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IgG4相关性眼病泪腺病变的病理特点及BAFF和APRIL的表达
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作者 李培 杨新吉 +4 位作者 高钰寒 王海彬 姜帅 董微莉 董志军 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第4期353-356,共4页
目的观察IgG4相关性眼病(IgG4-ROD)泪腺病变的病理特点,探讨B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)在IgG4-ROD泪腺病变中的作用。方法收集13例IgG4-ROD泪腺病变患者(15眼)的泪腺肿物为实验组,8例因其他疾病行眶内容物摘除患者(8眼)... 目的观察IgG4相关性眼病(IgG4-ROD)泪腺病变的病理特点,探讨B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)在IgG4-ROD泪腺病变中的作用。方法收集13例IgG4-ROD泪腺病变患者(15眼)的泪腺肿物为实验组,8例因其他疾病行眶内容物摘除患者(8眼)的正常泪腺组织为对照组。采用HE染色法观察泪腺的病理形态变化,免疫组织化学染色法检测泪腺中BAFF和APRIL的表达情况,并对二者表达水平进行相关性分析。结果实验组泪腺出现弥漫性淋巴细胞和浆细胞浸润,广泛淋巴滤泡形成,纤维组织增生的病理改变。实验组泪腺中BAFF和APRIL的表达水平均明显高于对照组(均P<0.05),且二者的表达呈正相关(P<0.05)。结论IgG4-ROD泪腺病变表现出淋巴细胞和浆细胞弥漫浸润、纤维组织增生的病理特点,这可能与BAFF和APRIL表达上调导致的免疫调节失衡有关。 展开更多
关键词 IgG4相关性眼病 泪腺病变 病理形态学 b细胞活化因子 增殖诱导配体
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益气养阴祛瘀中药对干燥综合征NOD小鼠颌下腺TLR-IFN-BAFF信号通路的影响 被引量:7
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作者 林崇泽 黄绥心 +3 位作者 秦源 孙晗 李志宇 王新昌 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1487-1490,共4页
目的通过观察益气养阴祛瘀中药对NOD小鼠颌下腺组织中Toll样受体-5(TLR5)、α干扰素(IFN-α)、B淋巴细胞刺激因子(BAFF)蛋白表达的影响,以此来探究益气养阴祛瘀中药对干燥综合征(Sj9gren′s Syndrome,SS)的治疗机制。方法将30只8周龄NO... 目的通过观察益气养阴祛瘀中药对NOD小鼠颌下腺组织中Toll样受体-5(TLR5)、α干扰素(IFN-α)、B淋巴细胞刺激因子(BAFF)蛋白表达的影响,以此来探究益气养阴祛瘀中药对干燥综合征(Sj9gren′s Syndrome,SS)的治疗机制。方法将30只8周龄NOD小鼠随机分为模型组、羟氯喹组和中药组,每组各10只。另将10只8周龄ICR小鼠作为正常对照组(正常组)。正常组和模型组正常饲养,羟氯喹组每日给予羟氯喹75mg/kg灌胃治疗;中药组每日给予益气养阴祛瘀中药煎剂(27.4g/kg)灌胃治疗。饲养用药12周后,各组小鼠股动脉取血,断颈处死,摘取颌下腺组织;通过Western blot法检测各组小鼠颌下腺组织中TLR5、IFN-α和BAFF蛋白表达水平。结果模型组NOD小鼠颌下腺组织中的TLR5、IFN-α和BAFF蛋白相对表达量较正常组ICR小鼠均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组小鼠颌下腺组织中的TLR5、IFN-α、BAFF蛋白相对表达量降低(P<0.05)。与羟氯喹组比较,中药组NOD小鼠的IFN-α蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论益气养阴祛瘀中药对SS样NOD小鼠的治疗机制可能与调控TLR-IFN-BAFF信号通路有关。 展开更多
关键词 益气养阴祛瘀中药 干燥综合征 NOD小鼠 Toll样受体-5 Α干扰素 b淋巴细胞刺激因子
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酸甘生津方及其拆方对干燥综合征模型小鼠颌下腺BAFF的影响 被引量:6
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作者 顾军花 杨娅男 +1 位作者 张瑾 邓予新 《世界中西医结合杂志》 2012年第5期384-387,共4页
目的观察酸甘生津方及其拆方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺组织的病理表现及免疫组化中B细胞活化因子(BAFF)的影响。方法将60只BALB/C小鼠随机分为全方组,养阴、活血、解毒3个拆方组及空白组,模型组共六组。除空白组外,其余五组小鼠... 目的观察酸甘生津方及其拆方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺组织的病理表现及免疫组化中B细胞活化因子(BAFF)的影响。方法将60只BALB/C小鼠随机分为全方组,养阴、活血、解毒3个拆方组及空白组,模型组共六组。除空白组外,其余五组小鼠采用同种小鼠颌下腺接种方法造模,造模2周后用免疫组化法观察各组小鼠颌下腺BAFF含量的变化,分析比较各组间表达差异。结果组织切片总阳性率:全方组与活血组相等,与养阴组和解毒组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SS模型小鼠颌下腺组织BAFF表达水平:各给药组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。其中全方组、活血组及养阴组的BAFF表达水平均低于解毒组,差异有统计学意义(P<0.01),但此三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论酸甘生津方及其拆方对模型组小鼠颌下腺BAFF过度分泌有较好的抑制作用,可能通过调控BAFF表达来抑制B细胞异常活化。 展开更多
