羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量：16

1

作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页

目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 F1l基因 b2l基因 真核表达

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定 被引量：10

2

作者 李杰 李前瑞 +3 位作者 田婷婷 许君艳 姚运亮 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第3期1-6,共6页

为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱... 为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 VIR基因 原核表达 抗原性

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：9

3

作者 王勇 殷冬冬 +6 位作者 杨侃侃 白彩霞 潘飞 梅跃辉 赵玉洁 徐前明 李永东 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期10-14,共5页

为确定安徽肥东某山羊场发生的疑似羊口疮(ORF)的病原,利用MDBK细胞从送检的病羊唇部痂皮中分离获得病毒,通过PCR鉴定确定病原为羊口疮病毒(ORFV),并将其命名为ORFV/AH-FD/2016/China株。然后对分离株的B2L基因和F1L基因进行克隆、测序... 为确定安徽肥东某山羊场发生的疑似羊口疮(ORF)的病原,利用MDBK细胞从送检的病羊唇部痂皮中分离获得病毒,通过PCR鉴定确定病原为羊口疮病毒(ORFV),并将其命名为ORFV/AH-FD/2016/China株。然后对分离株的B2L基因和F1L基因进行克隆、测序,并与其他ORFV序列进行遗传进化分析。结果表明:ORFV/AH-FD/2016/China株的B2L基因长1 137bp,编码279个氨基酸,F1L基因长1 023bp,编码341个氨基酸。与GenBank中收录的其他ORFV流行株相比,B2L基因的核苷酸同源性为96.9%~99.5%,推导的氨基酸同源性为95.5%~98.9%;F1L基因的核苷酸同源性为95.3%~98.3%,推导的氨基酸同源性为94.9%~99.1%。利用软件构建系统进化树,根据B2L基因遗传进化分析结果表明,该分离株与甘肃分离株的亲缘关系最近;根据F1L基因遗传进化分析结果表明,该分离株与福建分离株亲缘关系最近。基于B2L基因和F1L基因的遗传进化分析,其分离得到的病毒株与国内不同地区分离毒株的遗传差异不大。该研究为ORFV的后续研究提供了临床试验材料和流行病学依据。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 b2l基因 F1l基因 遗传进化分析

原文传递

羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测 被引量：9

4

作者 王光祥 尚佑军 +3 位作者 吕占禄 田宏 张克山 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1133-1138,共6页

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 二级结构 b细胞表位 T细胞表位 预测

原文传递

一株羊口疮病毒分离株的生物学特性研究 被引量：9

5

作者 唐娜 刘吉山 +5 位作者 王玉茂 王金良 张倩 谢金文 曲光刚 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期49-53,共5页

为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E... 为深入开展羊口疮病毒特性研究与羊口疮的防控，通过细胞分离培养、B2L 基因序列测定及分析等试验，对从山东某羊场分离的一株羊口疮病毒分离株 SD1201进行病毒学及分子生物学特性研究。结果表明，该分离株能够引起绵羊睾丸细胞、Vero E6细胞、MDCK 细胞发生不同程度的病变，绵羊睾丸细胞病变最为明显，在18 h 内迅速发生细胞病变，病毒 TCTD50浓度为10^-4．5/mL。通过 PCR 扩增分离株 B2L基因特定片段并克隆测序，分析结果表明，该分离株与3株羊口疮病毒中国分离株亲缘关系最近，同源性为98．0％～98．2％。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 SD1201株 生物学特性 b2l基因 序列分析

下载PDF 职称材料

口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达 被引量：9

6

作者 宫晓华 殷冬冬 +8 位作者 王瑞 唐井玉 周晓雅 梅楠 张雪梅 兰梦蝶 陈鹏 王勇 王桂军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期185-191,共7页

为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2... 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多

关键词 口疮病毒 分离鉴定 b2l基因 序列分析 原核表达 蛋白质免疫印迹

原文传递

羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗的构建及其诱导的免疫应答 被引量：9

7

作者 李鹏飞 冯将 +5 位作者 鲜思美 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期704-708,715,共6页

