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SD大鼠βB_2-晶体蛋白的克隆、表达与纯化
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作者 刘梦蕾 李闻捷 +2 位作者 蔡刚 张燕 张军 《现代临床医学生物工程学杂志》 2005年第1期1-4,共4页
目的 得到大量纯的βB2 -晶体蛋白,为研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.方法 从SD大鼠晶状体中抽提总RNA ,用RT -PCR法克隆βB2 -晶体蛋白的cDNA ,装入原核表达载体pGEX - 4T - 1后用萘啶酮酸(IPTG)诱导表达;用GST纯化系统... 目的 得到大量纯的βB2 -晶体蛋白,为研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.方法 从SD大鼠晶状体中抽提总RNA ,用RT -PCR法克隆βB2 -晶体蛋白的cDNA ,装入原核表达载体pGEX - 4T - 1后用萘啶酮酸(IPTG)诱导表达;用GST纯化系统纯化并用蛋白水解酶对融合蛋白进行酶切.结果 βB2 -pGEX重组质粒经测序及限制性内切酶分析等鉴定,与预期结果一致;IPTG诱导后,蛋白质在大肠杆菌BL2 1中得到高效表达.纯化酶切后,经Westenblot方法验证,得到了高纯度的βB2 -晶体蛋白.结论 成功构建了βB2 -pGEX原核表达载体,高效表达了βB2-GST融合蛋白,经纯化和酶切得到了高纯度的βB2 -晶体蛋白,为进一步研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础. 展开更多
关键词 βb2-晶体蛋白 克隆 表达 纯化 大肠杆菌
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βB2晶体蛋白晶体外功能研究进展
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作者 黄玮 李美慧 +2 位作者 刘胜楠 顾仲毅 张俊洁 《中国临床医学》 2022年第6期1030-1033,共4页
B2晶体蛋白是脊椎动物晶状体中的主要结构蛋白,除在晶状体内发挥作用外,近年研究发现其在晶状体外也表现突出。βB2晶体蛋白高表达于视网膜、大脑、睾丸及卵巢,既可促进视神经轴突再生、保护损伤的视神经,还可影响感觉运动门控和海马功... B2晶体蛋白是脊椎动物晶状体中的主要结构蛋白,除在晶状体内发挥作用外,近年研究发现其在晶状体外也表现突出。βB2晶体蛋白高表达于视网膜、大脑、睾丸及卵巢,既可促进视神经轴突再生、保护损伤的视神经,还可影响感觉运动门控和海马功能,同时影响生殖功能,可能与胎儿流产相关。此外,最新研究还表明,βB2晶体蛋白与多种肿瘤的发生、发展相关。本文就βB2晶体蛋白的晶状体外功能及研究进展作一综述。 展开更多
关键词 b2晶体蛋白 视网膜 卵巢 流产 海马 肿瘤
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Clinical significance of serum biochemistry changes in mice with targeted disruption of βB2-crystallin gene 被引量:3
3
作者 Fen-Fen Xiang, Wen-Jie Li 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2012年第1期55-58,共4页
AIM: To explore the pathogenesis, influencing factors, ways of medical intervention and evaluation indicators of cataract by observing changes in serum biochemical indices in mice with targeted disruption of βB2-crys... AIM: To explore the pathogenesis, influencing factors, ways of medical intervention and evaluation indicators of cataract by observing changes in serum biochemical indices in mice with targeted disruption of βB2-crystallin. · METHODS: Nine 6-week-old male mice with targeted knockout of βB2-crystallin were used as the study group, and nine age- and sex-matched normal wild-type mice as the control group. The genetype of the modeled mice was identified by PCR technique. Tropicamide and phenylephrine eye drops were used as the cycloplegic agents to observe changes in lens opacity with a slit-lamp. The lens was then removed and blood was collected for biochemical evaluation in the serum. · RESULTS: Two genotypes were successfully identified by PCR technique. Slit-lamp observation showed that the lens cortex was opaque and GSH