关键词 干燥综合征(SS) 酸甘生津方 拆方 SS模型小鼠 b细胞活化因子(bAFF)
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B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究 被引量:3
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作者 吉清 钟小林 +3 位作者 高会广 李蓉芬 彭家和 何凤田 《重庆医学》 CAS CSCD 2005年第1期87-89,共3页
目的 获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。 方法 重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + ... 目的 获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。 方法 重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。 结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112 2 85蛋白。结论 优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数 ,所获结果为进一步研究创造了条件。 展开更多
关键词 b细胞活化因子(bAFF) 包涵体 纯化 复性
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B细胞刺激因子在特发性炎性肌病相关肺间质病变的临床意义
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作者 徐晓晓 黄敏慧 +1 位作者 谢晓韵 李懿莎 《中华临床免疫和变态反应杂志》 CAS 2023年第4期335-341,共7页
目的探究B细胞刺激因子(BAFF)在特发性炎性肌病(IIM)相关肺间质病变(ILD)中的临床意义。方法纳入122例IIM患者,其中86例并发ILD,按性别、年龄匹配40例正常人作为对照,采用酶联免疫吸附试验检测BAFF,分析其临床意义。结果与non-ILD组相比... 目的探究B细胞刺激因子(BAFF)在特发性炎性肌病(IIM)相关肺间质病变(ILD)中的临床意义。方法纳入122例IIM患者,其中86例并发ILD,按性别、年龄匹配40例正常人作为对照,采用酶联免疫吸附试验检测BAFF,分析其临床意义。结果与non-ILD组相比,IIM-ILD组BAFF水平显著升高[2.19(1.07~4.54)ng mL vs.1.14(0.61~2.30)ng mL,P=0.005],是IIM-ILD的独立危险因素。抗MDA5抗体及抗合成酶抗体(ASA)阳性的IIM患者BAFF水平显著高于双阴性患者(P<0.05)。BAFF>3.74 ng mL时,对于诊断IIM-ILD的敏感性为36.0%,特异性为97.2%(AUC=0.681,P=0.002);联合KL-6时,对于诊断IIM-ILD的敏感性为82.6%,特异性为80.6%(AUC=0.868,P<0.001)。BAFF与铁蛋白呈正相关(r=0.368,P<0.001),与KL-6、肺部HRCT评分、肺功能无明显相关性。结论BAFF在IIM-ILD患者中显著升高,可作为IIM人群合并ILD的生物标志物。 展开更多
关键词 特发性炎性肌病 肺间质病变 b细胞刺激因子 KL-6 肌炎特异性抗体
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癫痫患者血清微小核糖核酸-222和B细胞活化因子水平表达的临床意义及预后评估价值
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作者 金勇 艾佩莹 彭雪娜 《慢性病学杂志》 2023年第8期1148-1151,共4页
目的探究癫痫患者血清微小核糖核酸-222(micro ribonucleic acid-222,miR-222)、B细胞活化因子(B-cell activating factor of the TNF family,BAFF)水平表达的临床意义及预后评估价值。方法选取2021年6月至2022年12月惠州市中心人民医... 目的探究癫痫患者血清微小核糖核酸-222(micro ribonucleic acid-222,miR-222)、B细胞活化因子(B-cell activating factor of the TNF family,BAFF)水平表达的临床意义及预后评估价值。方法选取2021年6月至2022年12月惠州市中心人民医院80例癫痫患者为观察组,根据预后情况分为预后良好组(58例)与预后不良组(22例),另选同期惠州市中心人民医院80名健康体检者为对照组。检测血清miR-222、微小核糖核酸-21(micro ribonucleic acid-21,miR-21)、BAFF、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)水平,分析血清miR-222、BAFF水平对癫痫患者的临床意义及预后影响。结果观察组血清miR-222、miR-21、BAFF、IL-10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组血清miR-222、miR-21、BAFF、IL-10水平低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析显示,miR-222、BAFF过表达是癫痫患者预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,患者入院时血清miR-222、BAFF单独及联合检测癫痫患者预后不良的AUC为0.73、0.78、0.80,均具有一定价值。当血清miR-222、BAFF的cut-off值取1.21、7.83时,可获得最佳预测值。结论血清miR-222、BAFF水平与癫痫患者预后不良有关,可用于预后评估。 展开更多
