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LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究 被引量:13
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作者 郭秀珍 高斌礼 +3 位作者 郭文 刘庆梁 冯睿 吴燕珍 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期832-837,共6页
目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达... 目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 LncRNA FGD5-AS1 miR-103a-3p IL-1Β 关节软骨细胞 凋亡
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TGFβ_1和BMP_2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的作用 被引量:9
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作者 杨物鹏 许建中 +3 位作者 闫占明 吕福润 付万有 王春梅 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2002年第1期35-38,共4页
目的 :探讨TGFβ1和BMP2 对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的影响 ,从而了解其在关节软骨损伤修复及骨关节炎 (OA)病理变化中的作用 ,方法 :采用光电镜、免疫细胞化学、液烁计数、流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞的超微结构和... 目的 :探讨TGFβ1和BMP2 对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的影响 ,从而了解其在关节软骨损伤修复及骨关节炎 (OA)病理变化中的作用 ,方法 :采用光电镜、免疫细胞化学、液烁计数、流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞的超微结构和增殖、分化及其特异性的表达。结果 :TGFβ1显著增加了原代软骨细胞3 H TdR的掺入和使其进入S G2 /M期细胞比例增加。而BMP2 则对第 5代软骨细胞有明显的促增殖作用。结论 :TGFβ1能促进原代软骨细胞的增殖 ,但不能阻止其增殖能力随传代培养而减弱 ,而BMP2 则显著促进了第 5代软骨细胞的增殖 ,这可能与细胞的分化状态和细胞外基质 (ECM )。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 骨形态发生蛋白2 转化生长因子Β1 细胞增殖 细胞分化 组织工程
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一氧化氮对兔关节软骨细胞凋亡的影响 被引量:9
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作者 王传家 霍霞 +2 位作者 林珏龙 洪超群 李宇 《汕头大学医学院学报》 2002年第1期29-31,共3页
目的 :从细胞凋亡的角度探讨一氧化氮 (NO)对软骨细胞的影响。方法 :利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL) ,观察细胞凋亡现象。结果 :硝普钠 ( 3mmol L)诱导下 ,随着作用时间的延长 ,透射... 目的 :从细胞凋亡的角度探讨一氧化氮 (NO)对软骨细胞的影响。方法 :利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL) ,观察细胞凋亡现象。结果 :硝普钠 ( 3mmol L)诱导下 ,随着作用时间的延长 ,透射电镜可观察到细胞从核边集到核裂解等超微结构的变化过程 ;加药后 12h ,流式细胞术检测到凋亡率为 ( 12 71±3 2 6) % ,随作用时间延长 ,凋亡率逐渐增高 ,2 0h的凋亡率已达 ( 93 4 7± 4 12 ) % ;TUNEL染色法亦得到相应的结果 ;用6mmol L硝普钠诱导 ,透射电镜下可见细胞出现肿胀、破裂成碎片等坏死变化。结论 :高浓度的NO可诱导兔关节软骨细胞凋亡 ,2 0h的凋亡率达到高峰 ;过高浓度的NO可引起细胞坏死。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 体外培养 一氧化氮 细胞凋亡
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IGF_l对兔关节软骨细胞增殖的影响及其形态学观察 被引量:5
4
作者 刘刚 马平 +1 位作者 胡蕴玉 韩一生 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2002年第12期1205-1207,共3页
目的 :了解胰岛素样生长因子1 (IGF1 )对体外生长的兔关节软骨细胞增殖以及细胞超微结构的影响。方法 :应用兔关节软骨细胞体外单层培养 ,对照组培养液为含 1 0 %小牛血清DMEM ,实验组在培养液DMEM中加入IGFl使其终浓度为 1 0 0 μg... 目的 :了解胰岛素样生长因子1 (IGF1 )对体外生长的兔关节软骨细胞增殖以及细胞超微结构的影响。方法 :应用兔关节软骨细胞体外单层培养 ,对照组培养液为含 1 0 %小牛血清DMEM ,实验组在培养液DMEM中加入IGFl使其终浓度为 1 0 0 μg·L- 1 ,作用细胞 1周 ,得出细胞生长曲线 ,并分别测得两组DNA含量。同时观察IGFl 作用后 ,软骨细胞超微结构的变化。结果 :结果显示IGFl能明显促进培养软骨细胞增殖。实验组DNA含量 ,与对照组相比 ,有统计学意义 (P<0 .0 1 )。在电镜下 ,细胞主要表现为增殖性改变 ,说明细胞代谢活跃。结论 :IGFl 可刺激软骨细胞增殖 。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 胰岛素样生长因子 细胞培养 超微结构