为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK... 为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK细胞，RTPCR和IFA法检测B2L基因在MDBK细胞中的转录和表达；将构建的DNA疫苗免疫KM系小鼠，采用间接ELISA、MTT和FACS法对其诱导的免疫应答进行研究。结果显示，成功构建pVAX1-B2L真核表达质粒，并在MDBK细胞中表达；免疫小鼠后，DNA疫苗能诱导小鼠产生Orfv特异性抗体；脾淋巴细胞增殖、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群百分比和IL-2、IFN-γ、IL-4细胞因子均高于pVAX1组和PBS组。结果表明，本研究制备的DNA疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 羊口疮病毒(OrfV) b2l基因 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫

原文传递

羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量：9

8

作者 张克山 刘永杰 +2 位作者 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期951-954,共4页

目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21)... 目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 真核表达 DNA疫苗

下载PDF 职称材料

陕西关中某羊场羊口疮病毒的分离鉴定与基因序列分析 被引量：8

9

作者 尚辰 黄勇 +5 位作者 张秀娟 董峰 杜谦 赵晓民 张文龙 童德文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期25-32,共8页

羊口疮疫病的暴发可严重影响畜牧的经济效益,为探明陕西地区该病的发病原因。本研究从陕西关中地区某羊场出现特征症状病羊嘴部痂皮中分离病原,经过感染MDBK细胞系,获得1株病毒,经形态学、理化学、PCR检测及病理组织学等方法鉴定,该病... 羊口疮疫病的暴发可严重影响畜牧的经济效益,为探明陕西地区该病的发病原因。本研究从陕西关中地区某羊场出现特征症状病羊嘴部痂皮中分离病原,经过感染MDBK细胞系,获得1株病毒,经形态学、理化学、PCR检测及病理组织学等方法鉴定,该病毒分离株为羊传染性脓疱病毒（Orf virus,ORFV）,命名为ORFV-SXGZ。依据GenBank中发表的ORFV特异性B2L、F1L及VIR基因的核酸序列,设计并合成3对引物,应用PCR方法成功对ORFV-SXGZ毒株的B2L、F1L及VIR基因进行克隆,并将其基因序列及推导的氨基酸序列与其他不同来源ORFV分离株进行比较分析。序列分析结果表明,ORFV-SXGZ毒株的B2L、F1L和VIR基因与其他已发表ORFV毒株之间的核苷酸同源性分别为96.7%～99.6%、95.8%～97.9%和95.0%～99.3%,氨基酸同源性分别为95.3%～99.7%、95.8%～98.2%和95.5%～98.4%。系统进化树分析结果显示,ORFV-SXGZ毒株与国内新疆和甘肃等西北部地区分离株的亲缘关系更近,证实陕西关中地区养殖场中存在羊口疮病毒感染。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 分离鉴定 b2l基因 F1l基因 VIR基因 序列分析

下载PDF 职称材料

羊IL-2基因和羊口疮病毒B2L基因真核表达重组质粒联合免疫小鼠的效果评价 被引量：8

10

作者 鲜思美 李鹏飞 +5 位作者 冯将 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期663-667,共5页

为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小... 为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小鼠的体液和细胞免疫反应。结果表明,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IL-2水平均显著高于pVAX1-B2L免疫组,与pVAX1和PBS对照组相比差异极显著(p<0.01)。而且pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L免疫组、空载体pVAX1组和PBS对照组(p<0.01)。因此,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫KM小鼠可以诱导特异性体液免疫和细胞免疫,并且IL-2具有免疫佐剂的作用,为进一步将其用于Orf的防制奠定了基础。 展开更多

关键词 OrfV b2l基因 Il-2 基因疫苗 联合免疫

下载PDF 职称材料

基于重组酶介导等温扩增技术的羊口疮病毒核酸检测方法的建立及初步应用 被引量：4

11

作者 张学勇 简莹娜 +3 位作者 李志 郭志宏 严永盛 朵红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期271-275,共5页

