长角血蜱唾液腺Apyrase的生物学特性和功能的研究 被引量：6

1

作者 程远国 吴厚永 +2 位作者 李德昌 李成文 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2000年第3期175-182,共8页

长角血蜱在吸血时 ,其唾液腺中的 apyrase可明显地抑制由 A DP所诱导的血小板聚集反应 ,并呈剂量反应关系 ,1/ 2对唾液腺可以完全抑制血小板的聚集反应。通过 apyrase的动力学、 HPLC分子筛、等电聚焦电泳和温度敏感性实验证明 ,水解 AT... 长角血蜱在吸血时 ,其唾液腺中的 apyrase可明显地抑制由 A DP所诱导的血小板聚集反应 ,并呈剂量反应关系 ,1/ 2对唾液腺可以完全抑制血小板的聚集反应。通过 apyrase的动力学、 HPLC分子筛、等电聚焦电泳和温度敏感性实验证明 ,水解 ATP和 ADP并不是 ATP酶、 ADP酶或几种酶共同作用的结果 ,而是一种酶即 apyrase的作用结果。Apyrase对 Ca2 +具有依赖性。而 Mg2 +、Zn2 +、Mn2 +对之影响较小 ,Hg2 +和EDTA是 apyrase的抑制剂。吸血对蜱唾液腺 apyrase活性影响较大 ,吸血 6天时其活性最大 ,吸血后活力明显下降。A pyrase与哺乳动物的 5′-核苷酸酶相似 ,它是一种糖基 -磷脂酰肌醇 ( GPI)膜锚结构蛋白。 展开更多

关键词 长角血蜱 唾液腺 apyrase 血小板聚集

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生物发光法测定天然水体细菌数量中游离ATP的去除 被引量：7

2

作者 王佳欣 崔璐璐 谢冰 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1091-1095,共5页

天然水体中存在浮游动植物等体细胞和游离ATP,会对细菌ATP的测定产生严重的干扰,所以探究体细胞和游离ATP的消除方法是生物发光法测定细菌总数中不可缺少的预处理步骤.本文研究了体细胞提取剂Tritonx-100的最适浓度和最适提取时间,游离... 天然水体中存在浮游动植物等体细胞和游离ATP,会对细菌ATP的测定产生严重的干扰,所以探究体细胞和游离ATP的消除方法是生物发光法测定细菌总数中不可缺少的预处理步骤.本文研究了体细胞提取剂Tritonx-100的最适浓度和最适提取时间,游离ATP水解酶apyrase的最适浓度和对细菌ATP测定的影响,并将包含Tritonx-100和apyras e酶的体细胞排除体系应用于实际天然水体细菌数量的测定.结果显示,0.4%的Tritonx-100作用水样2 min能够有效提取水样中的体细胞;Apyrase酶浓度达到0.2 U时能够有效水解水样中的游离ATP;Apyrase酶的加入对细菌无水解作用,对细菌ATP的测定无明显影响;包含Tritonx-100和apyrase酶的体细胞排除体系能够裂解体细胞而不会对细菌ATP的测定造成显著影响;应用于实际天然水体的结果也表明,体细胞排除体系可为ATP生物发光法准确测定环境样品中的细菌数量创造条件.本研究表明,经Tritonx-100和apyrase酶处理后,基本能够排除体细胞和游离ATP的干扰,得到天然水体中的实际细菌总数. 展开更多

关键词 ATP生物发光法 TRITONX-100 apyrase 体细胞ATP 游离ATP

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ATP清除剂三磷酸腺苷双磷酸酶对实验性矽肺的干预作用 被引量：6

3

作者 苏程程 向国安 +4 位作者 马永强 周欣 彭守春 魏路清 姬文婕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期792-797,共6页

