结核分支杆菌Ag85B分泌蛋白基因疫苗的构建和免疫原性的研究 被引量：22

1

作者 范雄林 徐志凯 +3 位作者 李元 薛莹 李别虎 白光春 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期548-550,共3页

目的　构建编码结核分支杆菌 (MTB)Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒 ,并研究其免疫原性。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分支杆菌H3 7Ra 基因组DNA中扩增出Ag85B分泌蛋白基因 ,用HindⅢ和EcoRⅠ消化后 ,与同样酶消化的pcDNA3... 目的　构建编码结核分支杆菌 (MTB)Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒 ,并研究其免疫原性。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分支杆菌H3 7Ra 基因组DNA中扩增出Ag85B分泌蛋白基因 ,用HindⅢ和EcoRⅠ消化后 ,与同样酶消化的pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌JM10 9,阳性克隆用酶切鉴定 ;重组表达质粒肌注免疫小鼠 4周后 ,分别用dotblotting和ELISA方法检测抗体的产生和滴度。结果　酶切鉴定重组表达质粒pTB30s构建成功 ;dotblotting检测免疫小鼠血清抗Ag85B特异性抗体阳性 ,ELISA检测抗体几何平均滴度为 1∶12 0。结论　应进一步研究pTB30s刺激机体的细胞免疫应答 ,以用于结核病 (TB) 展开更多

关键词 结核分支杆菌 基因疫苗 免疫原性 85b抗原 结核 免疫

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结核分支杆菌Ag85B DNA疫苗的构建及其免疫作用的研究 被引量：9

2

作者 游力 赵跃然 +4 位作者 高春义 张建 冯进波 许晓群 田志刚 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期736-739,共4页

目的　研究pcDNA3 Ag85B质粒DNA疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的作用。方法　将结核分支杆菌Ag85B基因插入载体pcDNA3中 ,制备pcDNA3 Ag85BDNA疫苗。分别以生理盐水、pcDNA3及pcDNA3 Ag85B免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠抗Ag85B抗体水... 目的　研究pcDNA3 Ag85B质粒DNA疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的作用。方法　将结核分支杆菌Ag85B基因插入载体pcDNA3中 ,制备pcDNA3 Ag85BDNA疫苗。分别以生理盐水、pcDNA3及pcDNA3 Ag85B免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠抗Ag85B抗体水平 (ELISA)和体外特异抗原刺激诱导的免疫小鼠脾细胞IL 2、IL 4、IL 10、IFN γ表达水平。结果　pcDNA3 Ag85B诱生的抗Ag85B效价明显高于生理盐水组和pcDNA3组 ;pcDNA3 Ag85B免疫小鼠脾细胞在Ag85B抗原刺激下 ,IL 2和IFN γmRNA转录水平明显高于对照组 ,而IL 4和IL 10mRNA转录水平在 3组中无明显变化。结论　pcDNA3 Ag85B质粒DNA疫苗不仅能增强体液免疫 。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 DNA疫苗 免疫原性 AG85b 抗原 抗结核菌苗

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牛分枝杆菌Ag85B的生物信息学分析及多表位候选抗原的构建

3

作者 董希望 张岩 +4 位作者 魏稚彤 李文欣 刘思宇 梁栋 赵海涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期62-65,72,118,119,共7页

为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的... 为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的理化性质、抗原性并进行免疫模拟。结果表明:Ag85B蛋白有325个氨基酸残基,相对分子量为34.58085,理论等电点为5.62,脂肪系数为72.18,亚细胞定位于线粒体、细胞质和高尔基体中,具有亲水性、信号肽和跨膜结构域,属于分泌型蛋白,其无规则卷曲和β-转角结构的占比分别28.15%和8.62%,含有3个T淋巴细胞优势表位和8个B淋巴细胞优势表位。构建的Ag85B多表位候选抗原为亲水性蛋白和非致敏原,两次预测免疫原性参数分别为0.893和1.524,可诱导特异性的体液和细胞免疫应答。说明试验成功构建出基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,且该多表位候选抗原可能诱导机体产生T、B淋巴细胞免疫应答。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 抗原表位 AG85b 生物信息学 多表位候选抗原

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BCG30主要分泌蛋白对尘螨变应性患者T_H1/T_H2平衡调节作用的观察 被引量：3

