肺癌组织Napsin A和TTF-1表达及其临床价值 被引量：16

1

作者 韩一平 张鹏 +2 位作者 黄玲 李强 马大烈 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2010年第3期194-197,共4页

目的:探讨Napsin A在肺癌组织中的表达和临床意义,并与TTF-1比较在肺癌诊断中的应用价值。方法:采用免疫组化EnVision二步法检测NapsinA和TTF-1在324例肺癌组织中的表达,并分析其与临床病理学指标的关系。结果:NapsinA、TTF-1在肺癌组... 目的:探讨Napsin A在肺癌组织中的表达和临床意义,并与TTF-1比较在肺癌诊断中的应用价值。方法:采用免疫组化EnVision二步法检测NapsinA和TTF-1在324例肺癌组织中的表达,并分析其与临床病理学指标的关系。结果:NapsinA、TTF-1在肺癌组织中的总体阳性表达率分别为57.7%和60.8%。Nap-sinA对肺腺癌的敏感性和特异性(84.9%、93.8%)均高于TTF-1(84.4%、83.9%)。单因素分析显示,NapsinA和TTF-1阳性表达与患者性别、吸烟史、PS评分、病理类型、原发肿瘤大小及有无淋巴结转移密切相关,P<0.05;并与肺腺癌分化程度正相关,P<0.001。Logistics多因素分析显示,患者吸烟史及肿瘤病理类型为肺癌组织中NapsinA和TTF-1蛋白表达的共同影响因素,而性别仅与NapsinA相关,PS评分与TTF-1相关,P<0.05。结论:肺腺癌组织中NapsinA表达有较高的特异性,在肺腺癌诊断与鉴别的应用价值优于TTF-1。 展开更多

关键词 肺肿瘤 天冬氨酸激酶 免疫组织化学

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北京棒杆菌天冬氨酸激酶G377定点突变及酶学性质表征 被引量：10

2

作者 朱运明 王晓飞 +2 位作者 闵伟红 詹冬玲 王隆洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第9期192-197,共6页

采用饱和定点突变和高通量筛选技术,对北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)AK Gly377位点进行突变,并筛选获得高活力突变体G377F,分离纯化后对G377F AK酶学性质进行表征。结果表明:突变体AK最适pH值为9.0,较突变前野生型(wide ... 采用饱和定点突变和高通量筛选技术,对北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)AK Gly377位点进行突变,并筛选获得高活力突变体G377F,分离纯化后对G377F AK酶学性质进行表征。结果表明:突变体AK最适pH值为9.0,较突变前野生型(wide type,WT)最适pH值为8.5有所提高;最适反应温度与WT一致,均为25℃;半衰期由WT的2.6 h提高到5.3 h;pH耐受性在5 h内保持其活力50%以上,与WT 3 h内酶活力保持能力相同。G377F对金属离子和有机溶剂均表现出良好的抗性。其中,Lys的抑制作用在一定程度上被解除,当Lys和Met同时存在时对AK具有明显的激活作用。动力学研究显示:G377F AK Vmax较WT提高9.3倍;n值为1.0明显低于WT的2.7,说明AK正协同性降低,趋向于米氏酶。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 定点突变 酶学性质

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北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变体A380H的酶学性质 被引量：6

3

作者 陈志杰 王鹏 +2 位作者 詹冬玲 方丽 闵伟红 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1336-1343,共8页

同源序列比对和蛋白质结构分析表明,A380为天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)的绝对保守位点,对该位点进行定点突变、分离纯化和性质表征.结果表明:与野生型(WT)相比,突变体A380H的V_(max)提高4.28倍;突变体A380H的最适温度由28℃提高... 同源序列比对和蛋白质结构分析表明,A380为天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)的绝对保守位点,对该位点进行定点突变、分离纯化和性质表征.结果表明:与野生型(WT)相比,突变体A380H的V_(max)提高4.28倍;突变体A380H的最适温度由28℃提高至35℃,最适pH值仍为7.5,半衰期由4.5h缩短至3.5h;底物抑制剂对WT和突变体均有抑制作用,苏氨酸和赖氨酸呈协同抑制作用,苏氨酸单独存在时对A380H具有激活或抑制减弱作用;Mg^(2+),Ni ^(2+)对WT有激活作用,1,5mmol/L的Cu^(2+)对A380H有激活作用;与WT相比,甲醇和异丙醇对A380H的抑制作用增强,正丁醇和乙腈对A380H的抑制作用减弱且表现出激活作用. 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 动力学 酶学性质表征