目的:观察三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase,Apy)对实验性矽肺小鼠肺纤维化的干预作用及可能机制。方法:160只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、矽肺组、Apy组及溶剂组,采用经口咽吸入法给予Si O2悬浊液(50 mg/kg)建立小鼠实验性矽肺模型,对... 目的:观察三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase,Apy)对实验性矽肺小鼠肺纤维化的干预作用及可能机制。方法:160只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、矽肺组、Apy组及溶剂组,采用经口咽吸入法给予Si O2悬浊液(50 mg/kg)建立小鼠实验性矽肺模型,对照组给予等量生理盐水。Apy组在造模的同时及造模后4 h采用经口咽吸入法给予Apy(40 mg/kg),溶剂组给予等体积的无菌生理盐水。分别于术后3 h、7 d、14 d和28 d处死小鼠,计算各组小鼠肺指数,采用生物发光法检测小鼠肺组织的ATP含量,采用HE染色和苦味酸-天狼星红染色观察肺组织的病理学变化,采用real-time PCR法检测各组肺组织中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达水平,采用ELISA法测定肺泡灌洗液TGF-β1的蛋白水平。结果:与对照组相比,模型组和溶剂对照组小鼠的肺指数和胶原含量明显升高,证明矽肺模型制备成功。Apy组与溶剂组相比,肺组织的ATP含量下降,肺组织炎症表现明显减轻,炎症评分显著下降;同时肺指数、胶原容积分数及ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达水平均显著下降。Apy可以明显下调肺组织中TGF-β1的mRNA表达水平和肺泡灌洗液中TGF-β1蛋白表达水平。结论:Apy可以明显减轻实验性矽肺小鼠肺组织的炎症反应和纤维化,该作用可能与Apy减少肺组织ATP的浓度、下调TGF-β1的表达有关。 展开更多

关键词 矽肺 三磷酸腺苷双磷酸酶 转化生长因子Β1

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三酶焦测序体系的建立及其在唐氏综合征快速诊断中的应用 被引量：5

4

作者 刘夕群 朱术会 +2 位作者 邹秉杰 马寅姣 周国华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期517-523,共7页

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序... 为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序反应,当加入一种dNTP进行焦测序反应完后,采用磁性分离技术,除去焦测序反应产生的ATP和剩余的dNTP,然后加入另一种dNTP进行测序,按同样的方法去除影响下一轮测序反应的成分,实现循环测序。此体系能准确判读待测DNA的碱基序列,且可定量测定单核苷酸序列多态性(SNP)中两种等位基因型的相对比值。文章成功检测了16例正常人和8例唐氏综合征患者样本中21号染色体上两个杂合率较高位点(rs1042917和rs4818219)的等位基因型比值,所得结果能够明确说明待测样本中来自于父方和母方的21号染色体数目是否相等。该法具有良好的定量性能,适合于SNP等位基因型的定量分析,可以用于唐氏综合征的快速检测。 展开更多

关键词 腺苷双磷酸酶 三酶焦测序体系 唐氏综合征 单核苷酸序列多态性

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长角血蜱唾液腺中腺苷三磷酸双磷酸酶的纯化及其酶切机制 被引量：2

5

作者 程远国 吴厚永 +2 位作者 李德昌 李成文 赵彤言 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期307-312,共6页

利用染料亲和层析 (CibacornBlue柱 )和离子交换层析 (MacrosphereWCX柱 )对长角血蜱Haemaphysalislongicornis唾液腺的腺苷三磷酸双磷酸酶进行纯化 ,经SDS PAGE证实其分子量为 6 6kD。腺苷三磷酸双磷酸酶可以水解ATP和ADP ,但对AMP无... 利用染料亲和层析 (CibacornBlue柱 )和离子交换层析 (MacrosphereWCX柱 )对长角血蜱Haemaphysalislongicornis唾液腺的腺苷三磷酸双磷酸酶进行纯化 ,经SDS PAGE证实其分子量为 6 6kD。腺苷三磷酸双磷酸酶可以水解ATP和ADP ,但对AMP无水解作用 ,水解ATP和ADP的Km 值均为 0 2 μmol L ,Vmax值分别为 12 5和 15 6 μmol (min·mg)。腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的中间产物是ADP ,最终产物是AMP和正磷酸。表明腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的位点是 5′ 核苷酸的γ 磷酸键 ,水解ADP的位点是 5′ 核苷酸的 β 磷酸键。 展开更多

