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纳米抗体筛选和表达技术研究进展 被引量：7
1
作者 朱光 王译晨 +2 位作者 宋莎莎 张麦收 王加才 《中国动物检疫》 CAS 2021年第7期79-87,共9页
纳米抗体(nanobody,Nb)是在骆驼血清中发现的一种新型抗体,具有相对分子质量小、稳定性高、亲和力高、组织渗透性强以及可识别抗原缝隙表位、进一步改造和表达等特点。Nb筛选技术分为噬菌体展示、酵母双杂交、mRNA展示以及高通量测序和... 纳米抗体(nanobody,Nb)是在骆驼血清中发现的一种新型抗体,具有相对分子质量小、稳定性高、亲和力高、组织渗透性强以及可识别抗原缝隙表位、进一步改造和表达等特点。Nb筛选技术分为噬菌体展示、酵母双杂交、mRNA展示以及高通量测序和质谱分析等4种,它们都能够快速筛选到特异性Nb。对具有高度亲和力的Nb,多种表达系统均可以实现高效表达。其中:原核表达最常用,其操作相对简单、产量大、生产成本低,但要去除表达出的重组蛋白内毒素;酵母表达可以直接收集培养基上清纯化,杂蛋白含量少,但可能存在过度糖基化问题;植物宿主可以大量表达Nb,但基因操作过程繁琐,且分离纯化Nb相对困难;哺乳动物细胞生产抗体也是较常用的方式,但生产成本较高。针对每一种筛选方法和表达系统目前没有统一的评价标准,在选择时,应以实验室条件为基础,充分了解筛选对象的结构、功能和用途,根据不同目的选用。本文对Nb结构特点、筛选及表达以及在动物疫病防治中的应用展开论述,可为相关领域研究提供技术支持。 展开更多
关键词 纳米抗体 重链可变区 单域抗体 筛选技术 表达系统
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SPR技术检测血小板抗体及其临床应用的研究 被引量：5
2
作者 伍昌林 周雪敏 +3 位作者 何建安 顾大勇 朱奕 邵超鹏 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第9期1197-1200,共4页
目的利用表面等离子体共振(SPR)技术对血小板抗体筛选与配型的可行性进行研究,摸索一种血小板相容性输注的新方法。方法采用氨基耦联法在SPR芯片表面固定相应的通用型血小板抗原,并优化芯片分析条件,再用该芯片检测对照血清,分析该技术... 目的利用表面等离子体共振(SPR)技术对血小板抗体筛选与配型的可行性进行研究,摸索一种血小板相容性输注的新方法。方法采用氨基耦联法在SPR芯片表面固定相应的通用型血小板抗原,并优化芯片分析条件,再用该芯片检测对照血清,分析该技术的特性;MAIPA法对比研究临床样本,同时运用SPR技术对10例血小板抗体阳性患者输注前进行血小板配合试验,选用配合型血小板输注,临床跟踪评价输注效果。结果 SPR技术检测血小板抗体的稳定性、敏感性与特异性均较好;SPR技术与MAIPA法对106例多次输注血小板的临床样本检测显示,2种方法比较差异无统计学意义(χ2=0.333,P>0.05),灵敏度为91%,特异性为97.9%,总一致性为97.2%;利用SPR技术配型输注的10例血小板抗体阳性患者,8例1h血小板增加值CCI>7.5,24hCCI>4.5,临床跟踪评价良好。结论 SPR技术筛检血小板抗体与MAIPA法性能基本相当,但SPR技术操作更简便快速、可靠直观,而且非标记,可满足临床血小板输注前抗体的快速检测和配型的初步要求。 展开更多
关键词 血小板抗体 筛查 血小板配型 SPR技术
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噬菌体抗体库筛选技术研究进展 被引量：3
3
作者 毕司英 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2012年第1期70-73,共4页
噬菌体抗体库技术是一项新兴的基因工程抗体技术,应用这项技术获得高特异性抗体的关键之一就是筛选环节。根据抗原性质以及筛选目的的不同,筛选方法的选择也不相同,各种筛选策略的优化对中和抗体的获得有至关重要的作用。
关键词 噬菌体展示 噬菌体抗体库 筛选技术 优化
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SPR技术在红细胞血型同种抗体筛选与鉴定中的应用研究 被引量：2
4
作者 伍昌林 何建安 +6 位作者 顾大勇 邵永红 党鑫堂 朱奕 王诗月 易品 邵超鹏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期557-562,共6页
目的:探讨利用表面等离子体共振(Surface plasman resonance,SPR)技术对红细胞血型同种抗体筛选与鉴定的可行性,为红细胞输注相容性检测提供一种新方法。方法:采用氨基偶联法在SPR芯片表面固定红细胞抗原谱,优化芯片分析条件,检测红细... 目的:探讨利用表面等离子体共振(Surface plasman resonance,SPR)技术对红细胞血型同种抗体筛选与鉴定的可行性,为红细胞输注相容性检测提供一种新方法。方法:采用氨基偶联法在SPR芯片表面固定红细胞抗原谱,优化芯片分析条件,检测红细胞血型抗体阳性对照血清,分析SPR芯片技术的检测性能;对比研究SPR芯片技术与微柱凝集法检测129例长期输血的地中海贫血患者临床样本的一致性;同时运用SPR芯片技术对7例血型抗体阳性患者输血前进行血型抗体鉴定,选择红细胞抗原相容性血液输注;跟踪评价红细胞输注效果。结果:SPR芯片技术检测血型同种抗体的重复性、敏感性与特异性均较好;SPR技术与微柱凝集法对129例临床样本血型同种抗体筛查结果显示,2种方法无显著性差异(χ2=0.333, P> 0.05),总体一致性为97.2%;SPR技术对7例血型同种抗体阳性患者鉴定结果为:抗-E 3例、抗-M 1例、抗-C 1例、抗-Jka 1例、自身抗体1例,与微柱凝集法鉴定结果基本一致;SPR技术选择配合性输血后,6例患者红细胞输注有效,1例患者存在自身抗体输注无效。结论:SPR芯片技术筛检与鉴定红细胞血型抗体的性能与微柱凝集法总体一致,而SPR技术操作更简便快速、高通量且非标记,可满足批量红细胞输注前血型同种抗体快速筛查和鉴定的基本要求。 展开更多