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抗反馈抑制的天冬氨酸激酶基因在钝齿棒杆菌中的表达 被引量：5

4

作者 赵智 刘阳剑 +4 位作者 王宇 张英姿 丁久元 曹芹 郝宁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期530-533,共4页

将来自钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)CD945具有AEC抗性的天冬氨酸激酶(AKfbr)基因克隆到穿梭载体pJC1上,构建重组质粒pLY153。用电击法将质粒pLY153转化到野生型菌株C.crenatumAS1.542及其突变株C.crenatumCD945中。携带AKfbr基... 将来自钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)CD945具有AEC抗性的天冬氨酸激酶(AKfbr)基因克隆到穿梭载体pJC1上,构建重组质粒pLY153。用电击法将质粒pLY153转化到野生型菌株C.crenatumAS1.542及其突变株C.crenatumCD945中。携带AKfbr基因的C.crenatumAS1.542菌株能抗浓度皆为12mgmL的AEC和苏氨酸。AKfbr基因在C.crenatumCD945中得到表达,天冬氨酸激酶活性提高4倍。摇瓶发酵实验结果表明,重组菌在对数前期和中期生长正常,不受抑制;与对照菌相比,赖氨酸终产量提高22%,赖氨酸生产率提高23%。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌 天冬氨酸激酶 赖氨酸

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乳糖发酵短杆菌lysC突变对L-赖氨酸积累的影响 被引量：5

5

作者 董迅衍 徐大庆 +2 位作者 李烨 李江华 王小元 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期592-596,共5页

从一株乳糖发酵短杆菌L-异亮氨酸生产菌中克隆出天冬氨酸激酶AK-1的编码基因ly-sC1,经DNA测序并与来自谷氨酸棒杆菌ATCC13032的野生型lysC比对发现其中有2个核苷酸1186G和1187C缺失,造成翻译提前终止。AK-1还有下列2个有效突变位点:Ala ... 从一株乳糖发酵短杆菌L-异亮氨酸生产菌中克隆出天冬氨酸激酶AK-1的编码基因ly-sC1,经DNA测序并与来自谷氨酸棒杆菌ATCC13032的野生型lysC比对发现其中有2个核苷酸1186G和1187C缺失,造成翻译提前终止。AK-1还有下列2个有效突变位点:Ala 279 Thr和Ser317 Ala。lysC1在大肠杆菌BL21中的诱导表达量约为lysC的1/4,其表观比酶活也较低,但对L-苏氨酸和L-赖氨酸协同反馈抑制不敏感。用大肠杆菌-黄色短杆菌穿梭表达载体pDXW-8将ly-sC1在野生型乳糖发酵短杆菌ATCC13869中诱导型表达,经摇瓶发酵积累L-赖氨酸7.4 g/L,在3 L发酵罐上达40 g/L。 展开更多

关键词 乳糖发酵短杆菌 天冬氨酸激酶 抗反馈抑制 发酵 L-赖氨酸

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北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变体Q316P的酶学性质 被引量：4

6

作者 张芷睿 陈晨 +3 位作者 韩彩静 高云娜 刘春雷 闵伟红 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期842-850,共9页

【目的】对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)进行改造,期望获得具有较高酶活力且酶活性质改善的高产天冬氨酸族氨基酸的优良突变株,并削弱甚至解除Thr对AK的反馈抑制作用。【方法】利用定点突... 【目的】对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)进行改造,期望获得具有较高酶活力且酶活性质改善的高产天冬氨酸族氨基酸的优良突变株,并削弱甚至解除Thr对AK的反馈抑制作用。【方法】利用定点突变技术对Gln(Q)316位点进行突变,高通量筛选获得活力提高明显的突变体,并将其在大肠杆菌BL21中高效表达,对野生型(Wild type,WT)和突变体Q316P AK用镍柱纯化,进行酶动力学及酶学性质研究。【结果】获得突变体Q316P,并在大肠杆菌BL21中成功表达。与野生型相比,突变体Q316P的V_(max)提高8.53倍,n值由2.15降低为1.29,正协同性减弱;最适温度由25°C升高至30°C;最适p H由8.0降低至7.5,半衰期由3.8 h延长至5.0 h;且在实验范围浓度内,底物抑制剂苏氨酸对突变体Q316P表现出激活作用;Q316P AK对金属离子K+和有机溶剂甲醇表现出良好抗性。【结论】获得酶活力提高、酶学性质改善的突变体,并一定程度上解除苏氨酸对AK的反馈抑制,为构建高产天冬氨酸族氨基酸工程菌提供参考。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 定点突变 动力学 酶学性质