为建立羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)核酸的快速检测方法,本研究根据ORFV B2L基因保守序列设计特异性引物,通过优化反应温度与时间初步建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的ORFV检测方法。优化试验结果显示:该方法在37℃反应40 min检... 为建立羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)核酸的快速检测方法,本研究根据ORFV B2L基因保守序列设计特异性引物,通过优化反应温度与时间初步建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的ORFV检测方法。优化试验结果显示:该方法在37℃反应40 min检测效果最佳。采用该方法对ORFV、山羊痘病毒、O型和A型口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、山羊副流感病毒3型等临床常见症状相似的病毒核酸检测,结果显示:该方法除对ORFV的检测结果为阳性外,对羊的其他病毒的检测结果均为阴性,特异性较强。将质粒标准品10倍倍比稀释(1×10^(9)拷贝/μL~1×10^(0)拷贝/μL)后为模板,利用本研究建立的RAA方法检测,结果显示:该方法对ORFV质粒标准品的最低检测限为1×10^(4)拷贝/μL,敏感性较高。利用本研究建立的方法对95份临床样品(15份组织样品和80份血液样品)检测,结果显示:该RAA方法能够对临床样品快速检测,组织样品和血液样品的阳性率分别为33.33%(5/15)和6.25%(5/80),该检测结果与普通PCR检测方法的符合率均为100%,表明本实验建立的RAA方法能够满足临床样品的检测需求。本研究建立的ORFV RAA方法具有操作简单、特异性强、反应快速等特点,为ORFV的快速检测提供新的技术选择。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 重组酶介导的等温扩增技术 快速检测

下载PDF 职称材料

羊传染性脓疱病毒松原分离株的分离鉴定及B2L基因的克隆与序列分析 被引量：8

12

作者 赵魁 贺文琦 +4 位作者 宋德光 孟伶俐 陈克研 张学慧 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1162-1166,共5页

利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克... 利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克隆出其B2L基因,并将该基因序列和推导的氨基酸序列与6个不同来源的ORFV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.8%～99.5%和97.6%～99.5%;系统发育进化树结果表明,ORFV-sy毒株与印度分离绵羊株ORFV-Mukteswar67/04、ORFV-Izatnagar79/04的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的B2L基因差异不大。 展开更多

关键词 ORFV—sy 分离鉴定 b2l基因 序列分析

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒QD/2015株B2L基因克隆及生物信息学分析 被引量：8

13

作者 李智 仲亮 +5 位作者 张静 刘春羽 范俊豪 王海峰 牛云雷 张七斤 《中国动物检疫》 CAS 2017年第3期91-96,共6页

为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三... 为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三级结构、跨膜结构域和信号肽等进行预测和分析。结果显示:ORFV/QD/2015株B2L基因序列长1 137 bp,编码379个氨基酸;该毒株与其他12株羊口疮病毒参考株的B2L基因核苷酸序列同源性为96.8%~99.7%,氨基酸序列同源性为96.8%~99.2%。系统进化分析显示,ORFV/QD/2015株与2015年分离到的ORFV/Shaan Xi/2015/China株亲缘关系最近;B2L基因编码蛋白二级结构以α-螺旋区域和β-折叠区域所占比例较大,预测此蛋白可能存在7个细胞优势抗原表位,无跨膜区域,无信号肽区域;三级结构呈弯曲状螺旋结构。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 生物信息学分析 蛋白结构预测

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒上海流行株的分离鉴定及其保护性抗原基因遗传进化分析 被引量：7

14

作者 陈晓 李丽 +6 位作者 葛雷 李垚 戴建军 王书全 张树山 吴彩凤 张德福 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期655-661,共7页

为了解上海地区羊口疮病毒（ORFV）流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况，采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织，应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法，进行分离鉴定，并对这2个分离毒株保护性抗原... 为了解上海地区羊口疮病毒（ORFV）流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况，采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织，应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法，进行分离鉴定，并对这2个分离毒株保护性抗原基因F1L、B2L进行克隆与序列分析。结果表明，成功分离到2株ORFV，将其分别命名为ORFuF416、ORFV-F429。其中，2株分离株F1L基因与参考毒株核苷酸序列同源性分别为95．2％～99．4％，推导氨基酸序列与参考毒株氨基酸序列同源性分别为94．4％～99．4％，遗传进化树分析均显示2株均属于同一分支，且与福建株FJ—YX（KC568410）亲缘关系最近。但与相关参考毒株相比，分离株FIL基因编码的氨基酸在44～66位不存在核苷酸的缺失，表明上海流行株与FJ—YX株存在一定的变异。2株分离株B2L基因与参考毒株核苷酸序列同源性为96．7％～99．6％，氨基酸序列同源性为94．7％～98．9％，且在遗传进化树上均与广西株GX—YB（JQ904793）有较近的亲缘关系，但与中国疫苗株（JQ904789）亲缘关系较远。表明从上海地区分离得到的2个毒株与流行于中国南方地区的0RFV毒株有较近的亲缘关系，但分离株的FIL基因和B2L基因存在一定变异。 展开更多