关键词 长角血蜱 唾液腺 腺苷三磷酸双磷酸酶 酶水解

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集成微流体驱动泵的微流控微珠阵列芯片用于基因突变检测的研究 被引量：4

6

作者 张何 傅昕 朱振军 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第4期473-480,共8页

建立了一种基于微泵集成微流控微珠阵列芯片及三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)介导的等位基因特异性延伸的基因突变检测方法。将微流控芯片、引物修饰微珠阵列及基于毛细和蒸发作用的微流体驱动泵集成构建检测芯片,待测目标序列流过装配的... 建立了一种基于微泵集成微流控微珠阵列芯片及三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)介导的等位基因特异性延伸的基因突变检测方法。将微流控芯片、引物修饰微珠阵列及基于毛细和蒸发作用的微流体驱动泵集成构建检测芯片,待测目标序列流过装配的微球阵列并与微球表面延伸引物杂交,在Apyrase和去除外切酶活性的Klenow DNA聚合酶协同作用下,引物3'末端碱基与目标序列包含的基因突变检测位点匹配则能够发生延伸,并将生物素化的dCTP掺入到引物的延伸序列中并固定在微球表面,链霉亲和素修饰量子点能与微球表面引物延伸序列中的生物素结合并提供荧光信号,而引物3'末端与目标序列存在单碱基不匹配则不能发生延伸。结果表明:采用这种单碱基识别技术,微泵驱动的芯片内可以检测0.2 pmol/L目标序列(信背比>3),液压驱动的芯片内能识别0.5 pmol/L目标序列,而芯片外检测只能识别0.1 nmol/L目标序列,微泵集成芯片在检测基因突变时其灵敏度较芯片外基因突变分析提高了500倍,并在0.5～30 pmol/L目标序列浓度范围内待测序列浓度与检测信号呈良好的线性关系。测定了一个人基因组样本中多药耐药蛋白基因1(MDR1)的两个多态性位点C3435T及G2677T,结果显示该样本具有3435CT及2677TT的基因型组合,此结果与DNA测序结果一致。本方法用于基因突变分析,具有良好的特异性、灵敏性及稳定性。 展开更多

关键词 微泵 微流控微珠阵列 三磷酸腺苷双磷酸酶 基因突变 量子点

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Platelet-released ADP stabilizes PAF-induced rabbit platelet aggregation by stabilizing intracellular calcium 被引量：3

7

作者 易富贤 郭兆贵 《中国药理学报》 CSCD 1998年第4期379-382,共4页

ＰｌａｔｅｌｅｔｒｅｌｅａｓｅｄＡＤＰｓｔａｂｉｌｉｚｅｓＰＡＦｉｎｄｕｃｅｄｒａｂｂｉｔｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ１ＹＩＦｕＸｉａｎ... ＰｌａｔｅｌｅｔｒｅｌｅａｓｅｄＡＤＰｓｔａｂｉｌｉｚｅｓＰＡＦｉｎｄｕｃｅｄｒａｂｂｉｔｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ１ＹＩＦｕＸｉａｎ，ＧＵＯＺｈａｏＧｕｉ２（Ｌａｂ... 展开更多

关键词 血小板聚集 PAF 腺苷三磷酸 双磷酸酶类 钙

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志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备

8

作者 王羽 周围 +5 位作者 廖翔 高原 戴红梅 岳俊杰 梁龙 呼和巴特尔 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1080-1084,共5页

目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒... 目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清。结果:成功构建了原核表达载体pET24a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功。结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础。 展开更多

