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PTD-bcr/abl融合癌蛋白片段的表达及其跨膜转运 被引量:8
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作者 梁英民 孙强 +4 位作者 蒋姗姗 陈萍 王冀姝 刘利 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期377-380,共4页
目的探讨蛋白转导结构域(PTD)介导的转导bcr/abl癌蛋白片段的方法,为进行免疫治疗提供实验依据。方法合成编码PTD的基因片段,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr/abl基因片段融合,在大肠杆菌中表达。将纯化的融合蛋白PTD-bcr/abl... 目的探讨蛋白转导结构域(PTD)介导的转导bcr/abl癌蛋白片段的方法,为进行免疫治疗提供实验依据。方法合成编码PTD的基因片段,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr/abl基因片段融合,在大肠杆菌中表达。将纯化的融合蛋白PTD-bcr/abl与HL-60 细胞共孵育,用Western blot分析融合蛋白的跨膜转运。结果PTD基序可介导bcr/abl蛋白由细胞外跨膜转导进入细胞内。结论这一结果可能为应用外源蛋白负载(loading)抗原提呈细胞(APC)提供新的途径。 展开更多
关键词 蛋白转导 bcr/ABL 慢性粒细胞白血病 基因表达 融合癌蛋白片段
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蛋白转导结构域-bcr/abl融合基因的构建和表达 被引量:8
2
作者 梁英民 孙强 +5 位作者 蒋姗姗 王冀姝 吴绒丽 陈萍 刘利 韩骅 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期5-8,共4页
目的 构建含蛋白转导结构域 (PTD)与慢性粒细胞白血病 (CML)bcr/abl融合基因片段的质粒 ,并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CMLbcr/abl基因片段 ,经DNA测序后 ,与合成编码PTD的DNA片段一起插入质粒pET 16b ,构建表达载体pEPb ,转化... 目的 构建含蛋白转导结构域 (PTD)与慢性粒细胞白血病 (CML)bcr/abl融合基因片段的质粒 ,并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CMLbcr/abl基因片段 ,经DNA测序后 ,与合成编码PTD的DNA片段一起插入质粒pET 16b ,构建表达载体pEPb ,转化大肠杆菌并进行了PTD bcr/abl蛋白的诱导表达和纯化。结果 跨越bcr/abl断裂点的 5 2 3bp的目的片段被有效地扩增。DNA序列分析表明所构建的含PTD bcr/abl融合基因的质粒与设计相同。PTD bcr/abl融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了PTD bcr/abl融合蛋白片段的基因表达产物 。 展开更多
关键词 遗传转导 bcr/ABL融合基因 白血病 慢性 基因表达 大肠杆菌
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Ph/BCR-ABL阳性急性髓系白血病12例临床及实验室特征分析 被引量:11
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作者 蔡文治 何雪峰 +4 位作者 陈苏宁 孙爱宁 何军 朱明清 吴德沛 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期398-402,共5页
目的 探讨有利于Ph染色体和(或)BCR-ABL融合基因阳性急性髓系白血病(Ph/BCR-ABL^+ AML)诊断的临床和实验室特征.方法 收集2006年2月至2013年12月收治的12例Ph/BCR-ABL^+ AML患者资料,以典型慢性髓性白血病急髓变(CML-MBC)患者... 目的 探讨有利于Ph染色体和(或)BCR-ABL融合基因阳性急性髓系白血病(Ph/BCR-ABL^+ AML)诊断的临床和实验室特征.方法 收集2006年2月至2013年12月收治的12例Ph/BCR-ABL^+ AML患者资料,以典型慢性髓性白血病急髓变(CML-MBC)患者为对照组,回顾性分析两者临床及实验室特征,并随访生存情况.结果 12例患者中位年龄27.5岁,无或轻度脾脏肿大者10例(83.3%),FAB分型以m^2和M4为主,中位外周血和骨髓嗜碱粒细胞比例、巨核细胞数低于典型CML-MBC患者.免疫表型均为髓系表达,表达CD34者8例(66.7%).11例患者检测到t(9;22),伴附加染色体异常5例(45.5%),其中1例为inv(16).12例患者均检测到BCR-ABL融合基因,e1a2型3例(25.0%),余为b2a2/b3a2型,其中1例伴有CBFβ-MYH11表达.6例受检患者中2例存在AML常见突变,其中CEBPA突变1例,FLT3-TKD突变1例.诱导治疗完全缓解(CR)7例(58.3%),7例接受化疗联合酪氨酸激酶抑制剂(TKI)者6例CR,3例接受单独化疗者l例CR.总体中位生存期16.5个月,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)组为33.5个月,高于非移植组(5.5个月).结论 e1a2型融合基因、与AML常见融合基因共表达、存在AML常见突变有利于Ph/BCR-ABL-AML诊断;此类患者诱导缓解率低,生存期短,化疗联合TKI获得缓解后尽早行allo-HSCT是改善其生存的唯一有效途径. 展开更多