关键词 ORFV 分离鉴定 F1l基因 b2l基因 进化分析

原文传递

江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析 被引量：7

15

作者 王秋霞 朱相儒 +4 位作者 易成功 秦涛 陈素娟 彭大新 夏同海 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期950-958,共9页

为了解江苏省近年来羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的流行情况,更好地控制江苏地区的羊口疮病,2013~2015年采集江苏部分地区羊口疮疑似病料121份,进行病毒分离鉴定及其B2L基因的遗传进化分析。结果显示,样品中ORFV PCR检测阳性4份,用胎羊... 为了解江苏省近年来羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的流行情况,更好地控制江苏地区的羊口疮病,2013~2015年采集江苏部分地区羊口疮疑似病料121份,进行病毒分离鉴定及其B2L基因的遗传进化分析。结果显示,样品中ORFV PCR检测阳性4份,用胎羊鼻甲骨细胞(OFTu)和MDBK细胞进行病毒分离,分离到4株病毒。这4株病毒分别命名为ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China、ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China和ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China。扩增ORFV的B2L基因全长并绘制遗传进化树。B2L基因序列分析显示,4株分离株之间的核酸同源性为98.5%~100.0%。遗传进化树显示,ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China株、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株和ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株与SC-JY、GX-YB、JS-FX株聚成一簇,核苷酸同源性为97.8%~100.0%。ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China与LiaoNing、HuB、Gansu株亲缘关系接近,核苷酸同源性为98.8%~98.9%。4株分离株与中国疫苗株的核苷酸同源性为96.8%~98.1%。结果表明,江苏地区的ORFV来源可能不同,有必要开展更为深入的流行病学调查,为防控江苏地区的羊口疮奠定基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 胎羊鼻甲骨细胞 MDbK细胞 b2l基因 遗传进化分析

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒LAMP-LFD快速检测方法的建立与初步应用 被引量：6

16

作者 杨倩 李召仁 +4 位作者 鲜思美 包涛涛 张友 梁倩 顾庆林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期507-513,共7页

根据羊口疮病毒(OrfV)的B2L基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对各反应条件包括反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、... 根据羊口疮病毒(OrfV)的B2L基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对各反应条件包括反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg^(2+)浓度以及探针结合温度等优化后,建立了检测OrfV的LAMP-LFD方法。结果显示,LAMP-LFD可特异性检测OrfV,而山羊痘病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒及丝状支原体山羊亚种等均未检出;LAMP-LFD对OrfV-B2L质粒DNA最低检测浓度为4.95×10^(-2)拷贝/μL,其灵敏度是以外引物建立PCR方法的1000倍。利用PCR和LAMP-LFD检测29份临床样品,两者检出符合率为100%。研究建立的LAMP-LFD检测方法可快速、特异地检测OrfV,可作为早期诊断和检测OrfV的有效手段。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条

原文传递

羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立及CBP基因的序列分析 被引量：7

17

作者 余波 冉懋韬 +1 位作者 谭诗文 徐景峨 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第7期30-34,共5页

根据GenBank中的羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列,设计合成1对引物,通过对PCR条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了ORFV的PCR检测方法。敏感性与特异性结果显示,最低核酸检测量为1.2 fg/μL,对口蹄疫病毒、山羊痘病毒、丝状支... 根据GenBank中的羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列,设计合成1对引物,通过对PCR条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了ORFV的PCR检测方法。敏感性与特异性结果显示,最低核酸检测量为1.2 fg/μL,对口蹄疫病毒、山羊痘病毒、丝状支原体山羊亚种的扩增结果均为阴性。同时根据GenBank中的ORFV的CBP基因的序列,设计合成1对特异性引物,以ORFV贵州分离株作为模板,成功克隆出ORFV的CBP基因。同源性分析表明,核苷酸与GenBank中ORFV的CBP基因的核苷酸序列相似性99.4%～88.8%。本研究为ORFV感染的流行病学调查和CBP基因功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 PCR b2l基因 CbP基因 同源性分析