level in the lens cortex was remarkably decreased in mice with βB2-crystallin deficiency compared with the control group (P <0.01). Serum Na+, Cl-, Ca2+, Mg2+ and Fe2+ levels, ALT and AST activities, and TP, ALP, Cr, TC, GLU content were decreased significantly compared with the control group (P <0.05). There was no difference in LDH, P, Cu2+, K+ levels between the two groups (P >0.05). · CONCLUSION: Compared with the wild-type mice, serum biochemical indices underwent significant changes in mice with targeted disruption of βB2-crystallin gene, especially with abnormal distribution of Na+&Ca2+, which induced the formation of cataract. 展开更多
关键词 βb2-crystallin KNOCKOUT CATARACT MICE serum biochemistry
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βB2晶体蛋白基因敲除与小鼠年龄相关性白内障 被引量:4
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作者 薛炼 姚雯颖 +3 位作者 张军 高莉 付清 李闻捷 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第1期28-30,共3页
目的:研究βB2晶体蛋白基因敲除对于小鼠晶状体功能的影响。方法:采用胚胎干细胞打靶技术,培育出基因敲除小鼠。用裂隙灯显微镜观察小鼠晶状体的病变;透射和扫描电镜观察晶状体的超微结构;观察该基因敲除后晶状体形态和功能改变。结果:... 目的:研究βB2晶体蛋白基因敲除对于小鼠晶状体功能的影响。方法:采用胚胎干细胞打靶技术,培育出基因敲除小鼠。用裂隙灯显微镜观察小鼠晶状体的病变;透射和扫描电镜观察晶状体的超微结构;观察该基因敲除后晶状体形态和功能改变。结果:βB2晶体蛋白基因敲除后,新生的小鼠晶状体发育正常;随年龄增长,小鼠晶状体的质量、直径和正常小鼠比较明显减少;小鼠在生后数月内发生皮质性白内障,其程度随年龄增长而加重;电镜观察显示晶状体细胞纤维排列异常。结论:小鼠βB2晶体蛋白基因敲除导致年龄相关性白内障的发生。 展开更多
关键词 βb2晶体蛋白 基因敲除 白内障
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βB_2晶状体蛋白与白内障 被引量:3
5
作者 蒋燕 康刚劲 +1 位作者 徐曼华 李开明 《国际眼科杂志》 CAS 2016年第2期261-264,共4页
βB_2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最多的一种,在维持晶状体的透明性和屈光性中起着重要作用。βB_2晶状体蛋白异常可能与多种类型白内障的形成有关。近年来,CRYBB_2基因突变所致白内障的机制成为研究的热点。本文将对βB_2晶状体... βB_2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最多的一种,在维持晶状体的透明性和屈光性中起着重要作用。βB_2晶状体蛋白异常可能与多种类型白内障的形成有关。近年来,CRYBB_2基因突变所致白内障的机制成为研究的热点。本文将对βB_2晶状体蛋白的结构、功能、相关突变、与各类型白内障关系做一综述。 展开更多
关键词 βb2晶状体蛋白 白内障 功能 结构
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大鼠βB2-晶体蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 胡书群 裴冬生 +1 位作者 陆梁 赵惠仁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期433-436,共4页
目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表... 目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表达的蛋白质用DEAE纤维素层析和凝胶过滤纯化,SDS-PAGE显示一条带。与佐剂混合后免疫新西兰大白兔。结果纯化了大鼠βB2-晶体蛋白,成功制备了其多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 βb2-晶体蛋白 表达 纯化 抗体
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βB2晶体蛋白在晶状体内外功能及相关机制研究
7
作者 高谦 张俊洁 李闻捷 《医学综述》 2013年第5期769-771,共3页
βB2晶体蛋白是β族晶体蛋白中含量最多的一种,是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,对维持晶状体的透明性和屈光度起主要作用。近年来,研究发现βB2基因不仅在晶状体内表达,而且在晶状体外也有高表达,并行使一定功能,尤其对生殖功... βB2晶体蛋白是β族晶体蛋白中含量最多的一种,是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,对维持晶状体的透明性和屈光度起主要作用。近年来,研究发现βB2基因不仅在晶状体内表达,而且在晶状体外也有高表达,并行使一定功能,尤其对生殖功能有重要影响。βB2晶体蛋白在晶状体外的功能及相关作用机制成为研究的新热点。该文就βB2晶体蛋白在晶状体内外的功能及可能作用机制进行探讨,以期加深对特殊晶体蛋白新特性的了解。 展开更多