关键词 白血病 髓样 急性 白血病 髓样 急变期 费城染色体 bcr-ABL
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带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运 被引量:8
4
作者 梁英民 孙强 +7 位作者 蒋姗姗 陈萍 王冀姝 李荣 周鹏 王键 黄红艳 韩骅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期574-578,共5页
HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .... HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 . 展开更多
关键词 蛋白转导结构域 bcr/ABL 慢性粒细胞白血病 基因表达 癌蛋白
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格列卫对慢性粒细胞白血病病人Ph染色体和bcr/abl融合基因表达影响 被引量:8
5
作者 李萍 管洪在 +2 位作者 杨颉 王术国 吴春梅 《齐鲁医学杂志》 2009年第4期289-291,294,共4页
目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr/abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RT-PCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr/abl基因的表达。结果用药后9... 目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr/abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RT-PCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr/abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3~24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30%;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70%;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60%。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr/abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性(t=3.77、5.13,P<0.01),随着用药时间的延长bcr/abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 费城染色体 格列卫 融合基因 bcr/abl 逆转录聚合酶链反应
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甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI571敏感性中的作用 被引量:6
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作者 肖希斌 谢兆霞 +2 位作者 陈杰 秦群 祝焱 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期558-561,共4页
目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1mRNA转录水平及WesternBlot法检测P-gp表... 目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1mRNA转录水平及WesternBlot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L,加Nef后,IC50为0.689μmol/L,逆转倍数为4.38倍(P<0.05)。STI571与Nef联合应用使mdr1mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P<0.01),使P-gp的表达下调40.58%(P<0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI571的敏感性,下调其mdr1mRNA的转录和阻断P-gp的表达,从而逆转白血病的多药耐药性。 展开更多
关键词 STI 571 K562/A02 甲基莲心碱 多药耐药 基因 bcr/abl
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TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4阳性儿童急性淋巴细胞白血病的临床特点及预后 被引量:8
7
作者 王颖超 殷楚云 +3 位作者 李涛 冯磊 王春美 盛光耀 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期687-690,共4页