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FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ_1表达的作用 被引量:7
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作者 徐卫东 侯铁胜 +3 位作者 张春才 胡惠民 毛积芳 颜永碧 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期773-776,共4页
目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β1(TGFβ1 )表达的影响。方法:培养1月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入FGF100 ng/m l,铺满后收集细胞,作关节软骨细... 目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β1(TGFβ1 )表达的影响。方法:培养1月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入FGF100 ng/m l,铺满后收集细胞,作关节软骨细胞TGFβ1检测及电镜免疫组织化学观察。采用氯胺T法和Antonopoulos法,作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定。结果:FGF能明显促进胶原和蛋白多糖的合成,并且与剂量、时间呈正相关(P< 0.01)。光镜下实验组细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附。结论:FGF能促进关节软骨细胞TGFβ1 的表达及基质合成,推迟了关节软骨细胞的成熟,维持细胞的软骨表现型,这些作用有利于关节软骨损伤后的修复,可能具有一定的临床意义。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 细胞基质 TGFΒ1 FGF
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Caspase-3、XIAP在骨关节炎中的表达及意义 被引量:10
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作者 张洪 张阳德 +2 位作者 王大平 熊建义 欧阳侃 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期325-327,共3页
目的探讨Caspase-3、XIAP在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等检测Caspase-3、XIAP在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Caspase-3的表达实验组... 目的探讨Caspase-3、XIAP在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等检测Caspase-3、XIAP在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Caspase-3的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.01);实验组软骨细胞凋亡程度与XIAP的表达呈负相关(P<0.05),与Caspase-3的表达呈正相关(P<0.01)。结论Caspase-3、XIAP基因的表达与骨关节炎发生发展有密切关系。 展开更多
关键词 骨关节炎 凋亡抑制蛋白 软骨细胞 CASPASE
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环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及其抗凋亡机制 被引量:9
7
作者 丁婧 李荣 +3 位作者 胡向阳 蔡莉 张晓亮 汪巧 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第4期446-451,共6页
目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺对佐剂性关节炎(AIA)大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及抗凋亡机制。方法弗氏完全佐剂诱导AIA大鼠模型,胰酶-胶原酶法分离培养关节软骨细胞,环巴胺体外给药处理AIA软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,... 目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺对佐剂性关节炎(AIA)大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及抗凋亡机制。方法弗氏完全佐剂诱导AIA大鼠模型,胰酶-胶原酶法分离培养关节软骨细胞,环巴胺体外给药处理AIA软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,DNA电泳、Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Shh、Gli1、Ptch1、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果环巴胺(0.08、0.4、2、10、50μmol/L)剂量依赖性地提高AIA软骨细胞增殖。AIA组可见凋亡细胞DNA梯状条带,环巴胺(0.4、2、10μmol/L)给药组的梯状条带明显减少;AIA组存在核碎裂与染色质固缩,环巴胺给药组均匀蓝色荧光的细胞数量增多;流式分析结果表明AIA软骨细胞凋亡率显著升高,环巴胺明显减少细胞凋亡率;与正常组相比,AIA组软骨细胞中Hh信号通路相关基因(Shh、Ptch1、Gli1)mRNA表达显著升高,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达显著下降,而促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA表达明显升高。环巴胺体外给药能抑制Hh信号通路过度活化,提高Bcl-2 mRNA表达,并降低Bax、Caspase-3 mRNA表达。结论环巴胺体外给药能促进AIA软骨细胞的增殖,并抑制AIA软骨细胞的过度凋亡;该抗凋亡作用和调节Bcl-2、Bax和Caspase-3表达密切相关,提示干预软骨细胞Hh信号通路对保护类风湿关节炎关节软骨具有潜在的治疗意义。 展开更多