4

作者 吴健 徐军 钟南山 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期553-556,共4页

目的　研究结核杆菌相对分子质量 (Mr)为 30× 10 3的主要分泌蛋白 (BCG30 ,也称Ag85B)对尘螨变应原过敏所致的哮喘等变应性患者外周血单个核细胞 (PBMC)分泌TH1、TH2细胞因子的调控作用。方法　常规分离 2 7例尘螨过敏的变应性患者... 目的　研究结核杆菌相对分子质量 (Mr)为 30× 10 3的主要分泌蛋白 (BCG30 ,也称Ag85B)对尘螨变应原过敏所致的哮喘等变应性患者外周血单个核细胞 (PBMC)分泌TH1、TH2细胞因子的调控作用。方法　常规分离 2 7例尘螨过敏的变应性患者 (A) ,其中 18例哮喘患者 (A1)、9例变应性鼻炎或皮炎患者 (A2 )和 13例正常人 (B)的PBMC ,在离体与螨变应原、BCG30单独或复合共培养 ,ELISA法测定培养上清IL 5、IFN γ的水平。结果　A、A1、A2、B 4组无刺激状态下的IL 5、IFN γ水平无差异 (P >0 .0 5 )。尘螨变应原刺激可显著促进A、A1、A2 3组PBMC分泌IL 5 ,P均 <0 .0 5 ,同时 ,A组的IFN γ水平自身比较亦明显增高 (73.5 8pg ml± 30 .2 3pg mlvs 30 .71pg ml± 18.87pg ml,P <0 .0 5 )。将尘螨变应原与BCG30和PBMC进行复合培养 ,并与单独尘螨变应原刺激组比较 ,其IFN γ水平在A组 (92 .89pg ml± 2 9.0 7pg mlvs 73.5 8pg ml± 30 .2 3pg ml)和A1组 (87.6 0pg ml± 36 .4 5pg mlvs 5 8.75pg ml± 7.84pg ml)均较后者为高 (P均 <0 .0 5 ) ,且A组的IFN γ IL 5的比值较单独尘螨变应原刺激组显著增高 (5 .0 3± 1.36vs 4 .2 0± 1.6 4 ,P <0 .0 5 ) ,而A1组其比值亦有增高趋势 (P =0 .0 7)。 展开更多

关键词 bCG分泌蛋白 尘螨过敏 变应性疾病 外周血单个核细胞 白细胞介素-5 干扰素-γ

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老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素及IFN-γ、sIL-2R、Ag85B水平变化

5

作者 吴秋静 史可云 +3 位作者 胡杰 陈芸 谢婧 徐晓娟 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1336-1339,共4页

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并结核分枝杆菌感染的危险因素及对γ-干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、抗原85B(Ag85B)水平的影响。方法选取2018年8月-2023年5月宜兴市人民医院收治的104例老年COPD合并结核分... 目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并结核分枝杆菌感染的危险因素及对γ-干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、抗原85B(Ag85B)水平的影响。方法选取2018年8月-2023年5月宜兴市人民医院收治的104例老年COPD合并结核分枝杆菌感染患者为研究组,随机选取同期104例单纯COPD患者为对照组,分析老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素,检测两组患者血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B表达水平。结果多因素Logistic回归分析结果显示,年龄大、吸烟史、粉尘暴露史、吸入糖皮质激素、营养不良均是老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素(OR=1.992、2.092、2.162、1.964、2.132;P<0.05);研究组血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B水平均高于对照组(P<0.05),且随结核病变程度加重而上升(P<0.05)。结论老年COPD合并结核分枝杆菌感染与年龄、吸烟史、粉尘暴露史、吸入糖皮质激素及营养不良等密切相关,并导致血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B水平升高,且随结核病变程度加重而上升。 展开更多

关键词 慢性阻塞性肺疾病 结核分枝杆菌 Γ-干扰素 可溶性白细胞介素-2受体 抗原85b

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结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗转染人气道上皮细胞对哮喘患者Th1/Th2平衡的调节作用 被引量：2