目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因的表达及其临床诊治意义。方法用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测TEL/AML1、BCR/ABL(p190和p210两种亚型)、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因在312... 目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因的表达及其临床诊治意义。方法用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测TEL/AML1、BCR/ABL(p190和p210两种亚型)、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因在312例ALL患儿中的表达情况,并总结融合基因阳性患儿的临床和生物学特点、治疗反应及预后情况。结果 (1)融合基因阳性共120例,TEL/AML1阳性组72例(23.1%),BCR/ABL阳性组22例(7.1%),p190 16例(5.1%)、p210 6例(1.9%),E2A/PBX1阳性组18例(5.8%),MLL/AF4阳性组8例(2.6%)。(2)TEL/AML1阳性组诊断时WBC平均值为(18.02±6.45)×109/L,诱导化疗结束完全缓解率(CR)100%,随访期间无复发;BCR/ABL阳性组发病时年龄(9.40±3.55)岁,诱导化疗结束CR81.8%,强化治疗末仍有6例融合基因未转阴,随访中有8例(36.3%)复发,8例死亡;E2A/PBX1阳性组全部按高危标准给予化疗,诱导化疗结束CR88.9%,强化治疗期末仍有3例基因微量表达,随访中2例复发;MLL/AF4阳性组发病时WBC(38.41±9.30)×109/L,强化治疗期末仍有2例基因呈阳性,随访中均复发死亡。结论融合基因可作为ALL危险度分层、监测微小残留病、判断预后的重要指标之一。 展开更多
关键词 急性白血病 儿童 融合基因 TEL/AML1 bcr/ABL E2A/PBX1 MLL/AF4
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BCR/ABL融合基因和转录因子FoxO3a在初发和急变慢性粒细胞白血病患者中的表达变化 被引量:7
8
作者 穆会君 谢平 +1 位作者 沈云峰 蒋元强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期190-193,共4页
目的:观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL融合基因和转录因子FoxO3a的表达变化及其意义。方法:利用EVA Green建立实时荧光RT-PCR检测BCR/ABL、FoxO3a和GAPDH的方法,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中B... 目的:观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL融合基因和转录因子FoxO3a的表达变化及其意义。方法:利用EVA Green建立实时荧光RT-PCR检测BCR/ABL、FoxO3a和GAPDH的方法,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因和FoxO3a的表达,以及30例正常人外周血样本中FoxO3a的表达,以GAPDH为内参基因,各组基因表达水平的差异采用△△CT相对定量法。结果:CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍,正常人外周血样本中FoxO3a的表达水平分别是CML初发和急变患者的143.39倍和8.18倍。结论:BCR/ABL融合基因的高表达与转录因子FoxO3a的低表达可能与CML不同阶段的病理过程相关联。 展开更多
关键词 bcr/ABL FOXO3A 慢性粒细胞白血病 融合基因 实时荧光RT-PCR
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白血病bcr/abl mRNA的荧光定量RTP-CR检测 被引量:7
9
作者 邢秀华 王雷 +2 位作者 王松酶 徐克惠 于向民 《青岛大学医学院学报》 CAS 2004年第2期139-141,共3页
①目的 探讨bcr/abl基因表达水平与白血病诊断、预后的关系及在微小残留病检测中的意义。②方法 荧光定量RT PCR法 (FQ RT PCR)测定 34例不同类型及处于不同疾病阶段的白血病病人bcr/abl基因的表达。③结果 对照组bcr/abl基因表达均... ①目的 探讨bcr/abl基因表达水平与白血病诊断、预后的关系及在微小残留病检测中的意义。②方法 荧光定量RT PCR法 (FQ RT PCR)测定 34例不同类型及处于不同疾病阶段的白血病病人bcr/abl基因的表达。③结果 对照组bcr/abl基因表达均为阴性。慢性粒细胞白血病 (CML)病人bcr/abl基因表达阳性率为 89.5 % (1 7/ 1 9) ,经治疗达临床缓解者 8例 ,bcr/abl基因表达均值为 (2 .4 3± 0 .6 7)× 1 0 5基因拷贝 /L ;初诊CML未经治疗及治疗无效并发生急变或死亡者bcr/abl基因表达均值为 (2 .6 0± 0 .90 )× 1 0 7基因拷贝 /L ,两者有极显著性差异(t=3.4 3,P <0 .0 1 )。随访 4例CML ,2例治疗缓解 ,bcr/abl转录减少 ,无阴转 ;持续增高 2例中 ,1例急变 ,1例死亡。急性淋巴细胞白血病 (ALL)病人bcr/abl表达阳性率为 1 1 .8% (2 / 1 5 ) ,均复发 ,1例死亡 ,bcr/abl基因转录复发前表达明显增高。④结论 FQ RT PCR实验方法灵敏、快速、特异性好、结果准确 ;bcr/abl基因表达水平的定量观察及动态监测 ,有助于白血病的临床诊断与分型 。 展开更多
关键词 基因 bcr/ABL 聚合酶链反应 白血病 预后 微小残留病