关键词 志贺菌福氏5a M90T apyrase 多克隆抗体

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培养的牛心内膜内皮细胞水解细胞外腺苷酸<英文>

9

作者 易富贤 刘文兰 +2 位作者 谌立伟 曾珊 郭兆贵 《中国药理学报》 CSCD 1999年第8期745-749,共5页

目的:研究牛心内膜内皮细胞(BEEC)腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)的特性并比较牛心内膜及血管内皮细胞的胞外腺苷酸酶活性。方法:以反相HPLC测定核苷酸含量,以磷离子释放法检测apyrase活性。结果:叠氮钠10mmol·L^(-1)和氟化钠20mmol&... 目的:研究牛心内膜内皮细胞(BEEC)腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)的特性并比较牛心内膜及血管内皮细胞的胞外腺苷酸酶活性。方法:以反相HPLC测定核苷酸含量,以磷离子释放法检测apyrase活性。结果:叠氮钠10mmol·L^(-1)和氟化钠20mmol·L^(-1)分别抑制BEEC apyrase 51％及38％活性,而Na^+/K^+ -ATP酶抑制剂哇巴因则对BEEC apyrase活性无影响。过氧化氢0.5mmol·L^(-1)呈时间依赖性地抑制心内膜内皮细胞apyrase活性。BEEC的apyrase活性低于主动脉内皮细胞的apyrase活性,而BEEC的胞外AMP酶则远较血管内皮细胞的活性高。结论:BEEC apyrase具有叠氮钠和氟化钠敏感的、哇巴因不敏感的特性;与血管内皮细胞相比,BEEC apyrase活性较高而胞外AMP酶活性较低。 展开更多

关键词 心内膜 血管内 腺苷酸类 叠氮钠 apyrase

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胡杨PeAPY2基因的克隆及其转化细胞的耐盐性分析 被引量：2

10

作者 刘丹丹 邓澍荣 +7 位作者 张一南 张旋 孙健 王美娟 赵瑞 荆艳萍 沈昕 陈少良 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期276-284,共9页

从胡杨（Populus euphratica Oliv.）抗盐碱能力强于其它种类杨树。本实验室前期对胡杨的研究表明：盐胁迫下,胡杨腺苷三磷酸双磷酸水解酶基因（PeAPY）的转录水平上调,预示该基因可能在胡杨应对盐胁迫中发挥作用。本研究利用RT-PCR方... 从胡杨（Populus euphratica Oliv.）抗盐碱能力强于其它种类杨树。本实验室前期对胡杨的研究表明：盐胁迫下,胡杨腺苷三磷酸双磷酸水解酶基因（PeAPY）的转录水平上调,预示该基因可能在胡杨应对盐胁迫中发挥作用。本研究利用RT-PCR方法克隆了胡杨腺苷三磷酸双磷酸水解酶PeAPY2基因,将该基因在烟草BY-2细胞中过表达,分析PeAPY2基因与植物耐盐性的关系。结果证明,PeAPY2编码腺苷三磷酸双磷酸水解酶,其ORF区长为1404bp,编码467个氨基酸。对转PeAPY2基因的烟草BY-2细胞及野生型烟草BY-2细胞进行长期盐处理,结果表明,烟草BY-2细胞过表达PeAPY2基因后提高了耐盐性,但并没有明显改善由甘露醇（200~600mmol/L）引起的渗透胁迫。盐处理（50~150mmol/L,NaCl）2周后,野生型BY-2细胞鲜重和干重都低于转PeAPY2基因的烟草细胞。转基因细胞跟野生型细胞相比,Na＋的上升幅度较小,而K＋的下降幅度也较小。随着盐胁迫时间的延长,转基因细胞膜透性低于野生型细胞,在盐胁迫下细胞活力高于野生型细胞。说明烟草BY-2细胞过表达PeAPY2基因后改善了其对盐的耐受性,这对深入研究PeAPY2基因在胡杨耐盐机制中的作用具有重要的意义。 展开更多