6

作者 吴健 徐军 钟南山 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期465-469,共5页

目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转... 目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE ,并收集转化细胞培养上清液 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85BmRNA水平的表达 ,螨过敏哮喘组 (18例 )和正常组 (13例 )PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其培养上清液中白介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　RT PCR法扩增转染的 16HBE细胞中有 992bp长度的预期片断。无刺激状态下 ,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL 5、IFN γ无差异 ,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL 5 ,刺激和未刺激处理分别为 (17 1± 1 9)pg/ml和 (11 9± 0 9)pg/ml(P =0 0 2 ) ;螨 +Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较 ,前者IFN γ水平显著高于后者 ,分别为 (111 5± 15 9)pg/ml和 (5 8 8± 7 8)pg/ml(P =0 0 4 ) ,IFN γ/IL 5的比值分别为 7 2± 4 8和 4 9± 2 5 (P =0 0 8)。正常人不同刺激方法间比较 ,所有指标差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　螨过敏的变应性? 展开更多

关键词 结核分支杆菌 抗原85b DNA疫苗 气道上皮细胞 哮喘 TH1细胞 Th2细胞 调节作用

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分泌融合蛋白Ag85B-ESAT-6重组卡介苗在小鼠体内的免疫效应 被引量：2

7

作者 刘洪波 蔡昌学 +1 位作者 吴少庭 甘燕 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第5期333-336,共4页

目的研究分泌融合蛋白Ag85B-ESAT-6重组卡介苗(rBCG)在小鼠体内诱导的免疫效应。方法以2×106CFU的rBCG或BCG皮下接种BALB/c小鼠,免疫后第4、6、8周时用ELISA测定TB-PPD特异的血清抗体滴度;分离脾淋巴细胞,以流式细胞术测定CD4+和CD... 目的研究分泌融合蛋白Ag85B-ESAT-6重组卡介苗(rBCG)在小鼠体内诱导的免疫效应。方法以2×106CFU的rBCG或BCG皮下接种BALB/c小鼠,免疫后第4、6、8周时用ELISA测定TB-PPD特异的血清抗体滴度;分离脾淋巴细胞,以流式细胞术测定CD4+和CD8+T细胞亚群百分比;TB-PPD刺激后以MTT法测定淋巴细胞增殖程度,ELISA检测诱生IFN-γ和IL-10水平。结果rBCG和BCG免疫组小鼠血清特异性抗体滴度分别达1∶5 120和1∶2 560,差异有统计学意义(q=3.89,P=0.034)。rBCG组的IFN-γ水平在第8周达最高(597.1 pg/ml),同期BCG组为416.7 pg/ml,差异有统计学意义(q=10.60,P<0.01)。rBCG组IL-10水平第4周和第6周时也高于BCG组(P<0.05),第8周回落。除第6周外,rBCG组的淋巴细胞增殖指数都高于BCG组(P<0.05)。第8周rBCG组和BCG组CD4+T亚群分别占(71.1±2.6)%和(62.3±2.0)%,差异有统计学意义(q=4.16,P=0.026);CD8+T亚群分别占(35.9±1.7)%和(26.9±2.8)%,差异有统计学意义(q=4.52,P=0.019)。结论融合蛋白Ag85B-ESAT-6引入BCG增强了其抗MTB反应。 展开更多

关键词 融合蛋白 抗原85b ESAT-6 重组卡介苗

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结核分枝杆菌候选抗原基因克隆与表达质粒构建 被引量：2

8

作者 陈建波 罗一鲁 +3 位作者 谭守勇 冯蝶仪 曹智忠 刘志辉 《热带医学杂志》 CAS 2003年第1期38-40,共3页

目的克隆并构建编码结核分枝杆菌(MTB)ESAT6,Ag85B和MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中分别扩增出ESAT6,Ag85B和MPT64基因(288bp,978bp and 687bp),并克隆到T载体,然后用双内... 目的克隆并构建编码结核分枝杆菌(MTB)ESAT6,Ag85B和MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中分别扩增出ESAT6,Ag85B和MPT64基因(288bp,978bp and 687bp),并克隆到T载体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转化大肠杆菌E.coli DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架。结论成功地克隆并构建了ESAT6,Ag85B和MPT64基因的重组表达质粒pGEX-ESAT6,pGEX-Ag85B和pGEX-MPT64。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 抗原 基因克隆 表达质粒 聚合酶链反应

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结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及表达质粒构建 被引量：1

9

作者 刘俊华 冯蝶仪 +1 位作者 陈建波 陈郁筠 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2003年第5期298-299,共2页