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lysC定点突变及lysC、asdA串联表达对谷氨酸棒杆菌L-苏氨酸积累的影响 被引量：3

7

作者 黄勤勤 王慧梅 +3 位作者 梁玲 黄钦耿 吴松刚 黄建忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期93-100,共8页

lysC、asdA基因分别编码的天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)和天冬氨酸半醛脱氢酶(Aspartate semi-aldehyde dehydrogenase,ASD)是L-苏氨酸合成途径中两个关键限速酶基因,其中AK受到代谢产物赖氨酸与苏氨酸的协同抑制。以选育获得的... lysC、asdA基因分别编码的天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)和天冬氨酸半醛脱氢酶(Aspartate semi-aldehyde dehydrogenase,ASD)是L-苏氨酸合成途径中两个关键限速酶基因,其中AK受到代谢产物赖氨酸与苏氨酸的协同抑制。以选育获得的一株谷氨酸棒状杆菌T11(Corynebacterium glutamicum T11)为出发菌株,通过构建lysC-asdA串联表达盒,并对其关键限速酶基因lysC进行定点突变,突变位点为Ala279Thr,获得抗反馈抑制突变型编码基因lysCr-asdA,将其插入含强启动子tac的穿梭表达载体pZ8-1中成功构建串联表达质粒pZ8-1-lysCr-asdA转化出发菌株,筛选获得工程菌株T11/pZ8-1-lysCr-asdA。摇瓶发酵其L-苏氨酸产量达到7.18 g/L,较出发菌株提高27.8%。进一步的30 L发酵罐补料分批发酵结果显示,发酵60 h L-苏氨酸产量达65.5 g/L,糖酸转化率达到39.5%,较出发菌株分别提高29.5%和33.9%,为后续的进一步构建高产L-苏氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌株提供强有力的基础。 展开更多

关键词 L-苏氨酸 谷氨酸棒状杆菌 天冬氨酸激酶 天冬氨酸半醛脱氢酶 共表达

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赖氨酸高产短小芽孢杆菌诱变选育及关键酶基因的分析 被引量：3

8

作者 王冠蕾 谢辉 《中国调味品》 CAS 北大核心 2013年第2期26-29,39,共5页

实验从产细胞蛋白菌株短小芽孢杆菌出发,分别对其进行紫外诱变和亚硝基胍诱变,利用6.0mg/mL的赖氨酸结构类似物AEC进行抗性筛选和HPLC氨基酸检测筛选出一株赖氨酸产量有较大提高的突变株N9,其发酵液中,赖氨酸含量达到50.83mg/mL,比原始... 实验从产细胞蛋白菌株短小芽孢杆菌出发,分别对其进行紫外诱变和亚硝基胍诱变,利用6.0mg/mL的赖氨酸结构类似物AEC进行抗性筛选和HPLC氨基酸检测筛选出一株赖氨酸产量有较大提高的突变株N9,其发酵液中,赖氨酸含量达到50.83mg/mL,比原始菌株提高了46.11%。通过克隆测序对其赖氨酸合成途径中的关键酶天冬氨酸激酶进行生物信息学分析,发现第783～826位碱基的移码突变造成了261～276位氨基酸的替换,以及374位氨基酸由谷氨酸变为缬氨酸。 展开更多

关键词 短小芽孢杆菌 赖氨酸高产 诱变选育 天冬氨酸激酶

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三种常见血清肝酶在乙型肝炎相关性肝癌中表达的价值研究 被引量：3