关键词 癫痫 血清微小核糖核酸-222 b细胞活化因子 联合检测 预后
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系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞活化因子的检测及意义 被引量:3
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作者 王丽芹 王吉波 +1 位作者 梁宏达 董静 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第31期13-15,共3页
目的探讨血清B淋巴细胞活化因子(BAFF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法采用ELISA法检测45例SLE患者(SLE组)血清BAFF水平,免疫比浊法检测血清补体C3、C4水平;计算疾病活动性(SLAM)和损伤指数(SLICC/ACR);对BAFF水平与补体C3和C4... 目的探讨血清B淋巴细胞活化因子(BAFF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法采用ELISA法检测45例SLE患者(SLE组)血清BAFF水平,免疫比浊法检测血清补体C3、C4水平;计算疾病活动性(SLAM)和损伤指数(SLICC/ACR);对BAFF水平与补体C3和C4、SLAM、SLICC/ACR进行相关性分析。对照组为45例查体健康者。结果 SLE组血清BAFF水平明显高于对照组,抗dsDNA抗体阳性者(13例)BAFF水平明显高于阴性者,P均<0.001。BAFF水平与补体C3呈显著负相关(r=-0.298,P=0.047),与补体C4无明显相关性,与SLAM呈显著正相关(r=0.450,P=0.002);与SLICC/ACR呈显著正相关(r=0.388,P=0.009)。结论 BAFF可能参与了SLE的发病与发展,检测血清BAFF水平有助于判断SLE活动性及预后;应用BAFF拮抗剂有望改善SLE病情。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 b淋巴细胞活化因子
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干燥综合征患者唇腺组织与外周血B淋巴细胞活化因子及其受体的表达及意义 被引量:3
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作者 杨西超 朱平 +1 位作者 王彦宏 樊春梅 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期240-243,289,共5页
目的检测原发性干燥综合征(pSS)及重叠其他结缔组织病的干燥综合征(SS)患者外周血B淋巴细胞活化因子(BAFF)和外周血B淋巴细胞/唇腺组织中BAFF受体(BAFF—R)的表达,进一步观察和研究BAFF在SS发病过程中的作用,并探讨将唇腺组... 目的检测原发性干燥综合征(pSS)及重叠其他结缔组织病的干燥综合征(SS)患者外周血B淋巴细胞活化因子(BAFF)和外周血B淋巴细胞/唇腺组织中BAFF受体(BAFF—R)的表达,进一步观察和研究BAFF在SS发病过程中的作用,并探讨将唇腺组织BAFF—R水平检测作为SS病理诊断指标的可能性。方法选取确诊pSS患者和与类风湿关节炎(RA)或系统性红斑狼疮(SLE)重叠的SS患者唇腺组织及外周血样本各15例,并选择15例非SS颌面部手术患者的正常唇腺组织及外周血作为对照。同步采用免疫组织化学技术检测唇腺组织BAFF—R表达情况,以流式细胞术检测外周血CD19^+B淋巴细胞表面BAFF—R的表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外周血清中可溶性BAFF的水平。采用,检验、Fisher确切概率法、单因素方差分析、LSD—t检验进行统计学处理。结果与对照组15例唇腺组织BAFF—R弱阳性着色相比,13例占87%的pSS患者唇腺组织中BAFF—R特异性染色呈强阳性;SS患者外周血中CD19^+B淋巴细胞膜表面BAFF—R表达和血清中可溶性BAFF均高于对照组[(21.4±4.6)%与(4.0±1.6)%,P〈0.01;(7.5±2.3)mg/ml与(2.0±0.8)ng/ml,P〈0.01]。而15例与RA/SLE重叠的SS患者,其唇腺组织的BAFF—R的表达占75%,外周血CD19^+B淋巴细胞膜表面BAFF—R的表达为(23.3±5.0)%,其血清中可溶性BAFF的表达为(7.8±1.9)ng/ml均高于对照组(P值均〈0.01),但与pSS组相比差异无统计学意义(P值均〉0.05)。结论SS患者唇腺组织与外周血中B淋巴细胞膜表面BAFF—R以及血清可溶性BAFF的表达水平均上调,可能通过激活自身反应性B淋巴细胞参与SS的发病过程;检测唇腺组织B淋巴细胞膜表面BAFF—R可能有助于SS的诊断和疾病活动的判定。 展开更多
关键词 干燥综合征 b淋巴细胞 涎腺 b淋巴细胞活化因子
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1型糖尿病患者血清B细胞活化因子水平改变及其临床意义 被引量:2
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作者 邱友燕 何凌 +2 位作者 陈子龙 周雯 夏碧文 《现代医学》 2018年第8期863-866,共4页