目的　克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因 (978bp) ,并克隆到T载体 ,然后用双内切酶消化后 ,与同样酶消化的pGEX 4T 2连接 ,转... 目的　克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因 (978bp) ,并克隆到T载体 ,然后用双内切酶消化后 ,与同样酶消化的pGEX 4T 2连接 ,转入大肠杆菌E .coliDH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果　酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符 ,测序结果与文献报道一致 ,证实符合表达框架。结论　成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒 pGEX Ag85BV。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 抗原 AG85b 基因重组

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Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达 被引量：1

10

作者 房祥峰 钱江 +2 位作者 孟锦绣 李东风 吴健 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2015-2020,共6页

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T... 目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒)。用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率。利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组。Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×1011TU/L,感染效率达到90%以上。Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达。与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症。 展开更多

关键词 胸腺基质淋巴细胞生成素 胸腺基质淋巴细胞生成素受体 慢病毒载体 抗原85b 人支气管上皮细胞

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Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达 被引量：1

11

作者 钱江 吴健 +5 位作者 安弘 房祥峰 李东风 杨士芳 孟锦绣 高兴林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1680-1687,共8页

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CS... 目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介� 展开更多

关键词 抗原85b 胸腺基质淋巴细胞生成素 髓样树突状细胞 胸腺基质淋巴细胞生成素受体 OX40L

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Ag85B DNA/H37Ra序贯免疫效果的探讨

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作者 王锦彤 卢贤瑜 冉柏林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期584-587,共4页

目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答。方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定。用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,... 目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答。方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定。用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,同时设定DNA-85B/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组。免疫4周或8周后,用ELISA法检测小鼠血清中抗PPD IgG抗体的水平和MTT法检测其脾淋巴细胞的刺激指数(SI)。结果:酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,并且纯度较高。DNA-85B/H37Ra组小鼠血清中抗PPD IgG水平、脾淋巴细胞的SI均显著高于未免疫组(P<0.05);其抗PPD IgG水平稍高于DNA-85B/BCG组、H37Ra组及BCG组,但它们之间无显著性差异(P>0.05);其脾淋巴细胞的SI显著高于H37Ra、BCG组(P<0.05),而与DNA-85B/BCG组比较,仅在4周有显著性差异。在DNA-85B/H37Ra组内,SI在4周显著高于8周(P<0.05),而血清中抗PPD IgG水平8周均显著高于4周(P<0.05)。结论:DNA-85B/H37Ra序贯免疫策略可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,初步证明其免疫效果略优于BCG。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 序贯免疫策略 初免-加强免疫接种策略 抗原Ag85b H37RA

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结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用 被引量：5

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作者 刘根焰 童明庆 +2 位作者 潘世扬 赵旺胜 黄珮珺 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期153-155,共3页

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测... 目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 MRNA 利福平 药敏试验 抗结核药

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结核杆菌抗原85B抑制自噬促进霍奇金淋巴瘤细胞凋亡机制研究

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作者 程永凤 沈亦平 +4 位作者 王学梅 李丹露 樊春艳 古丽巴哈·买买提 严媚 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1218-1224,共7页

目的探讨结核杆菌抗原85B(mycobacterial antigen 85B,Ag85B)抑制自噬促进霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)细胞凋亡及机制。方法回顾性收集新疆医科大学第一附属医院收治的80例HL及同期30例淋巴结反应性增生患儿(对照组)临床资料及... 目的探讨结核杆菌抗原85B(mycobacterial antigen 85B,Ag85B)抑制自噬促进霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)细胞凋亡及机制。方法回顾性收集新疆医科大学第一附属医院收治的80例HL及同期30例淋巴结反应性增生患儿(对照组)临床资料及病理组织切片。采用免疫组化分析微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、自噬降解底物蛋白1(sequestosome 1,P62/SQSTM1)、Beclin-1在HL及对照组患儿病理组织中的表达。将人霍奇金淋巴瘤细胞(HDLM-2)分为HDLM-2组、HDLM-2+结核杆菌抗原85B(mycobacterial antigen 85B,Ag85B)组(Ag85B分别为0.5、1、2、4μg/mL)。采用CCK8法检测HDLM-2细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测LC3、P62、Beclin-1、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA的表达;凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果HL组LC3、Beclin-1阳性表达高于对照组(P<0.05),P62阳性表达低于对照组(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期较Ⅰ~Ⅱ期LC3、Beclin-1阳性表达增高,P62阳性表达降低(P<0.05)。细胞实验结果显示,HDLM-2+Ag85B组与HDLM-2组比较,细胞增殖受抑,LC3和Beclin1的mRNA表达减低,P62、PI3K、Akt和mTOR的mRNA表达增高,细胞凋亡增加,且在Ag85B为2μg/mL时,Ag85B干预HDLM-2细胞24 h作用最强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自噬在HL患儿中增强,且随疾病的分期增加而增强;Ag85B可抑制HL肿瘤细胞增殖及自噬,促进细胞凋亡,其机制可能与促进PI3K/Akt/mTOR通路相关。 展开更多

