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酵母双杂交系统筛选与AtTR1相互作用的蛋白 被引量:1
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作者 罗勤 张亚 +3 位作者 谢林峰 彭梅芳 赵哲 杨毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1368-1372,共5页
AtTR1是拟南芥中发现的与植物高温和高盐等非生物胁迫相关的全新基因.采用GAL4酵母双杂交系统,以AtTR1作为诱饵蛋白,对拟南芥cDNA文库进行筛选,获得了与AtTR1有潜在相互作用的蛋白质PATL6(Patellin6).进一步采用GST pull-down方法在体... AtTR1是拟南芥中发现的与植物高温和高盐等非生物胁迫相关的全新基因.采用GAL4酵母双杂交系统,以AtTR1作为诱饵蛋白,对拟南芥cDNA文库进行筛选,获得了与AtTR1有潜在相互作用的蛋白质PATL6(Patellin6).进一步采用GST pull-down方法在体外验证了PATL6与AtTR1的相互作用.采用Real-time PCR检测PATL6在NaCl和Mannitol处理后的表达情况,结果显示PATL6的表达受高盐和高渗的诱导,是一个与非生物胁迫应答相关的基因.这些实验结果为进一步研究AtTR1及其相互作用蛋白质在植物抗逆胁迫中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 attr1 PATL6
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利用泛素分裂系统筛选AtTR1相互作用蛋白质 被引量:1
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作者 张亚 罗勤 +1 位作者 谢林峰 杨毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1085-1089,共5页
以AtTR1作为诱饵蛋白利用泛素分裂系统在拟南芥cDNA文库中筛选与拟南芥AtTR1基因相互作用的蛋白质.运用营养缺陷型培养基和X-Gal显色、PCR扩增及酶切分析等实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对.通过泛素分裂系统筛选到可靠的... 以AtTR1作为诱饵蛋白利用泛素分裂系统在拟南芥cDNA文库中筛选与拟南芥AtTR1基因相互作用的蛋白质.运用营养缺陷型培养基和X-Gal显色、PCR扩增及酶切分析等实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对.通过泛素分裂系统筛选到可靠的AtTR1相互作用蛋白质,测序比对后,选取HMA与AtTR1通过GST pull-down进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用,这对进一步研究AtTR1及其相互作用蛋白质在植物耐热中的作用和耐热分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 泛素分裂系统 attr1 耐热性
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拟南芥AtTR1对AtCPK28和AtCPK32的体外泛素化修饰研究 被引量:2
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作者 樊莉娟 陈彩丽 +3 位作者 朱旭辉 黄奎 姚润东 王健美 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期617-622,共6页
为了研究E3连接酶AtTR1和非生物胁迫应答的相关蛋白AtCPK28、AtCPK32之间关系,本文构建原核表达载体pET28a-AtCPK28和pET28a-AtCPK32,并在大肠杆菌中表达了AtTR1、AtCPK28和AtCPK32重组蛋白,利用亲和层析纯化相应融合蛋白.将AtCPK28和At... 为了研究E3连接酶AtTR1和非生物胁迫应答的相关蛋白AtCPK28、AtCPK32之间关系,本文构建原核表达载体pET28a-AtCPK28和pET28a-AtCPK32,并在大肠杆菌中表达了AtTR1、AtCPK28和AtCPK32重组蛋白,利用亲和层析纯化相应融合蛋白.将AtCPK28和AtCPK32蛋白分别加入含有ATP、泛素、E1、E2和AtTR1的体外泛素反应体系中,western blot检测到AtCPK28和AtCPK32有多聚泛素化条带,说明AtTR1在体外能多泛素化修饰AtCPK28和AtCPK32.结果表明AtCPK28和AtCPK32可能是AtTR1调控植物抗逆信号中的下游靶蛋白. 展开更多
关键词 拟南芥 attr1 AtCPK28 AtCPK32 泛素化
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拟南芥AtTR1在盐胁迫应答中的功能初探 被引量:3
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作者 刘巧红 杨亮 +2 位作者 刘志斌 李旭锋 杨毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期895-901,共7页
本研究主要探索油菜中E3泛素连接酶BnTR1在拟南芥中的同源基因AtTR1(At3g47550)的功能.通过体外泛素化实验证明AtTR1具有E3连接酶活性.基因表达分析显示该基因受200mmol/L NaCl显著诱导,说明该基因可能在响应盐胁迫中发挥一定的功能.为... 本研究主要探索油菜中E3泛素连接酶BnTR1在拟南芥中的同源基因AtTR1(At3g47550)的功能.通过体外泛素化实验证明AtTR1具有E3连接酶活性.基因表达分析显示该基因受200mmol/L NaCl显著诱导,说明该基因可能在响应盐胁迫中发挥一定的功能.为了更深入的探究该基因在植物耐盐中的作用,构建了植物表达载体pZH01-AtTR1转化突变体.在含有潮霉素的培养基上筛选阳性苗,并利用荧光定量PCR检测表明AtTR1基因已经成功转入突变体中. 展开更多
关键词 E3连接酶 表达谱分析 回复突变attr1/attr1
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拟南芥AtTR1相互作用蛋白质筛选和鉴定
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作者 朱旭辉 黄奎 +4 位作者 姚润东 彭露 裴林森 刘志斌 王健美 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期419-424,共6页
本研究利用酵母双杂交系统筛选与E3连接酶AtTR1存在相互作用的靶蛋白.首先,根据AtTR1所含有的结构域,我们对其进行了不同程度的截断以及点突变处理,以验证其各个片段的自激活活性和毒性.最终我们选取AtTR1-△119为诱饵蛋白对拟南芥归一... 本研究利用酵母双杂交系统筛选与E3连接酶AtTR1存在相互作用的靶蛋白.首先,根据AtTR1所含有的结构域,我们对其进行了不同程度的截断以及点突变处理,以验证其各个片段的自激活活性和毒性.最终我们选取AtTR1-△119为诱饵蛋白对拟南芥归一化通用型cDNA文库进行筛选.结果初步获得了13个与其有潜在互作的候选蛋白.经酵母正向和反向多次验证发现转化了AtTR1与CURT1C和AtTR1与SWEET5的酵母在三缺和四缺培养基中均正常生长,而且在含有X-α-gal的培养基中出现蓝斑.双分子荧光互补技术也证明AtTR1与CURT1C或SWEET5之间也有相互作用. 展开更多
关键词 拟南芥 E3连接酶attr1 酵母双杂交 类囊体膜曲率相关蛋白1C 蔗糖转运蛋白5
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