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荧光原位杂交在慢性粒细胞白血病细胞BCR/ABL融合基因检测中的应用及其意义 被引量:4
10
作者 张济 李君君 +2 位作者 颜家运 邹礼衡 刘静 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第5期825-827,共3页
目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)骨髓和外周血细胞的BCR/ABL融合基因的临床价值。方法:应用FISH对正常对照组及CML患者骨髓和外周血细胞BCR/ABL融合基因进行检测和分析。结果:慢性期CML患者骨髓和外周血细胞... 目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)骨髓和外周血细胞的BCR/ABL融合基因的临床价值。方法:应用FISH对正常对照组及CML患者骨髓和外周血细胞BCR/ABL融合基因进行检测和分析。结果:慢性期CML患者骨髓和外周血细胞该融合基因阳性细胞率分别为(61.9±22.3)%和(68.4±19.8)%,加速期为(77.2±16.7)%和(86.8±12.1)%,急变期为(80.6±17.5)%和(81.4±18.0)%,两者细胞中BCR/ABL基因的阳性率未见统计学差异(P>0.05),且骨髓和外周血细胞之间融合基因阳性细胞比率呈直线正相关。同时发现在完全临床缓解患者中,经伊马替尼治疗的CML患者(71.4%)较经干扰素和羟基脲联合治疗者(10.0%)有更高的分子生物学缓解(P<0.05)。结论:通过FISH对CML患者骨髓和(或)外周血细胞融合基因进行监测,有助于CML的诊断、治疗及微小残留白血病的监测。 展开更多
关键词 白血病 髓系 慢性 bcr-ABL阳性 荧光原位杂交 bcr/ABL 融合基因
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bcr-abl融合基因及其检测 被引量:3
11
作者 靳卫东 宋增璇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期253-258,共6页
bcr-abl融合基因位于染色体t(9;22)(q34;q11),由位于9号染色体上的细胞原癌基因abl部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCR区而形成。在绝大多数病例中,断裂点集中在5.8 kb的M-BCR区,主要形成b2a2和b3a2二种形式的转录物及蛋白质,... bcr-abl融合基因位于染色体t(9;22)(q34;q11),由位于9号染色体上的细胞原癌基因abl部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCR区而形成。在绝大多数病例中,断裂点集中在5.8 kb的M-BCR区,主要形成b2a2和b3a2二种形式的转录物及蛋白质,二者差异仅为75个碱基及25个氨基酸。bcr-abl融合基因及其表达的检测对CML有重要的诊断与预后价值。用Southern印迹杂交、间期或中期染色体原位杂交等方法检测DNA,发现Ph阴性或变异型Ph病人存在bcr-abl融合基因,检测到许多新的融合类型,并确认异基因BMT后白血病的复发是源于自身MRL。用优化的RT-PCR,定量RT-PCR或RNA原位杂交检测RNA,可精确定位罕见或混合的接合型,还发现正常人中bcr-abl基因有低量表达且有随年龄增长而增加的趋势。用Western印迹或酶联免疫反应检测,发现BCR-ABL蛋白与C-ABL蛋白之比在外周血与骨髓中相似且与Ph染色体重排率有线性关系,还发现如果P190继P210之后出现,则CML的预后很差。 展开更多
关键词 bcr-ABL 融合基因 基因检测 慢性髓细胞白血病
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三氧化二砷对伊马替尼耐药bcr—abl基因突变细胞株生长抑制作用的研究 被引量:5
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作者 卢润章 邱林 +5 位作者 王晓丹 李小丰 陈立君 王秀丽 张伯龙 马军 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期13-17,共5页
目的探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对伊马替尼(IM)耐药bcr-abl基凶突变细胞株(简称IM耐药细胞侏)的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察IM敏感细胞株32Dp210和包括32Dp210^T315I。等15种IM耐药细胞株的细胞增殖能力。选择其中5种... 目的探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对伊马替尼(IM)耐药bcr-abl基凶突变细胞株(简称IM耐药细胞侏)的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察IM敏感细胞株32Dp210和包括32Dp210^T315I。等15种IM耐药细胞株的细胞增殖能力。选择其中5种慢性粒细胞白血病(CML)常见基因突变型细胞株,经膜联蛋白V(AnnexinV)标记流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测bcr-adl融合蛋白、CRKL磷酸化及细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果32Dp210^T315I等15种IM耐药细胞株具有不同程度的IM耐药性(IC50为IM敏感细胞株32Dp210的1.5~25.0倍)。As2O3对IM耐药细胞株的IC50值仅为32Dp210细胞的0.18—0.34。将5种CML常见的IM耐药细胞株与32Dp210比较发现,As2O3更显著地呈剂量依赖性抑制IM耐药细胞株bcr—abl融合蛋白、磷酸化CRKL蛋白的表达,诱导细胞凋亡的作朋也明显强于32Dp210。4μmol/LAs2O3可激活5种突变细胞的caspase-3、8、9蛋白表达。结论As2O3在体外对IM耐药细胞株具有比IM敏感细胞株更显著的生长抑制和诱导凋亡的作用,细胞凋亡的产生主要与easpase-3、8、9蛋白的激活有关,提示As2O3可能成为治疗IM耐药CML患者的新选择。 展开更多