9

作者 陈桦 《中国基层医药》 CAS 2019年第9期1097-1100,共4页

目的探讨丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及γ-谷氨酰胺转肽酶(GGT)联合诊断乙型肝炎(乙肝)相关性肝癌的价值,为临床相关诊断提供参考。方法选取华中科技大学同济黄州医院2015年11月至2017年11月收治的乙肝相关性肝... 目的探讨丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及γ-谷氨酰胺转肽酶(GGT)联合诊断乙型肝炎(乙肝)相关性肝癌的价值,为临床相关诊断提供参考。方法选取华中科技大学同济黄州医院2015年11月至2017年11月收治的乙肝相关性肝癌患者118例为乙肝相关性肝癌组),另选取同期收治的肝硬化患者116例为肝硬化组,114例健康体检者作为对照组。对比三组受试者ALT、AST及GGT含量及各指标特异度、灵敏性,并进行ROC曲线分析。结果乙肝相关性肝癌组血清ALT、AST及GGT含量均高于肝硬化组及对照组,且肝硬化组上述血清指标含量均高于对照组[(267.1±131.5)U/L比(31.2±11.3)U/L比(17.4±4.6)U/L,(76.6±23.2)U/L比(45.2±13.1)U/L比(24.3±6.6)U/L,(125.3±42.6)U/L比(53.1±17.6)U/L比(22.4±4.4)U/L],差异均有统计学意义(均P<0.05);ROC曲线图显示:GGT曲线下面积0.85,ALT曲线下面积0.78,AST曲线下面积0.73,三项指标者联合诊断曲线下面积0.95。三项联合诊断的灵敏度及特异度高于ALT、AST及GGT单项诊断。结论乙肝相关性肝癌患者血清ALT、AST及GGT含量升高,且三项指标联合诊断具有较高的灵敏度和特异度,值得临床借鉴。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝炎病毒 乙型 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸激酶 Γ-谷氨酰转移酶 血清学指标 ROC曲线 灵敏度 特异度

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北京棒杆菌新型天冬氨酸激酶双突变株Y198N/D201M的构建及酶学性质表征 被引量：3

10

作者 魏贞 韩彩静 +4 位作者 高云娜 樊占青 王亚南 王哲人 闵伟红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第18期127-133,共7页

利用定点突变提高天冬氨酸族氨基酸合成途径中的首个关键别构酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)活力,并解除其受到代谢产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)的协同反馈抑制。在获得北京棒杆菌单体AK并分析结构的基础上,选取ATP周围的关键残... 利用定点突变提高天冬氨酸族氨基酸合成途径中的首个关键别构酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)活力,并解除其受到代谢产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)的协同反馈抑制。在获得北京棒杆菌单体AK并分析结构的基础上,选取ATP周围的关键残基位点Tyr198和Asp201进行饱和定点突变,采用高通量筛选方法成功获得了酶活力提高到18.26倍的双突变体Y198N/D201M,动力学结果显示,K_m值由野生型(wild type,WT)的3.58 mmol/L减小到2.37 mmol/L,与底物亲和力增强;n值由WT的1.91减小到1.58,正协同性降低。酶学性质研究表明:双突变体Y198N/D201M最适反应温度由WT的25℃增至28℃,最适pH值由WT的8.0降至7.5,半衰期由WT的4.66 h延长至5.32 h。突变体Y198N/D201M较WT,在各个抑制剂浓度下活性抑制作用表现出不同程度的减弱,甚至在5 mmol/L和10 mmol/L Lys+Met、Thr+Met和Lys+Thr+Met条件下有激活作用。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 双突变株 酶活力 酶学性质

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北京棒杆菌单体天冬氨酸激酶T379N/A380C/T65I/D173G突变体酶学性质表征及工程菌构建 被引量：2

11

作者 王亚南 刘晓婷 +3 位作者 樊占青 王哲人 高欣 闵伟红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期100-107,共8页

选取天冬氨酸激酶抑制剂赖氨酸(Lys)的结合位点苏氨酸(Thr)379和丙氨酸(Ala)380、底物天冬氨酸(Asp)的结合位点Thr65、既是底物也是ATP结合位点的催化活性中心Asp173,对4个关键残基位点进行定点饱和突变。采用高通量筛选方法成功构建突... 选取天冬氨酸激酶抑制剂赖氨酸(Lys)的结合位点苏氨酸(Thr)379和丙氨酸(Ala)380、底物天冬氨酸(Asp)的结合位点Thr65、既是底物也是ATP结合位点的催化活性中心Asp173,对4个关键残基位点进行定点饱和突变。采用高通量筛选方法成功构建突变体T379N/A380C/T65I/D173G,与野生型(wild type,WT)相比,酶活力提高到75.83倍。动力学与酶学性质表征显示:相比于WT,K;值由4.11 mmol/L降低至1.34 mmol/L,表明与底物亲和力增强;n值由1.71减小到1.07,正协同性降低。突变体T379N/A380C/T65I/D173G最适反应温度由WT的25℃提高到30℃,最适pH值与WT相同均为8.0,半衰期由WT的4.24 h缩短至3.23 h。突变体在0.2~10 mmol/L抑制剂浓度下,抑制作用整体减弱,尤其在Lys和Lys+Thr作用下明显激活。通过无缝克隆技术电转入北京棒杆菌构建工程菌,发酵测得Lys产量相比WT提高83.05%,Thr提高29.36%,甲硫氨酸(Met)提高30.77%,为优化天冬氨酸激酶代谢途径和构建高产天冬氨酸族氨基酸菌株提供参考。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 突变体 酶学性质 工程菌构建