关键词 HEDGEHOG信号通路 环巴胺 佐剂性关节炎 关节软骨细胞 增殖 凋亡
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不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究 被引量:8
8
作者 张勇 赵建宁 韩宁波 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期782-785,共4页
探讨病理状态下软骨细胞能否诱导脂肪干细胞(ADSC)向软骨细胞分化以及可能的最佳条件,以便为临床修复关节软骨损伤提供可能的新途径。[方法]分离共培养新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞,根据不同血清浓度(10%FBS和2%FBS)和不... 探讨病理状态下软骨细胞能否诱导脂肪干细胞(ADSC)向软骨细胞分化以及可能的最佳条件,以便为临床修复关节软骨损伤提供可能的新途径。[方法]分离共培养新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞,根据不同血清浓度(10%FBS和2%FBS)和不同培养空间(纤维蛋白凝胶支架和无支架单层培养)分组,共培养14d后,胰酶消化终止。倒置显微镜观察和透射电镜观察共培养后ADSC的形态变化。甲苯胺蓝染色法和免疫细胞化学检测共培养后ADSC的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达水平。RT-PCR检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录水平。[结果]共培养7d后部分ADSC变圆,14d时ADSC形态高度分化与成熟软骨细胞相似,其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高,尤以10%FBS支架共培养组最为明显。[结论]与病理状态下软骨细胞共培养后,ADSC可以被诱导成软骨样细胞。高浓度血清三维培养可以增强这种诱导作用。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 软骨细胞 共培养 组织工程
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低浓度人血清对兔关节软骨细胞培养的影响 被引量:8
9
作者 于长隆 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期149-155,共7页
关于软骨细胞的体外培养旨在为创伤性骨关节病的临床治疗提供有效的方法,本文实验结果表明:用5-10%的低浓度人血清较之10%小牛血清对体外培养的关节软骨细胞有明显的促细胞生成作用,但在保持软骨细胞合成硫酸软骨素蛋白的生物特性方面,... 关于软骨细胞的体外培养旨在为创伤性骨关节病的临床治疗提供有效的方法,本文实验结果表明:用5-10%的低浓度人血清较之10%小牛血清对体外培养的关节软骨细胞有明显的促细胞生成作用,但在保持软骨细胞合成硫酸软骨素蛋白的生物特性方面,人血清明显不如小牛血清。 展开更多
关键词 人血清 软骨细胞培养 关节病
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丹参注射液对大鼠关节软骨细胞合成胶原和蛋白多糖的影响 被引量:7
10
作者 赵忠 刘德春 宋阳春 《现代中药研究与实践》 CAS 2013年第1期36-39,共4页
目的通过对体外培养软骨细胞的实验研究,探寻丹参注射液对软骨细胞合成胶原和蛋白多糖的影响。方法对软骨细胞进行原代及传代培养,通过对培养细胞形态学及甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学方法鉴定关节软骨细胞,选择适合传代软骨细胞,应用TNF... 目的通过对体外培养软骨细胞的实验研究,探寻丹参注射液对软骨细胞合成胶原和蛋白多糖的影响。方法对软骨细胞进行原代及传代培养,通过对培养细胞形态学及甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学方法鉴定关节软骨细胞,选择适合传代软骨细胞,应用TNF-α干预后比较丹参注射液干预对体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达变化。结果 2.5%、5%、10%丹参注射液可以增加TNF-α诱导的关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达。结论丹参注射液有促进软骨细胞外基质合成的作用,减少软骨细胞分解代谢,对关节软骨起到保护作用。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 蛋白多糖 Ⅱ型胶原 丹参注射液
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血小板源性生长因子对体外兔关节软骨细胞的生物学行为的影响 被引量:3
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作者 刘刚 胡蕴玉 韩一生 《骨与关节损伤杂志》 2001年第6期438-440,共3页
