养72 h可增殖到6×10^6 cells/mL,细胞活率达95%。以5 L生物反应器悬浮培养BHK-21-sc细胞,对鸡新城疫病毒La Sota株的接毒剂量、TPCK胰酶添加浓度、病毒培养温度、收获时间等工艺参数进行了摸索和优化;并在5L-16L-50L生物反应器中进行逐级放大,以优化后的鸡新城疫悬浮培养工艺进行3个批次病毒悬浮培养。最终确定鸡新城疫病毒La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞株的悬浮培养工艺:BHK-21-sc细胞悬浮培养的第3天按照感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.005接种病毒,并添加终浓度为5μg/mL的TPCK胰酶,于33℃培养72 h后收获病毒液。应用该悬浮培养工艺在5、16、50 L反应器上悬浮培养BHK-21-sc悬浮细胞株生产鸡新城疫病毒HA滴度不低于9log2,病毒含量不低于106.0 TCID 50/0.1mL。表明BHK-21-sc细胞无血清全悬浮生产鸡新城疫病毒工艺稳定,可以实现逐级放大和规模化生产。 展开更多
关键词 bhk-21 鸡新城疫病毒 反应器 悬浮培养
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口蹄疫病毒多基因重组质粒的体外表达及衣壳组装 被引量:4
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作者 郭慧琛 刘在新 +3 位作者 孙世琪 冷青文 刘湘涛 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期228-234,共7页
PCR扩增获得包含口蹄疫病毒P1、2A、3C、3D及部分2B编码区的目的基因片段P12X3C3D,将P12X3C3D经AflⅡ和XbaI双酶切后,定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3.1(+);另将PCR扩增获得的P12X3C3D直接与真核表达质粒载体pTARGETTM连接,进行筛选... PCR扩增获得包含口蹄疫病毒P1、2A、3C、3D及部分2B编码区的目的基因片段P12X3C3D,将P12X3C3D经AflⅡ和XbaI双酶切后,定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3.1(+);另将PCR扩增获得的P12X3C3D直接与真核表达质粒载体pTARGETTM连接,进行筛选、鉴定及DNA序列分析,分别获得重组质粒pcDNA3.1/P12X3C3D、pTARGET/P12X3C3D。将重组质粒分别转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原,用磷钨酸负染,以电子显微镜观察转染重组质粒的细胞中组装的口蹄疫病毒空衣壳。结果表明,口蹄疫病毒基因组片段正确克隆到真核表达质粒载体上,重组质粒pcDNA3.1/P12X3C3D、pTARGET/P12X3C3D均可在BHK-21细胞中表达FMDV目的蛋白。其中重组质粒pTARGET/P12X3C3D表达的口蹄疫病毒抗原蛋白,能够在细胞内正确组装成病毒空衣壳。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 多基因重组质粒 体外表达 衣壳 组装 口蹄疫 基因疫苗
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虎源犬瘟热病毒核酸疫苗构建及免疫原性初步研究 被引量:2
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作者 张贺 翟少伦 +3 位作者 罗满林 吕殿红 温肖会 魏文康 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第21期172-175,179,264,共6页
为了研究虎源犬瘟热病毒(CDV)主要保护性抗原基因(H基因和F基因)的免疫原性,参照GenBank上发表的CDV基因全长序列(KP793921)设计了两对引物,特异性扩增CDV的F和H基因,利用pcDNA3. 1(+)真核表达载体构建了CDV核酸疫苗(质粒pcDN... 为了研究虎源犬瘟热病毒(CDV)主要保护性抗原基因(H基因和F基因)的免疫原性,参照GenBank上发表的CDV基因全长序列(KP793921)设计了两对引物,特异性扩增CDV的F和H基因,利用pcDNA3. 1(+)真核表达载体构建了CDV核酸疫苗(质粒pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H),通过脂质体介导法将这两种真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blot检测重组质粒在体外细胞的表达情况;通过肌肉免疫Balb/c小鼠,检测重组质粒在体内的表达情况。结果表明:真核表达载体pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H被成功构建,F、H蛋白均具有免疫原性,但诱导抗体效价不高,有待进一步研究改善。说明pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H重组疫苗可以诱导产生抗CDV的中和抗体,但是抗体效价较低,需要进一步试验分析解决。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 F基因 H基因 真核表达 PCDNA3.1(+) bhk-21
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人GLP-1R基因转染BHK细胞及重组细胞的应用 被引量:2
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作者 朱振洪 王同映 黄岩山 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期118-121,共4页
为了构建表达人胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因的BHK细胞株,并利用该重组细胞对GLP-1等相关肽进行活性测定,首先通过酶切、连接方式将人GLP-1R基因克隆至真核表达载体pCDNA3.(1+)中,然后用脂质体转染法将重组质粒转染至BHK-21细胞,... 为了构建表达人胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因的BHK细胞株,并利用该重组细胞对GLP-1等相关肽进行活性测定,首先通过酶切、连接方式将人GLP-1R基因克隆至真核表达载体pCDNA3.(1+)中,然后用脂质体转染法将重组质粒转染至BHK-21细胞,转染后的细胞经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株。经过该细胞株RT-PCR验证,结果证实目的基因已整合至BHK-21细胞基因组中,并获得成功转录和表达。活性检测实验表明该重组细胞株经过GLP-1的刺激后,其细胞中的cAMP含量得到明显提升。该细胞株的构建为GLP-1及相关肽的活性测定奠定了基础。 展开更多
关键词 GLP-1受体 bhk-21 CAMP
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BHK-21和BSR细胞用于RFFIT检测的一致性研究 被引量:2