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新型天冬氨酸激酶突变株构建及酶学性质表征 被引量：1

12

作者 樊占青 刘晓婷 +4 位作者 魏贞 王哲人 王亚南 高欣 闵伟红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期62-69,共8页

通过定点随机突变技术,提高天冬氨酸代谢途径中首个关键限速酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)的催化活力,减弱或解除代谢产物对其协同反馈抑制,并通过Discovery Studio等软件对其空间结构进行分析,借助分子动力学模拟对其机制进行... 通过定点随机突变技术,提高天冬氨酸代谢途径中首个关键限速酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)的催化活力,减弱或解除代谢产物对其协同反馈抑制,并通过Discovery Studio等软件对其空间结构进行分析,借助分子动力学模拟对其机制进行分析。首先选择ATP附近关键残基位点,在前期T379N/A380C/G171I突变株的基础上进行突变株构建,然后通过高通量筛选,获得酶活力显著提高的突变株T379N/A380C/G171I/S227D。动力学分析显示,V;值增至242.05 U/(mg·min),较T379N/A380C/G171I突变株(187.88 U/(mg·min))提高到1.28倍,较野生型(wild type,WT)AK(3.01 U/(mg·min))提高到80.41倍;K_(m)值减小为1.35 mmol/L,底物亲和力增大。最后通过Discovery Studio软件和分子动力学模拟分析发现,突变后体系状态稳定,与ATP的氢键占有率增加,与底物的结合稳定性增强,有利于催化反应进行。酶学性质研究表明:该突变株T379N/A380C/G171I/S227D的最适反应温度增至30℃,较WT和T379N/A380C/G171I分别提高5℃和2℃;最适pH值为8.5,较T379N/A380C/G171I(pH 9.0)减小0.5;半衰期为3.9 h,较T379N/A380C/G171I延长0.8 h;且在不同浓度抑制剂Lys、Thr和Met以及Lys+Thr、Lys+Met、Thr+Met和Lys+Thr+Met不同组合存在情况下,该突变株表现出明显的激活作用,抑制效果减弱显著,激活作用最高143.35%。 展开更多

关键词 天冬氨酸激酶 定点突变 酶活力 分子动力学模拟 酶学性质

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北京棒杆菌天冬氨酸激酶五突变体的构建及酶学性质表征 被引量：1

13

作者 王哲人 刘晓婷 +5 位作者 樊占青 王亚南 魏贞 高欣 方丽 闵伟红 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第16期112-118,共7页

目的:天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)是催化天冬氨酸族氨基酸合成的第一个关键别构酶,为了提高其活力,并削弱或解除末端产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)对AK的协同反馈抑制。方法:在获得的北京棒杆菌四突变体T379N/A380C/G171I/Y198N ... 目的:天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)是催化天冬氨酸族氨基酸合成的第一个关键别构酶,为了提高其活力,并削弱或解除末端产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)对AK的协同反馈抑制。方法:在获得的北京棒杆菌四突变体T379N/A380C/G171I/Y198N AK(NCIN AK)的基础上,发现G295位点与抑制剂Thr通过氢键相连且高度保守,对G295位点进行定点饱和突变,提取质粒,转入大肠杆菌BL21感受态细胞中诱导表达,采用高通量筛选获得酶活力显著提高的突变株,对野生型(Wild type,WT)、五突变体T379N/A380C/G171I/Y198N/G295L AK(NCINL AK)进行酶动力学研究和酶学性质表征。结果:成功构建五突变体NCINL AK,最大反应速率V_(max)为259 U/(mg·min)。与野生型相比,米氏常数K_(m)值由3.44 mmol/L减小到0.93 mmol/L,酶与底物结合更加紧密;希尔系数n值由2.73降为1.21,正协同性降低;最适反应温度由25℃提高到28℃,最适pH由8.0升至8.5,半衰期由4.7 h延长至5.2 h;五突变体NCINL AK较野生型WT AK,不同底物抑制剂浓度在0.2、1.0、5.0、10.0 mmol/L时,抑制作用被不同程度的减弱,甚至Lys抑制作用被完全解除,且在10 mmol/L Thr条件下有激活作用。结论:本实验获得酶活力提高87.20倍的五突变体NCINL AK,酶学性质得到明显改善,在一定抑制剂浓度范围内,基本解除Lys对AK的反馈抑制作用,Thr的反馈抑制得到一定缓解,提高了积累大量天冬氨酸族氨基酸的可能性,为构建高产天冬氨酸族氨基酸菌株提供参考,使甲硫氨酸(Met)等氨基酸的无污染、高效生产成为可能。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 五突变体 酶动力学 酶学性质