目的 了解血小板源性生长因子 (PDGF)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应 ,为组织工程构件软骨提供理论基础。方法 取第 3代兔关节软骨细胞体外单层培养 ,培养液DMEM中以终浓度分别为 3、 10、 30、 10 0、 30 0 μg .L 1的PDGF... 目的 了解血小板源性生长因子 (PDGF)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应 ,为组织工程构件软骨提供理论基础。方法 取第 3代兔关节软骨细胞体外单层培养 ,培养液DMEM中以终浓度分别为 3、 10、 30、 10 0、 30 0 μg .L 1的PDGF各作用细胞 2 ,4及 6d ,以MTT法检测细胞的增殖情况 ,并在 3μg .L 1PDGF作用下 ,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。同时 ,检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化。结果 结果显示在较低浓度 (3μg .L 1)PDGF即能明显促进培养软骨细胞的增殖 ,且以第 2d刺激效果最明显 ;增加因子浓度不能进一步促进细胞增殖。在 3~ 30 0 μg .L 1浓度下糖醛酸的含量变化不显著。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 细胞培养 血小板源性生长因子 动物实验 生物学行为
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鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌的影响 被引量:6
12
作者 王丽红 何英 +1 位作者 徐永柱 赖国旗 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1577-1580,共4页
目的观察鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞的增殖和软骨细胞分泌Ⅱ型胶原是否有协同作用。方法分离培养原代兔软骨细胞,用第3代细胞为模型,实验分为未转染组、腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、Ad-hBMP2-GFP组、鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组... 目的观察鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞的增殖和软骨细胞分泌Ⅱ型胶原是否有协同作用。方法分离培养原代兔软骨细胞,用第3代细胞为模型,实验分为未转染组、腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、Ad-hBMP2-GFP组、鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组,培养48 h后,RT-PCR检测hBMP-2mRNA的表达,流式细胞仪检测软骨细胞的周期。培养48、72 h后,MTT法检测软骨细胞的增殖,W estern印迹检测hBMP-2蛋白和Ⅱ型胶原的表达。结果培养48 h后,Ad-hBMP2-GFP组和鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组hBMP-2 mRNA呈阳性,而未转染组、Ad-GFP组表达呈阴性;与未转染组、Ad-GFP组、Ad-hBMP2-GFP组比较,鹿瓜多肽+hBMP-2基因组能使软骨细胞S-G2/M期细胞比例增加,软骨细胞数量增加(P<0.05),软骨细胞hBMP-2蛋白表达和Ⅱ型胶原分泌增加(P<0.01);培养48与72 h比较,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌无显著性差异(P>0.05)。结论鹿瓜多肽能促进hBMP-2基因在软骨细胞中合成hBMP-2蛋白,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和分泌Ⅱ型胶原的功能有协同作用。 展开更多
关键词 鹿瓜多肽 HBMP-2 软骨细胞 增殖 Ⅱ型胶原
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女贞子多糖对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤和炎症反应的作用 被引量:6
13
作者 张安琪 郑福增 +2 位作者 周子朋 赵晶晶 袁都户 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1447-1453,共7页
目的探讨女贞子多糖对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞损伤和炎症反应的影响及分子机制。方法人关节软骨细胞分为对照组(不作任何处理),模型组(50 ng/mL IL-1β),女贞子多糖低、中、高剂量组(50、200、800μg/mL女贞子多糖),si... 目的探讨女贞子多糖对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞损伤和炎症反应的影响及分子机制。方法人关节软骨细胞分为对照组(不作任何处理),模型组(50 ng/mL IL-1β),女贞子多糖低、中、高剂量组(50、200、800μg/mL女贞子多糖),si-circ_0039411组,si-NC组,miR-145组,miR-NC组,女贞子多糖(800μg/mL)+pcDNA-circ_0039411组,女贞子多糖(800μg/mL)+anti-miR-145组。MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测蛋白表达,ELISA法检测IL-8、IL-6、IL-10水平,RT-qPCR法检测circ_0039411和miR-145的表达,双荧光素酶报告实验检测circ_0039411和miR-145的靶向关系。