目的探讨炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对软骨表层细胞(articular cartilage superficial zone cells,ACSCs)衰老的调控作用和相关机制。方法用纤连蛋白黏附法分离培养ACSCs,根据实验分为对照组和IL-1β处理组,采用MTT检...目的探讨炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对软骨表层细胞(articular cartilage superficial zone cells,ACSCs)衰老的调控作用和相关机制。方法用纤连蛋白黏附法分离培养ACSCs,根据实验分为对照组和IL-1β处理组,采用MTT检测细胞增殖情况,衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测SA-β-gal阳性细胞数,Western blot检测p21和p53蛋白水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子il-6、Mmp-3和Mmp-13 m RNA水平,CellROX试剂检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,JC-1试剂检测线粒体膜电位。最后,取ACSCs设IL-1β处理组和IL-1β+N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理组,检测NAC处理后对IL-1β引起的细胞ROS水平、细胞增殖、SA-β-gal阳性细胞数、p21和p53蛋白水平和SASP分泌因子水平的影响。结果IL-1β处理导致ACSCs出现衰老相关表型,包括增殖减慢(P<0.05)、SA-β-gal染色阳性细胞增加(P<0.05)、p53和p21蛋白水平升高(P<0.05)、SASP因子il-6、Mmp-13和Mmp-3 m RNA水平升高(P<0.05)。进一步研究发现,IL-1β可以导致ACSCs中线粒体膜电位降低(P<0.05),ROS增加(P<0.05),而采用抗氧化剂NAC处理可以明显缓解IL-1β导致的ACSCs中ROS增加和ACSCs衰老相关表型(P<0.05)。结论IL-1β通过诱导氧化应激促进ACSCs衰老,这为从抑制ACSCs衰老和拮抗ACSCs氧化应激损伤角度治疗骨关节炎提供了实验依据。展开更多
文摘目的探讨炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对软骨表层细胞(articular cartilage superficial zone cells,ACSCs)衰老的调控作用和相关机制。方法用纤连蛋白黏附法分离培养ACSCs,根据实验分为对照组和IL-1β处理组,采用MTT检测细胞增殖情况,衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测SA-β-gal阳性细胞数,Western blot检测p21和p53蛋白水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子il-6、Mmp-3和Mmp-13 m RNA水平,CellROX试剂检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,JC-1试剂检测线粒体膜电位。最后,取ACSCs设IL-1β处理组和IL-1β+N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理组,检测NAC处理后对IL-1β引起的细胞ROS水平、细胞增殖、SA-β-gal阳性细胞数、p21和p53蛋白水平和SASP分泌因子水平的影响。结果IL-1β处理导致ACSCs出现衰老相关表型,包括增殖减慢(P<0.05)、SA-β-gal染色阳性细胞增加(P<0.05)、p53和p21蛋白水平升高(P<0.05)、SASP因子il-6、Mmp-13和Mmp-3 m RNA水平升高(P<0.05)。进一步研究发现,IL-1β可以导致ACSCs中线粒体膜电位降低(P<0.05),ROS增加(P<0.05),而采用抗氧化剂NAC处理可以明显缓解IL-1β导致的ACSCs中ROS增加和ACSCs衰老相关表型(P<0.05)。结论IL-1β通过诱导氧化应激促进ACSCs衰老,这为从抑制ACSCs衰老和拮抗ACSCs氧化应激损伤角度治疗骨关节炎提供了实验依据。