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甲状腺乳头状癌术后甲状腺激素和血清天冬氨酸转氨酶及丙氨酸转氨酶的相关性分析

14

作者 牛书俐 周菱 张森 《实用医技杂志》 2023年第3期183-186,共4页

目的分析甲状腺乳头状癌(PTC)全切术后患者在停用左旋甲状腺激素(LT4)所致的甲状腺功能减退对天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)和丙氨酸氨基转移酶(AST)的影响。方法回顾性分析PTC术后行131I治疗的患者,记录术前、停用LT4和补充LT4时血清ALT、... 目的分析甲状腺乳头状癌(PTC)全切术后患者在停用左旋甲状腺激素(LT4)所致的甲状腺功能减退对天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)和丙氨酸氨基转移酶(AST)的影响。方法回顾性分析PTC术后行131I治疗的患者,记录术前、停用LT4和补充LT4时血清ALT、AST和游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)的水平,并进行相关性分析。结果对比术前,停用LT4后血清ALT和AST显著升高,补充LT4后显著降低,且3组间ALT和AST有统计学意义,P<0.01。(2)FT4、FT3分别与^(Δ)ALT1(术前与停用LT4的ALT差值)、^(Δ)ALT2(停用与补充LT4的ALT差值)呈负相关(r=-0.251,-0.257,-0.299,-0.277;P均<0.05)。(3)FT4、FT3分别与^(Δ)AST1(术前与停用LT4的AST差值)、^(Δ)AST2(停用与补充LT4的AST差值)呈负相关(r=-0.415;r=-0.416;r=-0.395;r=-0.403;P均<0.01)。结论甲状腺功能减退会影响血清ALT和AST。甲状腺激素与血清ALT、AST呈负相关。 展开更多

关键词 甲状腺功能减退 天冬氨酸激酶 丙氨酸转氨酶

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北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变体P184Q的酶学性质表征

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作者 方丽 王锐楠 +2 位作者 詹冬玲 张芷睿 闵伟红 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1614-1620,共7页

通过分析谷氨酸棒杆菌天冬氨酸激酶(AK)的结构,筛选可能影响别构抑制剂结合的Pro184位点,对其进行饱和定点突变,成功筛选出突变菌株P184Q.酶学性质研究表明:突变体P184Q的V_(max)比野生型(WT)提高了3倍;n=1.39,低于WT的值(2.6),正协同... 通过分析谷氨酸棒杆菌天冬氨酸激酶(AK)的结构,筛选可能影响别构抑制剂结合的Pro184位点,对其进行饱和定点突变,成功筛选出突变菌株P184Q.酶学性质研究表明:突变体P184Q的V_(max)比野生型(WT)提高了3倍;n=1.39,低于WT的值(2.6),正协同性下降,同时Km值减小,对底物的亲和力增大;P184Q最适pH=6.5,最适反应温度为25℃,半衰期为2.8h;P184Q对金属离子和有机溶剂均表现出良好的抗性,解除抑制剂苏氨酸和甲硫氨酸、赖氨酸和甲硫氨酸、苏氨酸和赖氨酸、赖氨酸对酶活力的抑制作用. 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 突变体 酶学性质

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北京棒杆菌Corynebacterium pekinense天冬氨酸激酶P184M酶动力学分析及酶学性质表征

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作者 王锐楠 张芷睿 +2 位作者 方丽 闵伟红 刘春雷 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第5期1750-1756,共7页