结果不同剂量女贞子多糖处理后的软骨细胞活性升高,细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,IL-8、IL-6水平升高,IL-10水平降低,circ_0039411表达升高,miR-145表达降低,并呈剂量依赖性(P<0.05)。干扰circ_0039411或过表达miR-145,软骨细胞的活性升高,细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,IL-8、IL-6水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。circ_0039411靶向调控miR-145;过表达circ_0039411或抑制miR-145可逆转女贞子多糖对IL-1β诱导的软骨细胞损伤。结论女贞子多糖可能通过调节circ_0039411/miR-145缓解IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤和炎症反应。 展开更多
关键词 女贞子多糖 关节软骨细胞 损伤 炎症反应circ_0039411 MIR-145
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水通道蛋白3在膝骨关节炎患者退变关节软骨细胞中的表达及意义 被引量:6
14
作者 程加峰 耿家金 +2 位作者 赵平 张永强 张强 《中国骨与关节损伤杂志》 2014年第5期465-467,共3页
目的测定水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)在膝骨关节炎患者退变关节软骨细胞中的表达,探讨AQP3在膝骨关节炎退变关节软骨细胞中的作用及意义。方法选取自2009-01—2012-01芜湖市第一人民医院收治的36例因膝骨关节炎、外伤高位截肢、暴力... 目的测定水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)在膝骨关节炎患者退变关节软骨细胞中的表达,探讨AQP3在膝骨关节炎退变关节软骨细胞中的作用及意义。方法选取自2009-01—2012-01芜湖市第一人民医院收治的36例因膝骨关节炎、外伤高位截肢、暴力骨折而进行全膝关节置换术、截肢术、切开复位内固定术并取出的关节软骨。实验组为20例膝骨关节炎,关节软骨为Outerbridge标准Ⅲ级;对照组为16例外伤高位截肢、暴力骨折,关节软骨为Outerbridge标准Ⅰ级。将术中取出的关节软骨采用酶消化法分离及培养出原代关节软骨细胞,倒置相差显微镜及HE染色观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色及Real time RT-PCR对终板软骨细胞标志性基因Ⅱ型胶原及蛋白多糖进行测定、鉴定。Real time RT-PCR、Western blot法检测AQP3基因及蛋白的表达变化。结果对照组关节软骨细胞以多角形为主;实验组关节软骨细胞呈梭形。蛋白多糖、Ⅱ型胶原、AQP3基因在实验组中的表达较对照组低;AQP3蛋白在实验组中表达较对照组下调。结论膝骨关节炎患者关节软骨退变后,AQP3基因表达明显下降,通过调控关节软骨细胞中AQP3表达可能会改善关节软骨的退变。 展开更多
关键词 水通道蛋白3 膝骨关节炎 软骨细胞 Ⅱ型胶原 蛋白多糖
原文传递
腺病毒介导TGF-β_1基因感染兔软骨细胞修复关节软骨缺损 被引量:4
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作者 龙华 袁华 +3 位作者 马保安 鱼兵 裘秀春 范清宇 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第16期1239-1241,i0003,共4页
[目的]探讨腺病毒介导转化生长因子β1(TGF-β1)基因感染对兔关节软骨细胞增殖和分化的影响,观察其构建组织工程化软骨对关节软骨缺损的修复质量。[方法]以腺病毒Adeno-XTM为基因转移载体,制备携带TGF-β1基因的高滴度腺病毒液感染兔关... [目的]探讨腺病毒介导转化生长因子β1(TGF-β1)基因感染对兔关节软骨细胞增殖和分化的影响,观察其构建组织工程化软骨对关节软骨缺损的修复质量。[方法]以腺病毒Adeno-XTM为基因转移载体,制备携带TGF-β1基因的高滴度腺病毒液感染兔关节软骨细胞,通过光电镜、免疫细胞化学、Northern杂交及流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞形态、增殖及外源基因的表达。再将其与骨基质明胶(BMG)支架相复合移植修复同种异体关节软骨缺损。[结果]腺病毒感染软骨细胞后免疫细胞化学染色可检测出外源基因编码蛋白的表达,Northern杂交显示Ⅱ型胶原表达水平增加,TGF-β1的表达显著增加了原代软骨细胞S/G2/M期细胞比例。将其复合于骨基质明胶上,经组织染色和电镜观察可见软骨细胞贴附于BMG表面和孔隙内大量增殖,在体移植修复实验组新生组织为透明软骨,关节面平整,软骨下骨完全重建再生。[结论]软骨细胞经携带TGF-β1基因的腺病毒感染后,能促进软骨细胞的增殖,可用于制备组织工程化软骨。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 腺病毒载体 转化生长因子Β 组织工程
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Bax、Bcl-XL在骨关节炎软骨及滑膜中表达的实验研究 被引量:3
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作者 欧阳侃 王大平 +2 位作者 熊建义 刘黎军 刘建全 《深圳中西医结合杂志》 2007年第1期10-13,17,共5页
