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重组CKB真核表达载体的构建及其稳定转染NCI—H520细胞系的建立
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作者 曾谷清 许艳 +4 位作者 易红 李萃 李茂玉 汤参娥 肖志强 《中国医师杂志》 CAS 2011年第9期1153-1156,共4页
目的构建pEGFP—N1－CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中，建立稳定转染的NCI—H520细胞系，为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板，用PCR扩增人CKBcDNA的编码区，并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆... 目的构建pEGFP—N1－CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中，建立稳定转染的NCI—H520细胞系，为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板，用PCR扩增人CKBcDNA的编码区，并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。重组子经酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI—H520，经G418筛选并建立稳定的转染细胞株，应用Westernblot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达。结果pEGFP—N1－CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，真核表达载体构建成功；经Westernblot检测，重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组，证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达。结论成功构建了pEGFP—N1－CKB真核表达质粒，建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系，为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 肌酸激酶 bb型/遗传学 遗传载体 转染 肺肿瘤/遗传学 肿瘤 鳞状细胞/遗传学
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