目的:探讨1型糖尿病(T1DM)患者血清B细胞活化因子(BAFF)水平的变化及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测26例T1DM患者、25例2型糖尿病(T2DM)患者、20例健康体检者血清BAFF水平。比较三组间差异,探讨血清BAFF与患者年龄、... 目的:探讨1型糖尿病(T1DM)患者血清B细胞活化因子(BAFF)水平的变化及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测26例T1DM患者、25例2型糖尿病(T2DM)患者、20例健康体检者血清BAFF水平。比较三组间差异,探讨血清BAFF与患者年龄、病程、胰岛功能、糖化血红蛋白、血脂等的关系。结果:血清BAFF水平T1DM组高于T2DM组及对照组(297. 54 vs. 218. 80 vs. 199. 20,F=4. 257,P <0. 05);T2DM组与对照组则差异无统计学意义(P> 0. 05); T1DM组血清BAFF水平与糖化血红蛋白(HbA1c)呈正相关(r=0. 613,P=0. 001),与空腹C肽(FCP)呈负相关(r=-0. 506,P=0. 008); T1DM组血清BAFF水平与总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)呈正相关(r=0. 413,0. 581,P=0. 036,0. 002);多元逐步法回归分析得出的回归方程为:FCP=0. 494-0. 001×BAFF水平;其中R2=0. 256,F=8. 241,P=0. 008。此方程表明BAFF水平与FCP呈弱负相关。结论:BAFF水平可能与T1DM患者血糖升高、C肽下降密切相关,并BAFF水平可能与T1DM患者血脂紊乱相关。 展开更多
关键词 1型糖尿病 b细胞活化因子 胰岛功能
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含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子疫苗对狼疮肾炎模型小鼠的保护作用 被引量:2
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作者 戴辉腾 田浤 +4 位作者 黄捷 陈超 蔡棣 高向东 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期483-489,共7页
考察含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子(BAFF)治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的效果。利用本研究前期构建的工程菌,表达纯化了B淋巴细胞刺激因子的可溶型突变体(sm BAFF)以及在其65位定点引入了对硝基苯丙氨酸的改构体(pNO_2Phe^(65... 考察含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子(BAFF)治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的效果。利用本研究前期构建的工程菌,表达纯化了B淋巴细胞刺激因子的可溶型突变体(sm BAFF)以及在其65位定点引入了对硝基苯丙氨酸的改构体(pNO_2Phe^(65)sm BAFF)。通过考察pNO_2Phe^(65)sm BAFF体外促小鼠淋巴细胞增殖活性、免疫原性以及所诱导的抗血清对天然BAFF活性的抑制作用,评价了其用于治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的可行性;同时采用了cGVHD(graft-versus-host disease)诱导的狼疮肾炎小鼠模型评价了pNO_2Phe^(65)sm BAFF的药理活性。结果表明:定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO_2Phe^(65)sm BAFF不具有促进小鼠淋巴细胞增殖的能力;由于对硝基苯丙氨酸的引入显著增强了蛋白的免疫原性,诱导机体产生了可以抑制天然BAFF活性的交叉抗体;在cGVHD诱导的狼疮肾炎小鼠模型中,pNO_2Phe^(65)sm BAFF可显著减轻疾病症状。定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO_2Phe^(65)sm BAFF可以作为治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的候选分子。 展开更多
关键词 b淋巴细胞刺激因子 对硝基苯丙氨酸 免疫原性 CGVHD
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重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析
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作者 陈麟凤 何凤田 +4 位作者 李蓉芬 钟小林 张艳 高会广 吉清 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期274-278,共5页
目的 制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134~ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法 提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134~ ... 目的 制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134~ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法 提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134~ 2 85氨基酸残基cDNA ,经序列测定后 ,构建于原核表达载体 pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达及Ni2 + NTA柱层析纯化目的蛋白 ,行SDS PAGE和Western印迹检测。