目的探讨Bax、Bcl-XL基因在骨关节炎软骨细胞及滑膜中的表达及意义。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测Bax、Bcl-XL在兔膝关节软骨细胞及滑膜中... 目的探讨Bax、Bcl-XL基因在骨关节炎软骨细胞及滑膜中的表达及意义。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测Bax、Bcl-XL在兔膝关节软骨细胞及滑膜中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在滑膜细胞中Bax、Bcl-XL的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.01);在软骨细胞中Bax的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.01);实验组软骨细胞凋亡程度与Bcl-XL的表达呈负相关(P<0.05),与Bax的表达呈正相关(P<0.01)。结论Bax、Bcl-XL基因与骨关节炎发生发展有密切关系。 展开更多
关键词 骨关节炎 凋亡基因 软骨细胞 滑膜细胞
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蓝萼甲素调节PINK1/Parkin信号通路对IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响
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作者 高翔 李巍 陈何 《河北医学》 CAS 2024年第8期1244-1249,共6页
目的:探讨蓝萼甲素(GLA)调节PTEN诱导的激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法:将关节软骨细胞分为Control组、IL-1β组、L-GLA组、M-GLA组、H-GLA组、Suramin组... 目的:探讨蓝萼甲素(GLA)调节PTEN诱导的激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法:将关节软骨细胞分为Control组、IL-1β组、L-GLA组、M-GLA组、H-GLA组、Suramin组;细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测关节软骨细胞增殖;TEM检测关节软骨细胞自噬;流式细胞仪检测关节软骨细胞凋亡;ELISA检测关节软骨细胞中炎性因子(MMP3、TNF-α、MMP13)和活性氧(ROS)水平;蛋白印迹法检测关节软骨细胞中裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3Ⅱ、P62、PINK1、Parkin蛋白表达。结果:与Control组相比,IL-1β组存活率、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin降低,自噬空泡数、凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62升高(P<0.05);L-GLA组、M-GLA组、H-GLA组存活率、自噬空泡数、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin高于IL-1β组,凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62低于IL-1β组(P<0.05);Suramin组存活率、自噬空泡数、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Par-kin低于H-GLA组,凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62高于H-GLA组(P<0.05)。结论:GLA通过激活IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡,进而抑制OA的进展,其机制可能是通过激活PINK1/Parkin信号通路实现的。 展开更多
关键词 蓝萼甲素 PTEN诱导的激酶1 E3泛素连接酶 IL-1Β 关节软骨细胞 自噬 凋亡
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乙酰唑胺对IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及机制研究 被引量:4
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作者 陈伟娜 李春梅 +2 位作者 朱仲珍 蔡莉 李荣 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第5期700-706,共7页
目的探讨水通道蛋白1(AQP1)抑制剂乙酰唑胺(AZ)对IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠关节软骨细胞主要采用胰酶-胶原酶法,IL-1β诱导软骨细胞凋亡,AZ体外处理IL-1β刺激的关节软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,... 目的探讨水通道蛋白1(AQP1)抑制剂乙酰唑胺(AZ)对IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠关节软骨细胞主要采用胰酶-胶原酶法,IL-1β诱导软骨细胞凋亡,AZ体外处理IL-1β刺激的关节软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,hoechst 33258染色、Annexin V-FITC/PI双染和rhodamine-123染色检测细胞凋亡,Western blot法检测AQP1、Bcl-2、Bax、Caspase3、IκBα、pIκBα、NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白表达。结果 AZ(12.5、25、50μmol/L)剂量依赖性地提高IL-1β诱导的软骨细胞增殖;AZ可以抑制IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡,表现为减少细胞凋亡形态学改变、降低软骨细胞凋亡率和提高软骨细胞线粒体膜电位;与正常组比较,IL-1β组AQP1蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和Caspase3蛋白表达升高,IκB蛋白表达下降,p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达增加;与IL-1β组比较,AZ抑制AQP1表达,提高Bcl-2表达,降低Bax和Caspase3表达,抑制IκBα的降解和磷酸化,并减少p-NF-κB p65蛋白表达。结论 AZ体外能抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡。该项结果可能与下调Caspase3和Bax(均为促凋亡基因)表达、上调Bcl-2(抗凋亡基因)表达及抑制NF-κB炎症通路活化有关。 展开更多