关键词 胡杨 腺苷三磷酸双磷酸水解酶 PeAPY2基因 转基因烟草细胞 抗盐

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银杏叶提取物对局灶性脑缺血再灌注后线粒体损伤的保护作用 被引量：2

11

作者 沈立 薛雅静 +3 位作者 沈伏 张文奇 张金荣 李雅琴 《中国基层医药》 CAS 2005年第12期1742-1744,共3页

目的研究杏花雨注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑线粒体中SOD、ATPase、MDA的影响,探讨其抗脑缺血作用的机制。方法雄性SD大鼠63只,随机分为9组(n=7)。假手术组、4个缺血对照组(缺血2 h分别再灌注0.5、1、24、h组,其中缺血2 h再灌注... 目的研究杏花雨注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑线粒体中SOD、ATPase、MDA的影响,探讨其抗脑缺血作用的机制。方法雄性SD大鼠63只,随机分为9组(n=7)。假手术组、4个缺血对照组(缺血2 h分别再灌注0.5、1、24、h组,其中缺血2 h再灌注4 h设为模型组),3个杏花雨注射液(A)治疗组(高、中、低剂量组),金纳多注射液(B)治疗对照组。治疗组分别于术后立即舌下静脉注射A 5、10、20 mg/kg,B 10 mg/kg。测定脑线粒体中SOD、ATPase活性和MDA含量、基质游离钙浓度。结果局灶性脑缺血再灌注后脑线粒体中MDA含量、基质游离钙浓度明显升高(P<0.01),SOD、ATPase活性明显下降(P<0.01);A与B均能明显提高脑线粒体中SOD、ATPase活性(P<0.01),减少MDA、游离钙(P<0.01);两种注射液同等剂量差异无显著意义(P>0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注后线粒体钙超载,自由基生成增加,杏花雨注射液可提高缺血再灌注大鼠脑线粒体总抗氧化活力,降低MDA、游离钙含量,保护缺血再灌注引起的神经元损伤。 展开更多

关键词 再灌注损伤 基质游离钙 丙二醛 超氧化物歧化酶 腺苷三磷酸双磷酸酶 动物实验 银杏叶提取物 局灶性脑缺血 杏花雨注射液 脑线粒体

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Apyrase减轻过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑 被引量：2

12

作者 刘琨 李平 +6 位作者 李泽 陈俊文 张鲲 阳俊 董燕 聂美玲 黄汉林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期297-301,共5页

目的探讨apyrase（三磷酸腺苷二磷酸水解酶）对过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的作用。方法采用C57BL/6雌性小鼠建立鸡卵清蛋白（OVA）致敏和激发的过敏性哮喘模型,并给予apyrase处理;以非致敏的同背景雌性小鼠作为对照。于最后1次激... 目的探讨apyrase（三磷酸腺苷二磷酸水解酶）对过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的作用。方法采用C57BL/6雌性小鼠建立鸡卵清蛋白（OVA）致敏和激发的过敏性哮喘模型,并给予apyrase处理;以非致敏的同背景雌性小鼠作为对照。于最后1次激发24~48 h,完成小鼠气道高反应性测定、支气管肺泡灌洗及取肺组织。病理学方法评价肺组织气道炎症、杯状细胞及气道重塑,瑞氏吉姆莎染色并计数灌洗液的分类细胞,酶联免疫吸附法测定灌洗液细胞因子,实时定量PCR法测定肺组织转录因子（GATA3）水平。结果 Apyrase减轻哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞炎症,降低气道炎性细胞、Th2相关细胞因子及肺组织GATA3核酸水平;减轻气道上皮杯状细胞增生及胶原沉积。结论 Apyrase可减轻小鼠过敏性哮喘的气道炎症及气道重塑。 展开更多

关键词 三磷酸腺苷二磷酸水解酶 气道高反应性 气道炎症 气道重塑

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白纹伊蚊唾液三磷酸腺苷二磷酸酶在毕赤酵母中的分泌表达 被引量：1