关键词 βb2晶体蛋白 机制 钙离子 生殖
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βB2晶状体蛋白在晶状体内外功能的研究进展
8
作者 相芬芬 张俊洁 李闻捷 《国际眼科杂志》 CAS 2012年第1期69-71,共3页
βB2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最高的一类,主要高表达于晶状体内,其正常结构及其水溶性成分水平对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要。新近研究发现,βB2晶状体蛋白不仅仅表达于晶状体内,在晶状体外组织如睾丸、脑、视网膜... βB2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最高的一类,主要高表达于晶状体内,其正常结构及其水溶性成分水平对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要。新近研究发现,βB2晶状体蛋白不仅仅表达于晶状体内,在晶状体外组织如睾丸、脑、视网膜等也存在较高水平的表达,并对这些组织或细胞的某些相关功能有一定影响。 展开更多
关键词 βb2晶状体蛋白 晶状体 表达
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βB2-晶体蛋白的克隆和在大肠杆菌中的高效表达和纯化
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作者 赵惠仁 胡书群 +1 位作者 裴冬生 张光毅 《徐州医学院学报》 CAS 1998年第6期444-446,共3页
目的表达βB2-晶体蛋白,以研究其结构与功能的关系。方法用RT-PCR的方法从大鼠晶状体中获得βB2-晶体蛋白的cDNA,将cDNA克隆到表达载体pMON5743,转染E.coli菌株JM101,以萘啶酮酸诱导表达β... 目的表达βB2-晶体蛋白,以研究其结构与功能的关系。方法用RT-PCR的方法从大鼠晶状体中获得βB2-晶体蛋白的cDNA,将cDNA克隆到表达载体pMON5743,转染E.coli菌株JM101,以萘啶酮酸诱导表达βB2-晶体蛋白,用DEAE纤维素层析纯化。结果RT-PCR扩增获得约700bp的cDNA,在E.coli中获得高效表达,βB2-晶体蛋白占细菌总蛋白的30%。DEAE纯化后获一24kD蛋白,分子量与βB2-晶体蛋白一致。结论βB2-晶体蛋白cDNA可在大肠杆菌中获高效表达,表达产物的分子量约24kD。 展开更多
关键词 βb2晶体蛋白 RT-PCR 克隆 纯化 大肠杆菌
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βB2晶体蛋白与小鼠年龄相关性白内障的发生 及其晶状体功能的相关性研究 被引量:4
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作者 唐莉 蒋慧莉 +2 位作者 马波 杨文 龚珂 《临床和实验医学杂志》 2021年第10期1029-1032,共4页
目的研究βB2晶体蛋白与小鼠年龄相关性白内障的发生相关性,并探讨βB2晶体蛋白与小鼠晶状体功能的相关性。方法通过胚胎打靶技术建立βB2晶体基因敲除的小鼠(βB2 KO组,n=50),以野生型(WT组,n=50)小鼠作为对照。通过紫外线照射晶状体... 目的研究βB2晶体蛋白与小鼠年龄相关性白内障的发生相关性,并探讨βB2晶体蛋白与小鼠晶状体功能的相关性。方法通过胚胎打靶技术建立βB2晶体基因敲除的小鼠(βB2 KO组,n=50),以野生型(WT组,n=50)小鼠作为对照。通过紫外线照射晶状体诱导小鼠发生白内障,分别比较诱导白内障后4、8、12、16、20个月小鼠体重、晶状体重量和直径、白内障的发生率以及晶状体谷胱甘肽(GSH)含量。结果2组小鼠体重、晶状体的重量和直径、以及白内障的发生率均随年龄增长而增加,而晶状体GSH水平随年龄增加而降低。与WT组小鼠相比,同龄βB2 KO组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。与WT组小鼠相比,同龄βB2 KO组小鼠晶状体的重量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。4~12月龄时2组小鼠晶状体的直径比较,差异无统计学意义(P>0.05);与WT组小鼠相比,16、20月龄时βB2 KO组小鼠晶状体直径均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。4、8月龄时2组小鼠晶状体GSH水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与WT组小鼠相比,12~20月龄时βB2 KO组小鼠晶状体GSH水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与WT组小鼠相比,4~12月龄时βB2 KO组小鼠白内障发生率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);16、20月龄时2组小鼠白内障发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论βB2晶体蛋白与小鼠年龄相关的白内障的发生有关,βB2基因敲除增加小鼠年龄相关的白内障的发生率,其机制可能与βB2基因敲除抑制晶状体发育有关。 展开更多
关键词 小鼠 βb2晶体蛋白 年龄相关白内障 基因敲除
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βB2晶体蛋白在小鼠卵巢组织中的表达 被引量:1