目的研究北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)184位点脯氨酸(proline,P)突变为蛋氨酸(DL-methionine,M)对酶动力学及酶学性质的影响。方法对北京棒杆菌AK家族同源序列比对,选择出高度保守且远离底物结合位点的Pro184位点,对其... 目的研究北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)184位点脯氨酸(proline,P)突变为蛋氨酸(DL-methionine,M)对酶动力学及酶学性质的影响。方法对北京棒杆菌AK家族同源序列比对,选择出高度保守且远离底物结合位点的Pro184位点,对其进行饱和定点突变,成功构建突变体P184M。结果动力学和酶学性质研究表明:P184M AK Vmax比WT(wide type)提高了5.06倍;n值为0.19,突变体由WT的正协同性变为负协同性,同时Km(mol/L)值增大;突变体AK最适pH为6.5,低于野生型最适pH 7.0;最适反应温度28℃,低于WT的30℃,适宜温度区间变窄;半衰期由WT的2.1 h降为1.2 h;金属离子、有机溶剂和抑制剂Thr+Met、Lys+Met、Thr+Lys+Met对突变株AK均表现出激活作用。结论突变体天冬氨酸激酶P184M的酶动力学性质和酶学性质改变显著,为构建高产蛋氨酸菌株提供了一定的参考依据。 展开更多

关键词 北京棒杆菌 天冬氨酸激酶 突变株 酶学性质

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丝胶对糖尿病大鼠视网膜内质网应激特异性caspase-12凋亡途径的调节及其对细胞凋亡的抑制 被引量：5

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作者 董志军 杨楠 +4 位作者 陈志宏 杨帆 于宏飞 董微丽 张铁民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1067-1072,共6页

背景内质网应激（ERS）特异性caspase-12凋亡途径在细胞凋亡过程中发挥重要作用，细胞凋亡是糖尿病视网膜神经退行性病变的重要特征。研究证实，丝胶对视网膜神经细胞的凋亡具有保护作用，但其对糖尿病视网膜病变（DR）过程中与easpase... 背景内质网应激（ERS）特异性caspase-12凋亡途径在细胞凋亡过程中发挥重要作用，细胞凋亡是糖尿病视网膜神经退行性病变的重要特征。研究证实，丝胶对视网膜神经细胞的凋亡具有保护作用，但其对糖尿病视网膜病变（DR）过程中与easpase-12凋亡途径相关的视网膜神经细胞是否具有保护作用仍有待研究证实。目的探讨丝胶是否能够通过影响ERS特异性easpase-12凋亡途径对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡发挥抑制作用。方法采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素（STZ）连续腹腔内注射3d对30只2～3月龄SPF级SD大鼠制备糖尿病模型，以大鼠空腹血糖≥16．7mmol／L及出现多饮、多食、多尿特点为造模成功。将24只造模成功的糖尿病模型大鼠按照计算机数字随机分配法分为丝胶治疗组和糖尿病模型组，每组12只，另取同周龄12只正常大鼠作为正常对照组。丝胶治疗组大鼠于成模后给予丝胶溶液2．4g／（kg·d）灌胃，连续35d。各组大鼠采用过量麻醉法处死并制备视网膜标本，采用TUNEL法检测并计算各组大鼠视网膜神经细胞的凋亡指数（AI）；分别采用Westernblot法和逆转录PCR技术检测大鼠视网膜中ERS标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、ERS特异性easpase-12凋亡途径和caspase-3蛋白及其mRNA的相对表达量，并对各组检测结果进行比较。结果大鼠糖尿病造模成功率为80％（24／36）。正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均可见视网膜神经细胞凋亡，阳性产物主要位于视网膜神经节细胞（RGCs）层和内核层，A1分别为0．0284±0．0023、0．2151±0．0209和0．1150±0．0181，糖尿病模型组大鼠视网膜AI明显高于对照组，丝胶治疗组AI明显低于糖尿病模型组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。丝胶治疗组大鼠视网膜中GRP78、caspase-12和easpase-3蛋白的相对表达量分别为0．523±O．029、 展开更多

关键词 丝胶 药物 糖尿病视网膜病变 生理病理 基因表达 葡萄糖调节蛋白78 半胱氨酸天冬氨酸激酶-12 半胱氨酸天冬氨酸激酶-3 SD大鼠

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谷氨酸棒杆菌关键酶活性与苏氨酸高产的关系 被引量：3

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作者 张君胜 王扬 +1 位作者 杨晓志 张力 《湖南农业科学》 2011年第5期23-25,60,共4页