13

作者 吴松泉 王光丽 +1 位作者 雷永良 张凯波 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期73-75,共3页

采用RT-PCR技术克隆编码白纹伊蚊(Aedes albopictus)唾液三磷酸腺苷二磷酸酶(apyrase)的成熟肽cDNA序列,并克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建pGAPZα-A-apyrase重组分泌表... 采用RT-PCR技术克隆编码白纹伊蚊(Aedes albopictus)唾液三磷酸腺苷二磷酸酶(apyrase)的成熟肽cDNA序列,并克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建pGAPZα-A-apyrase重组分泌表达载体。表达载体经BlnⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,转化子经Zeocin抗性筛选和菌落PCR,成功构建了pGAPZα-A-apyrase/GS115工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果显示,pGAPZα-A-apyrase/GS115的工程菌分泌表达了相对分子质量(M_r)约为60000的重组apyrase蛋白。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 ATP-二磷酸酶 毕赤酵母 表达

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培养牛心内膜内皮细胞的腺苷三磷酸双磷酸酶的特性研究(英文)

14

作者 易富贤 孙平 +2 位作者 黄韶玲 刘文兰 郭兆贵 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期425-429,共5页

包括血管内皮细胞在内的多种细胞和组织存在腺苷三磷酸双磷酸酶（ａｐｙｒａｓｅ） ， 但心内膜内皮细胞是否含有ａｐｙｒａｓｅ 尚无报道。本文旨在研究牛心内膜内皮细胞ａｐｙｒａｓｅ 的特性。以无机磷释放法检测培养牛心内膜内皮细... 包括血管内皮细胞在内的多种细胞和组织存在腺苷三磷酸双磷酸酶（ａｐｙｒａｓｅ） ， 但心内膜内皮细胞是否含有ａｐｙｒａｓｅ 尚无报道。本文旨在研究牛心内膜内皮细胞ａｐｙｒａｓｅ 的特性。以无机磷释放法检测培养牛心内膜内皮细胞（ＢＥＥＣ） ａｐｙｒａｓｅ 的活性。公认的ａｐｙｒａｓｅ 抑制剂叠氮钠呈浓度依赖性地抑制ａｐｙｒａｓｅ 活性； 另一种ａｐｙｒａｓｅ 抑制剂氟化钠（２０ ｍｍｏｌ／Ｌ） 也明显抑制ａｐｙｒａｓｅ 活性。而Ｎａ＋ ／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ 的抑制剂哇巴因（３ ｍｍｏｌ／Ｌ） 却不能抑制该酶活性。ＢＥＥＣａｐｙｒａｓｅ 活性依赖于钙或镁等二价阳离子以及ｐＨ 的改变， ＥＤＴＡ 或ＥＧＴＡ （１ｍｍｏｌ／Ｌ） 均能完全抑制其活性， 在ｐＨ 值为８－５ 时活性最高。由此可见， 牛心内膜内皮细胞存在叠氮钠敏感的、依赖于二价阳离子和ｐＨ 值的腺苷三磷酸双磷酸酶活性。 展开更多

关键词 腺苷三磷酸 双磷酸酶 腺苷二磷酸 心内膜

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牛心内膜腺苷三磷酸双磷酸酶对血小板聚集的抑制作用(英文)

