目的:观察补肾活血方通过调节骨保护素(OPG)/核因子κB活化因子受体(RANK)/核因子κB活化因子受体配体(RANKL)系统对慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常...目的:观察补肾活血方通过调节骨保护素(OPG)/核因子κB活化因子受体(RANK)/核因子κB活化因子受体配体(RANKL)系统对慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组及中药组,每组20只,模型组与中药组大鼠实验第1-4周给予250mg·kg-1·d-1腺嘌呤混悬液灌胃及含1.8%高磷饲料喂养4周,第5-8周腺嘌呤改为隔日灌胃,中药组同时按55g·kg-1·d-1剂量补肾活血方灌胃治疗,正常组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。给药8周后,HE染色观察肾组织变化,茜素红染色观察主动脉钙化结节情况,检测主动脉钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性,腹主动脉取血检测血清钙(Ca)、磷(P)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、全段甲状旁腺激素(i PTH),Western blot法检测主动脉α-平滑肌蛋白(α-SMA)、ALP蛋白的表达,Real-time PCR法检测主动脉OPG、RANKL m RNA表达。结果:HE染色观察提示:中药组较模型组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。茜素红染色观察提示:与正常组比较,模型组主动脉出现钙化结节,广泛红色颗粒物沉着;与模型组比较,中药组钙化结节减少。与正常组比较,模型组主动脉钙含量及ALP活性升高,血P、Scr、BUN、i PTH水平升高,血Ca水平下降(P<0.01),主动脉ALP蛋白表达明显升高、α-SMA蛋白表达明显下降(P<0.01),模型组主动脉OPG m RNA表达下调、RANKL m RNA表达上调(P<0.01);与模型组比较,中药组主动脉钙含量及ALP活性明显降低(P<0.05),血P、Scr、BUN、i PTH水平均下降(P<0.01,P<0.05),血Ca水平升高(P<0.01),中药组主动脉ALP蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达升高(P<0.01),且中药组OPG m RNA表达上调(P<0.01),RANKL m RNA表达有下调趋势,但差异无统计学意义。结论:补肾活血方能够改善CKD大鼠肾脏组织学、肾功能、改善钙磷代谢,上调OPG/RANK/RAN展开更多
目的研究天山雪莲愈伤组织提取物(extract from callus of Saussureainvolucrate,ESI)对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响,探讨ESI抗骨质疏松的作用及机制。方法以MG-63为研究对象,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测ESI对成骨细胞...目的研究天山雪莲愈伤组织提取物(extract from callus of Saussureainvolucrate,ESI)对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响,探讨ESI抗骨质疏松的作用及机制。方法以MG-63为研究对象,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测ESI对成骨细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性和羟脯氨酸(Hyp)水平,茜素红染色法观察对矿化骨结节形成的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测骨保护素(OPG)和核因子-κB活化因子受体配体(RANKL)基因表达水平;Western blotting法检测OPG/RANKL蛋白水平;检测p38特异性抑制剂SB203580对ESI作用于成骨细胞增殖、分化、矿化以及OPG/RANKL表达的影响。结果 ESI低于125μg/mL对成骨细胞无细胞毒性,31.25、62.5μg/mL对成骨细胞生长有促进作用;ESI显著提高ALP活性、Hyp水平以及矿化骨结节形成;显著上调MG-63细胞OPG mR NA水平,下调RANKLmR NA水平,上调OPG/RANKL蛋白水平;SB203580显著抑制ESI对成骨细胞增殖、ALP活性、矿化结节形成的促进作用以及对胶原蛋白积累量和OPG/RANKL值的提高作用。结论 ESI能够促进成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与调节OPG和RANKL基因表达有关,并且可能通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路进行信号转导。展开更多
文摘目的:观察补肾活血方通过调节骨保护素(OPG)/核因子κB活化因子受体(RANK)/核因子κB活化因子受体配体(RANKL)系统对慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组及中药组,每组20只,模型组与中药组大鼠实验第1-4周给予250mg·kg-1·d-1腺嘌呤混悬液灌胃及含1.8%高磷饲料喂养4周,第5-8周腺嘌呤改为隔日灌胃,中药组同时按55g·kg-1·d-1剂量补肾活血方灌胃治疗,正常组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。给药8周后,HE染色观察肾组织变化,茜素红染色观察主动脉钙化结节情况,检测主动脉钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性,腹主动脉取血检测血清钙(Ca)、磷(P)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、全段甲状旁腺激素(i PTH),Western blot法检测主动脉α-平滑肌蛋白(α-SMA)、ALP蛋白的表达,Real-time PCR法检测主动脉OPG、RANKL m RNA表达。结果:HE染色观察提示:中药组较模型组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。茜素红染色观察提示:与正常组比较,模型组主动脉出现钙化结节,广泛红色颗粒物沉着;与模型组比较,中药组钙化结节减少。与正常组比较,模型组主动脉钙含量及ALP活性升高,血P、Scr、BUN、i PTH水平升高,血Ca水平下降(P<0.01),主动脉ALP蛋白表达明显升高、α-SMA蛋白表达明显下降(P<0.01),模型组主动脉OPG m RNA表达下调、RANKL m RNA表达上调(P<0.01);与模型组比较,中药组主动脉钙含量及ALP活性明显降低(P<0.05),血P、Scr、BUN、i PTH水平均下降(P<0.01,P<0.05),血Ca水平升高(P<0.01),中药组主动脉ALP蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达升高(P<0.01),且中药组OPG m RNA表达上调(P<0.01),RANKL m RNA表达有下调趋势,但差异无统计学意义。结论:补肾活血方能够改善CKD大鼠肾脏组织学、肾功能、改善钙磷代谢,上调OPG/RANK/RAN