关键词 砷剂 伊马替尼抗药性 细胞增殖 基因 bcr—abl 32Dp210细胞 突变型
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荧光原位杂交法检测慢性粒细胞白血病 bcr 基因重排 被引量:4
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作者 刘孟珉 刘晓力 +5 位作者 牛超 何凯莉 苏欣莹 曹琪 陈竺 陈赛娟 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期308-310,共3页
目的:检测慢性粒细胞白血病bcr基因重排。方法:应用荧光原位杂交技术,以自行筛选和制备的酵母人工染色体为探针进行荧光原位杂交,检测慢性粒细胞白血病bcr基因的重排。结果:用22号染色体bcr基因附近的YAC765E3... 目的:检测慢性粒细胞白血病bcr基因重排。方法:应用荧光原位杂交技术,以自行筛选和制备的酵母人工染色体为探针进行荧光原位杂交,检测慢性粒细胞白血病bcr基因的重排。结果:用22号染色体bcr基因附近的YAC765E3,在9例慢性粒细胞白血病中,发现5例慢性期患者,2例急变期患者和1例经α干扰素治疗后的患者存在bcr基因重排,1例自体骨髓移植后患者的核型呈嵌合状态,即同时存在正常的和具有bcr基因重排的核型。结论:YAC765E3是一个有用的检测bcr基因重排的探针,荧光原位杂交技术可能成为白血病治疗效果的监测和微量残留病检出的一种重要手段。 展开更多
关键词 基因 bcr 荧光原位杂交 慢性 白血病 基因重排
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接合物蛋白磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病中的临床意义 被引量:6
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作者 许娜 欧阳昭 +4 位作者 杜庆锋 王霜 杨军 王瑜 刘晓力 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期25-28,共4页
目的 探讨接合物蛋白(CRKL)的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-AB... 目的 探讨接合物蛋白(CRKL)的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-ABL基因转录水平、CRKL磷酸化水平,分析CRKL磷酸化水平与前两者的关系.结果 15例伊马替尼耐药患者中6例(40.0%)检测到ABL激酶区点突变,涉及四种类型氨基酸的改变,分别为Y253H 1例、E255K 1例、T315I 3例、F317L 1例,其中2例(T315I、Y253H)处于急变期,3例(E255K、T315I、F317L)处于加速期,1例(T315I)处于慢性期.初诊组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.01);伊马替尼耐药组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.03);伊马替尼耐药组BCR-ABLmRNA水平与初诊组差异无统计学意义(P=0.18).伊马替尼耐药组与初诊组磷酸化CRKL阳性细胞百分率及平均荧光强度(MFI)均明显升高,两组差异无统计学意义(P=5.130;P=3.178);但初诊组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.01),伊马替尼耐药组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.02);磷酸化CRKL阳性细胞百分率、MFI与BCR-ABL mRNA表达水平存在正相关关系(P<0.05).结论 应用流式细胞术检测P210BCR-ABL主要底物CRKL蛋白的磷酸化水平,是快速便捷的检测CML患者酪氨酸激酶活性的方法,CRKL磷酸化水平可作为评价伊马替尼治疗CML的疗效指标. 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 伊马替尼 接合物蛋白质类 融合基因 bcr-ABL 点突 耐药性 肿瘤
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B淋巴细胞发育与BCR基因重排 被引量:4
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作者 白丽 《大理学院学报(综合版)》 CAS 2010年第6期28-31,共4页
目的:了解B细胞发育与B细胞抗原受体(BCR)基因重排。方法:通过相关文献的阅读,综合评述B细胞发育与BCR基因重排。结果:在B细胞发育过程中伴随着BCR基因的重排,包括第一次重排和受体编辑(第二次重排),其中的一些重要事件已经被发... 目的:了解B细胞发育与B细胞抗原受体(BCR)基因重排。方法:通过相关文献的阅读,综合评述B细胞发育与BCR基因重排。结果:在B细胞发育过程中伴随着BCR基因的重排,包括第一次重排和受体编辑(第二次重排),其中的一些重要事件已经被发现。结论:B细胞发育及BCR基因重排是一个密切相关的十分有序的过程,但仍有许多问题未弄清楚。 展开更多