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作者 李云云 于鹏程 +4 位作者 申辛欣 余春 吕新军 裴秋玲 唐青 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第8期827-828,共2页
目的比较BSR和BHK-21两种细胞分别引入快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系后其检测结果的差异。方法将BSR、BHK-21两种细胞分别引入RFFIT体系后,检测106份人血清样品中狂犬病毒中和抗体,并分析结果的相关性和一致性。结果两种方法结果... 目的比较BSR和BHK-21两种细胞分别引入快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系后其检测结果的差异。方法将BSR、BHK-21两种细胞分别引入RFFIT体系后,检测106份人血清样品中狂犬病毒中和抗体,并分析结果的相关性和一致性。结果两种方法结果之间有较好的直线相关关系(r=0.859),并有正向回归关系,直线回归方程:Y=2.261+0.737X(P<0.01);经同一份样品的重复检验,两种方法检测的稳定性较好。结论 BHK-21细胞系可以用于国内RFFIT检测体系。 展开更多
关键词 研究 bhk-21 BSR 相关性 稳定性
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靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选 被引量:1
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作者 王安涛 陈创夫 +3 位作者 乔军 张辉 张娜 胡圣伟 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第5期520-525,共6页
本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段,选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒,转染细胞后接种病毒,通过细胞毒液的TCID_(50)测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊... 本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段,选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒,转染细胞后接种病毒,通过细胞毒液的TCID_(50)测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示,重组表达质粒组的抑制率在63%以上,其中以pSI-W2最为明显,抑制率为93.8%。该研究应用RNAi技术在细胞水平筛选出了能够高效抑制山羊痘病毒增殖的干扰片段,为抗山羊痘病毒转基因羊的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RNAI 山羊痘病毒 bhk-21 抑制
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BHK-21悬浮细胞培养条件筛选及口蹄疫病毒悬浮培养工艺研究 被引量:1
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作者 施程洪 陆礼琼 +8 位作者 李彦荣 吴海燕 段春平 李应福 赵路路 兰虎云 彭正啟 王继华 刘术新 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第18期119-129,共11页
为了实现在幼地鼠肾细胞(BHK-21细胞)低血清全悬浮培养工艺下获得更高含量的口蹄疫病毒(FMDV),试验对比了4株不同来源的BHK-21悬浮细胞的培养特性,按体积1%、2%和5%分别接种O型、A型FMDV,接种后4,8,12,16,20,24小时取样进行146S、半数... 为了实现在幼地鼠肾细胞(BHK-21细胞)低血清全悬浮培养工艺下获得更高含量的口蹄疫病毒(FMDV),试验对比了4株不同来源的BHK-21悬浮细胞的培养特性,按体积1%、2%和5%分别接种O型、A型FMDV,接种后4,8,12,16,20,24小时取样进行146S、半数致死量(LD)对比研究,筛选形态良好、培养特性更稳定的BHK-21悬浮细胞株;以摇瓶悬浮培养筛选得到的BHK-21悬浮细胞株,使用O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株,从接种剂量、活细胞密度(VCD)、病毒培养温度、病毒培养pH值、换液体积比例等工艺参数对病毒146S表达的影响进行了研究,并在7.5,50,500 L生物反应器中逐级放大,进行了O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株各3个批次病毒液悬浮培养研究,确定O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株接种BHK-21悬浮细胞的培养工艺。结果表明:筛选得到1株形态良好、培养特性更稳定的BHK-21-CP005悬浮细胞株;O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株在摇瓶低血清悬浮培养的BHK-21-CP005悬浮细胞株中增殖的最适条件为,当细胞培养48 h, VCD达4.5×10~6/mL,按体积2%接种O/HB/HK/99株和AF/72株,培养温度为36.5~37.0℃,pH值为7.30~7.50,按4∶5体积比例换液,接种病毒16~20 h后收获病毒液,病毒146S含量不低于9.0μg/mL,LD不低于1×10/0.2 mL。说明使用BHK-21-CP005株低血清全悬浮培养生产更高含量的FMDV工艺稳定,可以实现规模化生产。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 bhk-21 低血清 反应器 悬浮培养 146S 半数致死量
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用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测 被引量:1
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作者 邵军军 常惠芸 +3 位作者 林彤 丛国正 独军政 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1170-1173,共4页