最后经MTT法检测其增殖活性。结果 RT PCR扩增得到了 4 5 9bp的cDNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF13 4 2 85的cDNA序列一致 ,SDS PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为 6×His BAFF13 4 2 85融合蛋白并存在于包涵体中。活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF13 4 2 85,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性 ,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 tnf家族的b细胞激活因子(bAFF) CDNA克隆 原核表达 淋巴细胞活化
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B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究 被引量:1
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作者 丁涵露 王莉 +2 位作者 倪兵 高闻达 钟雪梅 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期228-231,289,共5页
目的观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白(BAFF—R—IgG4mut)对狼疮鼠病变的影响。方法100μl的磷酸盐缓冲液(PBS)、200μg人IgG4和100μgBAFF—R—IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分... 目的观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白(BAFF—R—IgG4mut)对狼疮鼠病变的影响。方法100μl的磷酸盐缓冲液(PBS)、200μg人IgG4和100μgBAFF—R—IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^+CD5^-B细胞、CD3^+CD4^-CD8^+T细胞和CD3^+CD4^+CD8^-T细胞的表达,检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA(dsDNA)抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率。以方差分析和,检验进行数据统计。结果实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是(2.0±1.6)ng/ml、(4.1±2.2)ng/ml、(3.7±1.9)ng/ml、(3.9±1.8)ng/ml,较对照组下降(P〈0.01);外周血、脾脏组织中B220^+CD5^-细胞比率较对照组下降(P〈0.01),蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少,IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻(P〈0.01),存活率较对照组延长(P〈0.01)。结论BAFF—R~IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 b细胞刺激因子受体 bXSb狼疮鼠
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重组人可溶性突变体BAFF蛋白的制备及生物学活性的鉴定 被引量:1
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作者 李鸿昌 焦玉莲 +6 位作者 崔彬 刘晓雯 卢冰如 孙文萍 孙亚方 刘相东 赵跃然 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第3期17-23,33,共8页
目的制备高纯度的B细胞活化因子(BAFF)可溶性突变体(smBAFF)蛋白,鉴定其生物学活性。方法重组原核表达载体pET41a/smBAFF在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达smBAFF蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,超声碎菌,提取包涵体,Ni2+-... 目的制备高纯度的B细胞活化因子(BAFF)可溶性突变体(smBAFF)蛋白,鉴定其生物学活性。方法重组原核表达载体pET41a/smBAFF在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达smBAFF蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,超声碎菌,提取包涵体,Ni2+-NTA亲和层析纯化,复性,鉴定其生物学活性。结果经鉴定表达出相对分子质量为1.7×104的外源蛋白smBAFF,经Ni2+-NTA亲和层析纯化出该重组蛋白,复性后的smBAFF与B细胞具有较高的亲和力,但失去共刺激B细胞增殖的能力,且能竞争性抑制天然sBAFF的作用。结论成功制备具有B细胞结合活性而失去刺激B细胞增殖活性的smBAFF,为以smBAFF为靶向载体在B细胞恶性增殖性和异常活化性疾病治疗研究奠定基础。 展开更多
关键词 b细胞活化因子 原核细胞 包涵体 蛋白质复性
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B淋巴细胞活化因子特异的单链DNA适体的人工进化 被引量:1