从微生物代谢途径和关键酶活性的关系入手,分析了谷氨酸棒杆菌的两种关键酶活性及其与L-苏氨酸产量的关系。发现谷氨酸棒杆菌随着遗传特性的变化,其高丝氨酸脱氢酶的活性从原始菌株WS4006的0.124 9 U增加到Y-1(L-Met-+L-Lys-+AHVr+Ile-)... 从微生物代谢途径和关键酶活性的关系入手,分析了谷氨酸棒杆菌的两种关键酶活性及其与L-苏氨酸产量的关系。发现谷氨酸棒杆菌随着遗传特性的变化,其高丝氨酸脱氢酶的活性从原始菌株WS4006的0.124 9 U增加到Y-1(L-Met-+L-Lys-+AHVr+Ile-)的0.416 0 U,是出发菌的3.33倍,天冬氨酸激酶的活性由24 U达到39 U,是出发菌的1.65倍,L-苏氨酸产量达到4.14 g/L,比出发菌产量0.31g/L提高了14.03倍。 展开更多

关键词 L-苏氨酸 谷氨酸棒状杆菌 高丝氨酸脱氢酶 天冬氨酸激酶 活性

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产O-乙酰高丝氨酸的大肠杆菌构建与发酵测试 被引量：2

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作者 杨静 李庆刚 +3 位作者 徐国栋 郑小梅 郑平 牟海津 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期200-209,共10页

O-乙酰高丝氨酸(OAH)是具有潜在工业应用价值的前体化合物,可用于制备高丝氨酸与蛋氨酸等。以一株改造自苏氨酸产生菌的Escherichia coli Thr L为出发菌株,过表达OAH合成途径中的关键酶高丝氨酸脱氢酶基因thr A和高丝氨酸乙酰基转移酶基... O-乙酰高丝氨酸(OAH)是具有潜在工业应用价值的前体化合物,可用于制备高丝氨酸与蛋氨酸等。以一株改造自苏氨酸产生菌的Escherichia coli Thr L为出发菌株,过表达OAH合成途径中的关键酶高丝氨酸脱氢酶基因thr A和高丝氨酸乙酰基转移酶基因met X,并利用不同强度的启动子组合优化这两个基因的表达水平,通过发酵培养基中的苏氨酸和酵母粉的浓度优化以提升OAH的产生菌株的生产性能。通过启动子组合优化结果发现,当thr A与met X均采用J23110启动子时,该重组菌株E.coliOAH4的OAH合成能力最强,摇瓶发酵50 h后,其OAH产量为1.54 g/L。当苏氨酸的浓度为2 g/L,酵母粉的浓度为6 g/L时,E.coli OAH4的发酵水平最高,摇瓶发酵50 h后,OAH的产量可进一步提升至1.98 g/L。本研究首次在E.coli中实现了OAH的合成,并通过发酵优化确定了OAH的最优发酵条件,为后续OAH生产应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 O-乙酰高丝氨酸 天冬氨酸激酶I/高丝氨酸脱氢酶I 高丝氨酸乙酰基转移酶 发酵培养基优化

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北京棒杆菌E31天冬氨酸激酶突变体T361D酶学性质表征

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作者 陈晨 闵伟红 +1 位作者 张芷睿 方丽 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第17期153-159,共7页

对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)进行定点改造,为改善突变株的酶学性质,提高突变株的酶活力,削弱或解除AK的反馈抑制作用。对高度保守的T361位点进行定点突变及高通量筛选,以大肠杆菌BL21... 对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)进行定点改造,为改善突变株的酶学性质,提高突变株的酶活力,削弱或解除AK的反馈抑制作用。对高度保守的T361位点进行定点突变及高通量筛选,以大肠杆菌BL21为载体,使突变体T361D在载体中实现高效表达,经分离及纯化后进行酶学性质和动力学的研究。结果表明:与野生型(wild type,WT)相比,突变体T361D Vmax提高7.63倍,最佳反应p H值降低为7.0,最佳反应温度升至30℃,半衰期延长1 h;突变体T361D在底物抑制剂赖氨酸(Lysine,Lys)存在下表现出激活作用,对金属离子Na^+、K^+和有机溶剂甲醇、异丙醇均表现出良好的抗性。试验为获得高产天冬氨酸族氨基酸菌株提供了参考和依据。 展开更多

关键词 北京棒杆菌E31 天冬氨酸激酶 定点突变 酶动力学 酶学性质

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