关键词 B淋巴细胞 bcr基因 重排 免疫球蛋白
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双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr/abl融合基因 被引量:4
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作者 刘旭平 李承文 +8 位作者 代芸 秦爽 肖继刚 徐方运 贡金英 王四平 于成龙 范婧 王建祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期961-964,共4页
本研究总结分析1295份双色双融合荧光原位杂交方法(DC-DF-FISH)检测的bcr/abl融合基因结果并与常规细胞遗传学结果对比,进一步证实双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr/abl融合基因的敏感性及临床应用价值。应用bcr/abl双色双融合DNA探... 本研究总结分析1295份双色双融合荧光原位杂交方法(DC-DF-FISH)检测的bcr/abl融合基因结果并与常规细胞遗传学结果对比,进一步证实双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr/abl融合基因的敏感性及临床应用价值。应用bcr/abl双色双融合DNA探针对骨髓间期细胞行荧光原位杂交,回顾分析FISH和核型检测结果。结果表明:在所检测的539例患者的1295份骨髓标本中FISH阳性结果456份,涉及患者310例,核型正常的18例,核型分析失败的5例。310例FISH阳性病例中典型的DC-DF-FISH信号(2Y1G1R)234例,占75.5%(234/310)。非典型信号患者76例,其中变异信号66例,占FISH阳性病例的21.3%(66/310)。典型变异信号(1Y2G2R)16例,abl/和/或bcr缺失50例。213例多次DC-DF-FISH结果中,治疗后总转阴率为60%(128/213),治疗过程中阴性阳性多次反复的达12例。结论:双色双融合FISH技术可以检测隐匿核型、变异核型、基因序列缺失、微小残留病(MRD),是一个敏感、精确的白血病的诊断和治疗监测工具,有必要同细胞遗传学检查一样作为常规项目,尤其对于治疗后的病例,它在监测微小残留病及监测复发方面更优于常规细胞遗传学。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 bcr/ABL 融合基因 微小残留病
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干扰素-α治疗慢性粒细胞白血病疗效的观察 被引量:3
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作者 杨焰 朱励 +1 位作者 魏文宁 宋善俊 《华中医学杂志》 CAS 2006年第2期132-132,135,共2页
目的探讨干扰素-α(IFN-α)治疗慢性粒细胞白血病(CML)的临床效果。方法用RT-PCR检测116例CMLbcr/abl基因。结果116例CML病人有103例bcr/abl基因为阳性,阳性率为88.8%,ph(-)/bcr(-)CML病人经IFN-α治疗后效果较ph(-)/bcr(+)差,两组相比... 目的探讨干扰素-α(IFN-α)治疗慢性粒细胞白血病(CML)的临床效果。方法用RT-PCR检测116例CMLbcr/abl基因。结果116例CML病人有103例bcr/abl基因为阳性,阳性率为88.8%,ph(-)/bcr(-)CML病人经IFN-α治疗后效果较ph(-)/bcr(+)差,两组相比,有显著统计学意义(P<0.05)。结论IFN-α治疗CML,尤其是初发的慢性病人有一定疗效,可延长患者的慢性期。 展开更多
关键词 白血病 粒细胞 慢性 基因 bcr 基因 abl 干扰素-Α
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M与m-bcr/abl融合基因转录子共表达与CML患者血小板增多的关系 被引量:1
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作者 孟文彤 粟军 +5 位作者 曾诚 刘霆 李建军 史青 余江 崔旭 《检验医学》 CAS 北大核心 2007年第6期667-671,共5页
目的研究共表达m-bcr/abl融合基因转录子对初诊慢性髓系白血病(CML)患者的巨核细胞形态的影响。方法分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和巢式PCR检测M和m-bcr/abl融合基因转录子。盲法计数患者骨髓涂片1.0 cm×1.5 cm2面积内巨核... 目的研究共表达m-bcr/abl融合基因转录子对初诊慢性髓系白血病(CML)患者的巨核细胞形态的影响。方法分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和巢式PCR检测M和m-bcr/abl融合基因转录子。盲法计数患者骨髓涂片1.0 cm×1.5 cm2面积内巨核细胞数,随机选取20个巨核细胞分类计数并测定成熟期巨核细胞直径;计数产板型巨核细胞产血小板数。结果107例初诊CML患者M和m-bcr/abl共表达者56例,b3a2型31例,b2a2型25例。共表达m-bcr/abl的b3a2型初诊CML患者血小板数比单表达M-bcr/abl和b2a2型m-bcr/abl(+)患者高(P<0.05)。对巨核细胞形态观察,在b3a2和b2a2组,共表达m-bcr/abl和单表达M-bcr/abl的患者骨髓1.0 cm×1.5 cm面积内巨核细胞数、成熟巨核细胞数和直径差异均无统计学意义(P>0.05);共表达m-bcr/abl的b3a2型患者产板型巨核细胞产板数比单表达M-bcr/abl患者高(P<0.05);而b2a2型的共表达m-bcr/abl组和单表达M-bcr/abl组1.0 cm×1.5 cm面积内巨核细胞数、成熟巨核细胞数和直径及产板型巨核细胞产板数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论共表达m-bcr/abl的b3a2型初诊CML患者血小板数增高是由其巨核细胞产板数多造成的,而与其巨核细胞数、产板型巨核细胞数和直径无关。 展开更多