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作者 曾贤铭 仲人前 +4 位作者 周琳 杨再兴 梁艳 蒋廷旺 吴传勇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第3期230-234,共5页
目的:进化筛选与B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor be longing to the TNF family,BAFF)特异结合的单链DNA适体,鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化(systemati cevolution of ligands by exponential enrich... 目的:进化筛选与B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor be longing to the TNF family,BAFF)特异结合的单链DNA适体,鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化(systemati cevolution of ligands by exponential enrich-ment,SELEX)技术,将随机序列寡核苷酸文库与BAFF分子相互作用,分离出结合的寡核苷酸配体,经反复扩增、筛选数个循环,获得重组人BAFF的单链DNA适体,应用Dot blotting鉴定其结合力,酶联法比较各适体序列对BAFF的相对结合力。结果:优化实验条件后成功进行了13轮次筛选,随机选取42个阳性克隆测序,各序列GC含量最高达75%,分为6类不同序列;Dotblotting证实这些适体均与BAFF相结合;比较各适体序列结合BAFF的光密度值,以序列44光密度值最高(0.752,P<0.05),具有对BAFF相对最高结合力。结论:首次成功获得特异结合BAFF的高亲和力的单链DNA适体,为研发防治肿瘤和自身免疫疾病新药奠定了基础。 展开更多
关键词 b淋巴细胞活化因子 适体 单链DNA 指数富集的配体进化技术 进化
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人sΔBAFF的高效原核表达及纯化
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作者 黄刚 何凤田 +5 位作者 李蓉芬 高会广 陈麟凤 龚薇 胡颖 胡大强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期130-133,共4页
目的克隆TNF家族B细胞激活因子(B cell activating factor to the TNF family,BAFF)胞外区134~285(sBAFF134-285)氨基酸残基段缺失突变体(s△BAFF)的cDNA,并进行表达及纯化.方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向... 目的克隆TNF家族B细胞激活因子(B cell activating factor to the TNF family,BAFF)胞外区134~285(sBAFF134-285)氨基酸残基段缺失突变体(s△BAFF)的cDNA,并进行表达及纯化.方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向PCR法,扩增缺失编码sBAFF的142~160位氨基酸的核苷酸序列.经测序证实后,克隆入原核表达载体pQE-80L.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白.结果经一步反向PCR扩增后得到401 bp的DNA片段,该片段序列与GenBank报道的编码人△BAFF的胞外区(s△BAFF)cDNA序列一致.含s△BAFF的表达载体在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为18 000的蛋白质并以包涵体的形式存在,经Ni2+-NTA柱层析纯化后得到高纯度的目的蛋白.结论已成功地制备出人s△BAFF蛋白,为其功能的研究创造了条件. 展开更多
关键词 tnf家族b细胞激活因子 CDNA克隆 原核表达 纯化
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鼠TNF家族的B细胞活化因子ORF基因的克隆及原核表达
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作者 弓莉 王元占 +4 位作者 杨培梁 刘谋荣 朱玉峰 曾俊岭 吴湘慧 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期970-973,共4页
目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF O... 目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF,转化大肠杆菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果 RT-PCR扩增得到约930bp的cDNA,其序列与GenBank中登录的鼠BAFF ORF cDNA序列的同源性达99.9%;重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为76500,IPTG终浓度为0.9mmol/L,诱导时间为4h,目的蛋白的表达量最高,破菌上清和沉淀中均可见目的蛋白条带,可溶性蛋白的表达量占全菌总蛋白的49%;纯化的重组蛋白纯度可达90%,含量为0.9mg/ml,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆了鼠BAFF ORF基因,并进行了原核表达及纯化,为进一步研究其生物功能奠定了基础。 展开更多
关键词 tnf家族的b细胞活化因子 克隆 分子 原核细胞 基因表达
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