原文传递

羊口疮病毒B2L和F1L截短融合基因原核表达产物的免疫原性分析 被引量：2

18

作者 鲜思美 郑维豪 +7 位作者 梁倩 张友 杨倩 顾庆林 包涛涛 青成欣 杜鹏 邱进杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期185-190,共6页

为分析羊口疮病毒(OrfV)B2L和F1L截短融合基因表达蛋白的反应原性,本研究分别选取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域,采用重叠延伸PCR将二者融合后克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-B2L-F1L,通过PCR、双酶切和测序鉴定,... 为分析羊口疮病毒(OrfV)B2L和F1L截短融合基因表达蛋白的反应原性,本研究分别选取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域,采用重叠延伸PCR将二者融合后克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-B2L-F1L,通过PCR、双酶切和测序鉴定,结果显示获得1080 bp的B2L-F1L融合基因目的片段,测序结果经比对分析正确无误,表明正确构建了重组表达质粒pET-32a-B2L-F1L。将pET-32a-B2L-F1L转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果显示表达了39 ku的重组蛋白rB2L-F1L。采用Ni-IDA亲和层析方法纯化重组蛋白,经western blot鉴定,结果显示获得39 ku的单一特异性条带,表明rB2L-F1L的纯化效果和免疫原性均较好。采用rB2L-F1L纯化蛋白皮下多点注射免疫羔羊,采用ELISA方法检测免疫后不同时间羔羊血清中的OrfV抗体、IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子。结果显示,与生理盐水组相比,rB2L-F1L能够诱导羔羊产生OrfV特异性抗体,并可显著或极显著诱导羔羊分泌IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子(P<0.05、P<0.01);与弱毒活疫苗组比较,除在免疫后14 d~28 d时rB2L-F1L诱导羔羊产生的IL-2水平显著低于弱毒活疫苗组外(P<0.05),其他细胞因子在各时段两组均无显著差异(P>0.05)。本研究首次将OrfV优势抗原基因融合表达并分析了融合蛋白的免疫原性,为OrfV的检测技术和基因工程亚单位疫苗的研发奠定了良好基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 b2l基因 F1l基因 截短表达 免疫原性分析

下载PDF 职称材料

福建省羊传染性脓疱病毒F1L、B2L和VIR基因的遗传变异分析 被引量：6

19

作者 林裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期1-6,共6页

为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株ORFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFV F1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96... 为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株ORFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFV F1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.8%~99.7%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.3%~97.1%;同NZ2参考株比较,FJ-YT2014缺失2个氨基酸;10株ORFV B2L基因之间核苷酸序列同源性为97.5%~99.9%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.5%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.7%~97.7%;10株ORFV VIR基因之间的核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,与国内株的核苷酸序列同源性为94.6%~99.6%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为94.6%~96.4%。基于基因核苷酸序列的遗传进化分析表明,10株ORFV F1L基因与福建省分离株、山西株和新疆株亲缘关系较近;10株ORFV B2L基因与新疆、山西、德国毒株亲缘关系较近;10株ORFV VIR基因与台湾、新疆株亲缘关系较近。结果提示,当前福建省流行的ORFV F1L、B2L和VIR基因尚未出现明显变异,但是其F1L、B2L和VIR基因核苷酸序列之间普遍存在异质性。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 F1l基因 b2l基因 VIR基因 变异分析

下载PDF 职称材料

羊口疮病毒ORFV/GD-QY/01株的分离鉴定 被引量：6

20

作者 向蓉 翟少伦 +4 位作者 王晓虎 陈晶 黄元 黄忠 向华 《广东农业科学》 CAS 2018年第9期116-120,共5页

利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orf virus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核苷酸... 利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orf virus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核苷酸序列与其他羊口疮毒株进行多序列比对,构建系统发育进化树。结果表明:接种病料悬液的MDBK细胞出现细胞病变,扩增出ORFV B2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106、DQ904351)相似性最高(均为99.2%),亲缘关系最近。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 b2l基因 诊断 遗传进化分析

下载PDF 职称材料