15

作者 易富贤 黄韶玲 +2 位作者 郭迅 孙平 郭兆贵 《中国药理学报》 CSCD 1999年第9期851-854,共4页

目的:研究牛心内膜内皮细胞(EEC)腺苷三磷酸双磷酸酶的抗血小板聚集效应。方法:培养牛EEC。以高效液相色谱法测定ADP,用比浊法测血小板聚集。结果:ADP 500μmol·L^(-1)与EEC温孵后,引起ADP浓度进行性地降低。与此相适应的是,未代谢... 目的:研究牛心内膜内皮细胞(EEC)腺苷三磷酸双磷酸酶的抗血小板聚集效应。方法:培养牛EEC。以高效液相色谱法测定ADP,用比浊法测血小板聚集。结果:ADP 500μmol·L^(-1)与EEC温孵后,引起ADP浓度进行性地降低。与此相适应的是,未代谢的ADP诱导血小板聚集的能力也降低。在阿司匹林处理过的EEC 1×10~9cells·L^(-1)存在下,凝血酶500U·L^(-1)及PAF 1nmol·L^(-1)诱导的经阿司匹林1mmol·L^(-1)及亚甲基蓝10μmol·L^(-1)处理过的血小板聚集明显受到抑制,且聚集是可逆的;EEC的此种作用类似于腺苷三磷酸双磷酸酶的作用。EEC明显抑制ADP 5μmol·L^(-1)诱导的血小板聚集,但不能抑制ADP-β-S 15μmol·L^(-1)诱导的血小板聚集。结论:腺苷三磷酸双磷酸酶水解ADP是牛EEC重要的抗血栓机制。 展开更多

关键词 腺苷三磷酸 双磷酸酶 心内膜 血小板聚集

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成人血小板微颗粒绝对计数方法的建立

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作者 沈文红 赵小娟 +6 位作者 李慧娟 沈文香 杨海燕 苏雁华 白霞 余自强 阮长耿 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第2期313-315,346,共4页

目的建立成人血浆血小板微颗粒(PMPs)绝对计数方法。方法应用流式细胞仪检测P-选择素表达的阳性血小板百分数,血栓素B2(TXB2)酶联免疫测定试剂盒检测血浆中TXB2含量,流式细胞仪检测3种常用抗凝剂来源或标本冻存后的血小板微颗粒浓度。... 目的建立成人血浆血小板微颗粒(PMPs)绝对计数方法。方法应用流式细胞仪检测P-选择素表达的阳性血小板百分数,血栓素B2(TXB2)酶联免疫测定试剂盒检测血浆中TXB2含量,流式细胞仪检测3种常用抗凝剂来源或标本冻存后的血小板微颗粒浓度。结果前列腺素E1(PGE1)对血小板活化的抑制作用呈现剂量依赖性,三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)对血小板P-选择素表达的影响不明显,PGE1和Apyrase对抑制血小板活化有协同作用;乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝来源的血浆PMPs的浓度较枸橼酸钠和肝素抗凝来源PMPs的浓度均低(均P<0.01);标本是否为冻存液以及加否二甲基亚砜冻存液对检测无血小板血浆(PFP)中PMPs浓度没有影响(P>0.05)。结论体外检测PMPs时,宜选用EDTA-K2抗凝管,并且抗凝管中加入抑制血小板活化的抑制剂PGE1和Apyrase,终浓度分别为3.0×10-7mol/L和0.5U/ml,低温离心得到PFP,PFP可以直接冻存也可立即检测PMPs。 展开更多

关键词 成人 血小板微颗粒 前列腺素E1 三磷酸腺苷双磷酸酶 抗凝剂

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PagAPY1基因调控银腺杨耐旱性的作用机制研究

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作者 王质璞 李卓蓉 +1 位作者 罗志斌 邓澍荣 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期105-112,共8页