为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2~10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段... 为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2~10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段标记法以地高辛-11-dUTP标记,用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体.结果显示,从感染FMDV后2~10 h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子,这些病毒粒子大多集中在核周围,随感染时间延长阳性染色信号增强.这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的,同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖. 展开更多
关键词 原位杂交 FMDV 探针 bhk-21
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鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变 被引量:1
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作者 明晓波 张颖 +1 位作者 刘澜澜 魏萍 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期793-797,861,共6页
构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5... 构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5代,用间接免疫荧光检测各代次病毒感染转染BHK-21细胞,可见随着代次增加,感染程度增加;病毒毒力EID50逐渐增加,第5代时原病毒毒力基本恢复,半定量RT-PCR检测各代次病毒也可见病毒含量逐渐增加。结果表明,鸡氨肽酶N转染至IBV非易感的BHK-21细胞系后,BHK-21细胞变得对IBV敏感,鸡氨肽酶N可能用作IBV感染的细胞受体。 展开更多
关键词 氨肽酶N 基因克隆 真核转染 RT-PCR 间接免疫荧光 绿色荧光蛋白 红色荧光标记二抗 bhk-21
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应用一次性生物反应器大规模培养BHK-21细胞 被引量:2
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作者 杨凡 李峦峰 +4 位作者 宋羚羚 郭芝香 杜春玲 孙仁峰 惠觅宙 《机电信息》 2011年第11期30-33,44,共5页
采用20mL、220mL、10L、100L一次性激流&灌注式生物反应器连续灌注培养BHK-21细胞,通过控制pH、DO等工艺参数,得到稳定的培养BHK-21细胞的大规模培养工艺。从20mL、200mL、10L到100L实现了细胞数的逐级放大,认为该工艺为细胞反应器... 采用20mL、220mL、10L、100L一次性激流&灌注式生物反应器连续灌注培养BHK-21细胞,通过控制pH、DO等工艺参数,得到稳定的培养BHK-21细胞的大规模培养工艺。从20mL、200mL、10L到100L实现了细胞数的逐级放大,认为该工艺为细胞反应器大规模生产动物疫苗奠定了技术基础。 展开更多
关键词 bhk-21 大规模细胞培养 一次性生物反应器 细胞载体 激流&灌注式生物反应器
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Microcalorimetric Study of Energy Metabolism of HSV-2 and FMDV Infection Processes
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作者 张恒 郑从义 +3 位作者 李杰 顾朝江 汪存信 刘欲文 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期182-186,共5页
The metabolic thermogenic power data of the HSV-2 infected HeLa cells and the FMDV infected BHK-21 cells were determined by LKB-2277 bioactivity monitor. The aim of the study was to investigate the difference of the c... The metabolic thermogenic power data of the HSV-2 infected HeLa cells and the FMDV infected BHK-21 cells were determined by LKB-2277 bioactivity monitor. The aim of the study was to investigate the difference of the cell metabolism under the action of two different viruses and the effects of hyperthermia and drugs on it. The results illustrated that the metabolic thermogenic power of infected cells was larger than the uninfected ones and there was a significant difference between the metabolism heat released by the two types of infected cells. From the maximal thermal power and total metabolism heat, the infection process was observed to be thermosensitive and could be inhibited by interferon. Our experiments also revealed that 6 month storage of FMDV could attenuate its virulence and infectivity. The study shows that microcalorimetry is a potent tool to investigate the metabolism of virus infection process. 展开更多
关键词 HSV-2 FMDV HeLa cell line bhk-21 cell line METABOLISM MICROCALORIMETRY
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猪乙脑病毒分离株CSF.XZ2D在BHK21细胞上的传代培养及E基因序列分析
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作者 梁晓晓 罗俊 +5 位作者 禹乐乐 滕蔓 胡博 杨艳艳 张改平 钟秀会 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期153-157,共5页