关键词 乙酰唑胺 水通道蛋白1 类风湿性关节炎 关节软骨细胞 凋亡 NF-ΚB通路
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基于转录组测序探讨金天格胶囊调控滑膜间充质干细胞外泌体miRNA和关节软骨细胞mRNA治疗大鼠骨关节炎的作用机制
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作者 王智超 张雪 +6 位作者 张小飞 史亚军 郭东艳 栾飞 翟秉涛 邹俊波 袁普卫 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1464-1475,共12页
目的对金天格胶囊治疗骨关节炎的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(synovial mesenchymal stem cell exosomes,SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法采用... 目的对金天格胶囊治疗骨关节炎的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(synovial mesenchymal stem cell exosomes,SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法采用Ⅱ型胶原酶诱导大鼠骨关节炎,通过一般行为学观察、双足平衡差异试验、机械足反射阈值、MicroCT观察与番红固绿染色进行药效验证。将SMSC、ACs在适宜浓度的含药血清中培养,对照组、模型组和金天格组ACs进行mRNA测序以及SMSC-Exos进行miRNA测序。筛选差异表达mRNA与差异表达miRNA,并进行靶基因预测。通过Venn图对SMSC与ACs的差异表达基因求交集得到共同差异表达基因,运用Cytoscape软件构建miRNA-m RNA调控网络。对共同差异表达基因进行表达趋势分析以及对差异表达基因mRNA与miRNA、Micro-CT药效指标与差异表达基因mRNA进行相关性分析。结果骨关节炎病理状态下,miRNA-23a-3p、miRNA-342-3p、miRNA-146b-5p、mi RNA-501-3p、miRNA-214-3p表达下调,miRNA-222-3p、miRNA-30e-3p、miRNA-676-3p、miRNA-192-5p表达上调(P<0.05),这些miRNA的表达均在金天格胶囊含药血清干预后逆转表达,且趋势明显。Micro-CT药效指标、m RNA与miRNA之间存在一定的相关性。结论金天格胶囊治疗骨关节炎的药效作用明显,其作用机制可能与促进SMSC-Exos靶向ACs转运miRNA进而调控Serpinb10、Ntn1、Il1b、Tgm2、Megf10、Il11、Cd40、Slc15a3、Pou2f2等基因有关。 展开更多
关键词 骨关节炎 转录组测序 金天格胶囊 滑膜间充质干细胞外泌体 关节软骨细胞
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粉防己碱减轻IL-1β诱导的体外人关节软骨细胞损伤
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作者 欧阳云朗 张宁 +2 位作者 陈丽萍 贾丙申 焦拓 《基础医学与临床》 2024年第2期174-179,共6页
目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响。方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置6个重复。MTT... 目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响。方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置6个重复。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎性相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的水平以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性;Western blot检测细胞中HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果 与对照组相比,IL-1β组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均升高,细胞存活率、SOD和GPx活性均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组相比,2-ME2组和Tet低、中、高浓度组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均降低,细胞存活率、SOD和GPx活性均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 粉防己碱减轻IL-1β诱导的人关节软骨细胞损伤。 展开更多
关键词 粉防己碱 骨关节炎 白细胞介素1Β 关节软骨细胞 损伤
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