关键词 霍奇金淋巴瘤 结核杆菌抗原85b 自噬 凋亡 人霍奇金淋巴瘤细胞

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结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：1

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作者 罗一鲁 陈建波 +2 位作者 冯蝶仪 谭守勇 陈郁筠 《热带医学杂志》 CAS 2004年第4期382-384,共3页

目的通过结核分支杆菌Ag85B蛋白编码基因在大肠杆菌中稳定表达,以获得大量纯化的Ag85B蛋白。方法采用DNA重组技术构建结核分支杆菌Ag85B基因的表达载体,双酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定重组子,阳性重组子转化大肠杆菌,并诱导表达外源蛋... 目的通过结核分支杆菌Ag85B蛋白编码基因在大肠杆菌中稳定表达,以获得大量纯化的Ag85B蛋白。方法采用DNA重组技术构建结核分支杆菌Ag85B基因的表达载体,双酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定重组子,阳性重组子转化大肠杆菌,并诱导表达外源蛋白。十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中的表达,对染色的凝胶扫描,以测定目的蛋白表达水平。结果菌体蛋白经SDSPAGE,含阳性重组质粒的菌体蛋白中出现一条新蛋白带,表达量占菌体总蛋白的33%～38%。Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中表达方式主要是包涵体形式。结论构建的大肠杆菌重组体能高效表达结核分支杆菌Ag85B蛋白抗原。 展开更多

关键词 分支杆菌 抗原 Ag85b基因 重组体

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牛分支杆菌ag85b基因的克隆及表达 被引量：1

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作者 马玢 曾瑾 +2 位作者 李武 刘晓明 邓光存 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第5期44-47,共4页

以牛分支杆菌C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因ag85b,构建重组表达质粒pET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果表明,构建了ag85b基因的重组... 以牛分支杆菌C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因ag85b,构建重组表达质粒pET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果表明,构建了ag85b基因的重组基因工程菌株,IPTG诱导表达的重组蛋白分子质量约为33ku,目的蛋白能被His单克隆抗体识别,表达产物主要以包涵体形式存在。 展开更多

关键词 牛分支杆菌 Ag85b抗原 原核表达

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结核分枝杆菌Ag85B+Rv3407融合基因自杀性DNA疫苗的构建及鉴定 被引量：1

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作者 邵丽军 李猛 伊正君 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期368-371,共4页

目的构建表达结核分枝杆菌生长期抗原Ag85B和休眠期蛋白Rv3407的自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85B基因和Rv3407蛋白基因,再以二者的混合物为模板扩增Ag85B... 目的构建表达结核分枝杆菌生长期抗原Ag85B和休眠期蛋白Rv3407的自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85B基因和Rv3407蛋白基因,再以二者的混合物为模板扩增Ag85B+Rv3407融合基因,构建真核表达载体pSCA1/Ag85B+Rv3407,以ELISA法检测其在BHK-21细胞中的瞬时表达。结果从结核分枝杆菌基因组中扩增得到Ag85B+Rv3407融合基因,片段大小为1 323bp,与预期相符。成功构建重组质粒pSCA1/Ag85B+Rv3407,该重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的蛋白(实验组P/N≥2.1)。结论成功构建结核分枝杆菌自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,该重新载体能在真核细胞中表达目的蛋白。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 自杀性DNA疫苗 生长期抗原Ag85b 休眠期蛋白Rv3407 pSCAl载体

原文传递

牛分支杆菌ag85b基因原核表达载体的构建

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作者 蒋成砚 谢昆 +3 位作者 罗家琴 柴俊 王生奎 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期121-123,共3页

为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoRⅠ及SalⅠ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 D... 为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoRⅠ及SalⅠ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒。将此重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoRⅠ及SalⅠ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定。酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同。结果表明,成功地克隆并构建了ag85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b。 展开更多

关键词 牛分支杆菌 抗原 AG85b 基因重组

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