关键词 基因 慢性髓细胞白血病 M-bcr/abl m-bcr/abl 共表达 巨核细胞
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BCR/ABL癌蛋白片段的表达、纯化及其抗血清的制备 被引量:3
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作者 梁英民 蒋姗姗 +6 位作者 孙强 吴绒丽 陈萍 李荣 周鹏 王键 韩骅 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第14期1315-1317,共3页
目的 克隆并表达 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备其抗血清 .方法  PCR扩增包含蛋白融合点的 bcr/ abl癌基因片段 ,序列测定后克隆入带有 His标签的原核表达载体 p ET-16 b,转化宿主菌 BL2 1,IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析表达结果 ,Ni- ... 目的 克隆并表达 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备其抗血清 .方法  PCR扩增包含蛋白融合点的 bcr/ abl癌基因片段 ,序列测定后克隆入带有 His标签的原核表达载体 p ET-16 b,转化宿主菌 BL2 1,IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析表达结果 ,Ni- NTA树脂亲和纯化 ,皮下多点注射免疫小鼠 ,EL ISA确认抗血清的滴度 .结果  PCR扩增得到大小约 5 2 3bp的目的片段 ,序列测定表明与发表序列完全一致 ;得到了一种新的癌基因 bcr/ abl片段的原核表达载体 p ET- 16 b- bcr/abl,在 BL 2 1中表达可见于 Mr 2 1× 10 3处有一蛋白新生带 ,表达的 BCR/ ABL蛋白免疫小鼠后 ,EL ESA确认抗血清的滴度 >1∶ 2 0 0 0 .结论 成功的克隆、表达了 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备了相应的抗血清 . 展开更多
关键词 bcr/ABL 基因表达 融合蛋白 抗血清 慢性粒细胞白血病
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BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立 被引量:3
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作者 曲守方 于婷 +5 位作者 张娟丽 胡小许 郭李平 赵金银 高尚先 黄杰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1629-1633,共5页
目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因m RNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列。用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ对含有目的融合基因的... 目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因m RNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列。用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ对含有目的融合基因的质粒和表达载体进行酶切,连接酶切产物。将连接产物转化DH5α感受态细胞,筛选单个阳性菌落进行验证。将正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液。用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测。结果:PCR结果和测序结果表明成功构建人类BCR-ABL融合基因e1a2和e14a2型假病毒质粒;荧光RT-PCR结果表明构建的e1a2和e14a2型假病毒质粒能够表达目的 RNA,并且能被市售试剂盒正确检出,可以作为RNA质控品。结论:本研究建立人类BCR-ABL融合基因RNA质控品,用于评价BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能,为BCR-ABL融合基因相关白血病的临床诊断及靶向治疗提供指导。 展开更多
关键词 靶向药物 分子靶向治疗 慢性粒细胞白血病标志物 埃布尔森小鼠白血病病毒癌基因同源物1 bcr-ABL 融合基因 RNA检测 荧光逆转录-聚合酶链反应 基因检测试剂 标准物质研究
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