11
作者 张俊洁 张薇薇 +2 位作者 姚雯颖 张军 李闻捷 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第2期1-3,共3页
目的观察βB2晶体蛋白在卵巢组织中的表达.方法采用实时定量PCR,Westernblot和免疫组化方法对卵巢组织βB2基因及晶体蛋白表达进行检测.结果三种检测方法均发现小鼠卵巢组织中βB2晶体蛋白存在表达,且其表达量随小鼠鼠龄增长有明显上... 目的观察βB2晶体蛋白在卵巢组织中的表达.方法采用实时定量PCR,Westernblot和免疫组化方法对卵巢组织βB2基因及晶体蛋白表达进行检测.结果三种检测方法均发现小鼠卵巢组织中βB2晶体蛋白存在表达,且其表达量随小鼠鼠龄增长有明显上调.结论小鼠卵巢组织中存在βB2晶体蛋白表达,提示其在卵巢中存在一定的功能. 展开更多
关键词 βb2晶体蛋白 卵巢 表达
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长链非编码RNA A-30-P01019163对卵巢颗粒细胞βB2晶体蛋白表达的调控及对颗粒细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1
12
作者 刘胜楠 李美慧 +2 位作者 李励 黄玮 张俊洁 《中国临床医学》 2021年第5期795-801,共7页
目的:探讨lncRNA A-30-P01019163对卵巢颗粒细胞βB2晶体蛋白(βB2 crystallin,CryBB2)表达的调控作用,以及其对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建小鼠卵巢颗粒细胞过表达lncRNA A-30-P01019163体内模型,同时基于人卵巢颗粒细胞... 目的:探讨lncRNA A-30-P01019163对卵巢颗粒细胞βB2晶体蛋白(βB2 crystallin,CryBB2)表达的调控作用,以及其对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建小鼠卵巢颗粒细胞过表达lncRNA A-30-P01019163体内模型,同时基于人卵巢颗粒细胞系KGN构建过表达或干扰lncRNA A-30-P01019163稳定细胞株。采用qRT-PCR和Western印迹法检测lncRNA A-30-P01019163过表达或干扰后颗粒细胞中CryBB2的表达水平,采用EdU法检测细胞增殖,采用TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果:随着小鼠周龄增长,卵巢颗粒细胞lncRNA A-30-P01019163表达逐渐增加(P<0.05)。过表达lncRNA A-30-P01019163后,小鼠卵巢颗粒细胞中CryBB2 mRNA和蛋白表达均增加(P<0.01)。对卵巢颗粒细胞系KGN过表达lncRNA A-30-P01019163后,其CryBB2 mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05);颗粒细胞增殖加快,细胞周期相关蛋白D1及增殖细胞核抗原蛋白表达均增加(P<0.01);颗粒细胞凋亡增加,凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)切割体及多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)切割体表达均增加(P<0.05)。而干扰卵巢颗粒细胞系KGN中lncRNA A-30-P01019163后,CryBB2 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01);颗粒细胞增殖减慢,细胞周期相关蛋白D1及增殖细胞核抗原蛋白表达均降低(P<0.01);颗粒细胞凋亡减少,caspase-3及PARP切割体表达均降低(P<0.05)。结论:小鼠卵巢颗粒细胞中lncRNA A-30-P01019163表达随卵巢发育逐渐增加,参与调控CryBB2表达,并与颗粒细胞增殖、凋亡密切相关。 展开更多
关键词 长链非编码RNA βb2晶体蛋白 卵巢颗粒细胞 增殖 凋亡
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βB2晶状体蛋白对小鼠卵巢发育及动情周期的影响 被引量:2
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作者 高谦 杨晓妍 +3 位作者 谷明莉 朱荣荣 张俊洁 李闻捷 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2013年第4期217-223,共7页
目的:初步探讨βB2晶状体蛋白(Crybb2)参与调节生殖过程的作用机制。方法:选取11-13周龄βB2基因敲除(KO组,n=19)与野生型C57BL/C(WT组,n=23)雌性小鼠,阴道涂片观察动情周期变化;HE染色观察卵巢病理变化;光学显微镜下计数卵巢最大切面... 目的:初步探讨βB2晶状体蛋白(Crybb2)参与调节生殖过程的作用机制。方法:选取11-13周龄βB2基因敲除(KO组,n=19)与野生型C57BL/C(WT组,n=23)雌性小鼠,阴道涂片观察动情周期变化;HE染色观察卵巢病理变化;光学显微镜下计数卵巢最大切面原始卵泡、初级卵泡、闭锁卵泡;Western blotting和免疫组织化学确定βB2晶状体蛋白在卵巢组织中的表达与定位。结果:βB2晶状体蛋白主要表达在WT组小鼠卵巢颗粒细胞内。与WT组小鼠相比,KO组小鼠卵巢相对重量减轻,动情周期紊乱,原始卵泡、初级卵泡减少,闭锁卵泡增多。结论:βB2基因敲除小鼠的动情周期及卵巢发育异常,βB2晶状体蛋白对小鼠卵巢的发育有重要影响。 展开更多
关键词 βb2晶状体蛋白(Crybb2) 动情周期 卵巢发育
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