【目的】Apyrase是水解细胞内/外核苷磷酸的关键酶,在调控植物生长发育和逆境响应中起重要作用。本研究鉴定银腺杨(Populus alba×P.glandulosa)中PagAPY1的分子功能,揭示其促进耐旱性的作用机制。【方法】利用生物信息学方法鉴定... 【目的】Apyrase是水解细胞内/外核苷磷酸的关键酶,在调控植物生长发育和逆境响应中起重要作用。本研究鉴定银腺杨(Populus alba×P.glandulosa)中PagAPY1的分子功能,揭示其促进耐旱性的作用机制。【方法】利用生物信息学方法鉴定银腺杨PagAPY1基因,构建PagAPY1-YFP融合蛋白,观察PagAPY1的亚细胞定位,利用农杆菌介导的转基因技术获得过表达PagAPY1转基因银腺杨,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测野生型和转基因杨树中PagAPY1及其他抗逆基因表达,分析干旱胁迫下野生型和转基因杨树生长表型、根系发育和叶片保水性能等生理指标。【结果】PagAPY1具有Apyrase保守结构域,定位于高尔基体中,参与水解NTP/NDP。PagAPY1表达受干旱胁迫诱导。在干旱胁迫下,PagAPY1过表达杨树的存活率、根系生物量和不定根生长等相比野生型显著提高;同时,过表达杨树的气孔开度相比野生型降低。与野生型相比,过表达株系对ABA诱导的气孔关闭更为敏感。此外,过表达株系中活性氧信号和抗氧化酶相关基因在干旱胁迫下显著上调表达。【结论】干旱胁迫下,PagAPY1通过维持蛋白糖基化和胞外ATP(eATP)稳态平衡,促进生长素极性运输,提高根系生长,促进气孔闭合,减少叶片水分散失,同时激活活性氧信号,增加抗氧化酶系统活性,从而提高了杨树抗旱性。 展开更多

关键词 银腺杨 apyrase酶 耐旱性 基因功能 APY基因

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双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物 被引量：5

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作者 龚益熊 廖翔 +4 位作者 朱力 吴兰 周晓巍 梁龙 黄培堂 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期163-166,180,共5页

通过蓝色非变性凝胶电泳(BN-PAGE)比较痢疾杆菌福氏5型野生株M90T和大质粒缺失株M90TΔT的膜蛋白复合物,发现一个野生株特有的复合物,其分子量约为290 kD,命名为M90T-290。通过第二向SDS-PAGE分离M90T-290得到6个蛋白亚基,质谱鉴定为:... 通过蓝色非变性凝胶电泳(BN-PAGE)比较痢疾杆菌福氏5型野生株M90T和大质粒缺失株M90TΔT的膜蛋白复合物,发现一个野生株特有的复合物,其分子量约为290 kD,命名为M90T-290。通过第二向SDS-PAGE分离M90T-290得到6个蛋白亚基,质谱鉴定为:一个由大质粒编码的毒力蛋白Apyrase(ATP-二磷酸水解酶)和5个染色体编码的蛋白,这些蛋白可能以膜复合物的形式影响毒力蛋白IcsA的单极性分布和痢疾杆菌在细胞间的扩散。这个新发现的毒力相关膜复合物在痢疾杆菌的致病过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 痢疾杆菌 蓝色非变性凝胶电泳 膜蛋白复合物 毒力 ATP-二磷酸水解酶

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白纹伊蚊唾液抗血小板凝集因子Apyrase基因片段的克隆测序 被引量：1

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作者 朱礼华 赵彤言 +1 位作者 董言德 陆宝麟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2001年第4期227-231,共5页

抗血小板凝集因子Apyrase是吸血昆虫唾液的重要功能因子 ,能水解被吸血宿主血液中血小板释放的ATP、ADP而抑制血小板凝集 ,以利吸血过程的顺利进行。本研究针对我国的白纹伊蚊 ,用兼并引物PCR法扩增了抗血小板凝集因子Apyrase的基因片... 抗血小板凝集因子Apyrase是吸血昆虫唾液的重要功能因子 ,能水解被吸血宿主血液中血小板释放的ATP、ADP而抑制血小板凝集 ,以利吸血过程的顺利进行。本研究针对我国的白纹伊蚊 ,用兼并引物PCR法扩增了抗血小板凝集因子Apyrase的基因片断 ,并克隆入T载体进行了测序 ,经Clastal比较发现与埃及伊蚊相应序列有很高的同源性 ,为进一步的研究打下基础。 展开更多

关键词 抗血小板凝集 白纹伊蚊 唾液 e基因 埃及伊蚊 吸血昆虫 PCR法 T载体 克隆测序 片段

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