为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征及其遗传基因的稳定性,将猪乙脑病毒分离株CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定,氨基... 为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征及其遗传基因的稳定性,将猪乙脑病毒分离株CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定,氨基酸位点E271(E→V)和E278(V→L)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如E279和E312分别出现K→M→K和K→R→K→R的反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。 展开更多
关键词 乙脑病毒 CSF XZ-2D bhk-21 传代培养 E基因 序列分析
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Expression of the Capsid Precursor Protein gene of Foot-and-mouth Disease Virus and Green Fluorescent Protein Gene in BHK-21 Cells Mediated by Retroviral Vector
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作者 LI Jiong LIU Yan-hong +4 位作者 AN Fang-lan LIU Jun-lin LIU Xiang-tao SHANG You-jun YIN Hong 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期70-75,共6页
We have constructed a retroviral vector mediated mammalian cell expression system of the capsid precursor protein of foot-and-mouth disease virus(FMDV).The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constr... We have constructed a retroviral vector mediated mammalian cell expression system of the capsid precursor protein of foot-and-mouth disease virus(FMDV).The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constructed by sequentially inserting capsid precursor protein gene(P1) of FMDV and enhanced green fluorescent protein gene(EGFP) into pBABEpuro.The recombinant retroviral vector and the pVSV-G plasmid were co-transfected into packaging cells(GP2-293) by liposomemediated transduction to produce the pseudovirus.The pseudovirus was used to infect BHK-21 cells and resistant cells were screened with puromycin.Green fluorescent proteins were observed by fluorescence microscopy and expression of the capsid precursor protein gene of FMDV was detected by indirect immunofluorescence.The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constructed successfully.The capsid precursor protein of FMDV and green fluorescent protein were expressed in BHK-21 cells.The mammalian cell expression system for the capsid precursor protein of FMDV has been constructed successfully,which lays the foundation of development of a FMDV subunit vaccine. 展开更多
关键词 retroviral vector FMDV capsid precursor protein gene green fluorescent protein gene bhk-21 cell
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流行性乙型脑炎病毒在BHK—21细胞上的蚀斑技术研究
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作者 邵文爱 张丽媛 《山西预防医学杂志》 2001年第1期1-2,共2页
本文运用BHK-21细胞进行了流行乙型脑炎病毒的蚀斑试验,同时研究了不同因素对蚀斑的影响,并与数量细胞病变作了比较。结果表明:此法是一种较精确的滴定流行性乙型脑炎病毒的方法,为以后研究流行乙型脑炎的病毒学和血清学打下了基础。
关键词 流行性乙型脑炎病毒 bhk-21 细胞 蚀斑技术
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BHK-21细胞表面形态周期性变化的扫描电镜观察
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作者 何大澄 翟中和 《解剖学报》 CAS 1982年第3期319-323,346,共6页
本实验取生长于玻片上的BHK-21细胞单层,经戊二醛固定和CO_(2)临界点干燥,用扫描电子显微镜进行了观察。描述了细胞形态及几种主要表面结构在有丝分裂周期中的演变过程。并对衰老状态的细胞做了观察。对另外的三种细胞:HeLa细胞、IB-RS-... 本实验取生长于玻片上的BHK-21细胞单层,经戊二醛固定和CO_(2)临界点干燥,用扫描电子显微镜进行了观察。描述了细胞形态及几种主要表面结构在有丝分裂周期中的演变过程。并对衰老状态的细胞做了观察。对另外的三种细胞:HeLa细胞、IB-RS-2细胞和鸡胚成纤维细胞,经同样处理,作了对照研究。表明各种细胞的表面形态在周期中有着共同的变化规律。它们的主要表面结构微绒毛,虽然形状和分布各不相同,却都具有大致相同的直径。通过用细胞松弛素B和秋水仙素处理细胞,证明微绒毛和小泡主要是与细胞内的微丝有关;而丝足则主要是与微管有关。 展开更多
关键词 细胞表面 小泡 bhk-21 微绒毛 丝足 细胞形态 周期性变化 扫描电镜观察
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