关键词 血型同种抗体 抗体筛查 特异性鉴定 SPR芯片技术
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噬菌体抗体库筛选技术 被引量：2
5
作者 高鹏 胡立勇 +1 位作者 钱钰 徐晨 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第23期4577-4583,共7页
在过去的20年中,噬菌体抗体库筛选技术被广泛的应用于抗体筛选、疾病治疗,临床诊断以及基础研究之中。在该技术的应用过程中,快速有效的筛选出最适合的单克隆抗体并进行可靠和高效的数据管理和分析是十分重要的。文中总结了近年来噬菌... 在过去的20年中,噬菌体抗体库筛选技术被广泛的应用于抗体筛选、疾病治疗,临床诊断以及基础研究之中。在该技术的应用过程中,快速有效的筛选出最适合的单克隆抗体并进行可靠和高效的数据管理和分析是十分重要的。文中总结了近年来噬菌体抗体库的高通量筛选方法并且对数据管理做了简要介绍。 展开更多
关键词 噬菌体展示 抗体库 筛选技术 数据管理
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基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体
6
作者 陈阳 刘彤 +4 位作者 张佳琦 廖化新 林跃智 王晓钧 王亚玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期17-23,共7页
在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选... 在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选。首先,将马IgG蛋白(EqIgG1-C)密码子优化后合成到真核表达载体pcDNA3.4上,纯化出抗原蛋白。随后,使用蛋白质免疫小鼠,分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B细胞,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,用overlapping PCR方法扩增出线性化的完整抗体,并进行鉴定。结果从80个B细胞中获得了27株特异性重组单克隆抗体,并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上,共转染Expi293F^(TM)细胞后表达纯化,经过ELISA和Western blot验证,显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用。使用该方法可以省时高效的获得特异性抗体,为马的免疫学研究提供了重要研究工具,为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展。 展开更多
关键词 马IgG 单个B细胞PCR 抗体筛选技术 单克隆抗体
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抗体成药性筛选流程及评价策略 被引量：1
7
作者 姚江宁 律璎桐 +2 位作者 张迎珺 张正平 徐同杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期507-516,共10页
自1986年OKT3作为第一个治疗性单克隆抗体获批上市后,抗体技术及抗体药物迅猛发展。单克隆抗体、抗体片段、双(多)特异性抗体、融合蛋白、纳米抗体以及抗体偶联药物(antibody-drug conjugates, ADCs)等推陈出新,在肿瘤、血液、免疫、呼... 自1986年OKT3作为第一个治疗性单克隆抗体获批上市后,抗体技术及抗体药物迅猛发展。单克隆抗体、抗体片段、双(多)特异性抗体、融合蛋白、纳米抗体以及抗体偶联药物(antibody-drug conjugates, ADCs)等推陈出新,在肿瘤、血液、免疫、呼吸和代谢等相关疾病的治疗领域发挥着举足轻重的作用。抗体药物的发现过程,是通过多轮生物学功能评估和可成药性评估,筛选出具有安全、有效、稳定和可工艺放大的最佳候选序列,从而提高药物开发和临床研究的效率及成功率。抗体药物发现阶段的“成药性筛选与评估”已日益受到关注和重视,从药物发现和设计、先导分子筛选到候选分子确认,可及时发现分子潜在的物理化学风险因素,并评估可控性,保证后续药物开发过程中的质量稳定性。本文对抗体发现阶段的成药性筛选评估流程进行了分类和定义,涉及单克隆抗体、双特异性抗体、纳米抗体和ADCs等相关技术和药物形式,同时总结了成药性筛选评估中应重点关注的质量属性和高通量检测技术;系统性地阐述成药性开发流程和策略,为不断涌现的创新型药物的成药性筛选评估提供参考,大幅提高抗体药物开发的效率和成功率。 展开更多
关键词 抗体 发现 成药性 筛选与评估 高通量检测技术
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5231例不规则抗体筛查结果分析 被引量：5
8
作者 王秀菊 蒋绍玮 +2 位作者 石鹏 任雪梅 高明 《临床血液学杂志（输血与检验）》 CAS 2014年第6期1061-1062,共2页
目的:探讨不规则抗体筛选在输血中的重要意义。方法:对2012-07-2013-07我院5 231例输血患者做输血前不规则抗体检测。结果:在5 231例需输血患者中检出不规则抗体28例,阳性检出率0.54%。结论:不规则抗体筛选应作为输血前的常规项目,对预... 目的:探讨不规则抗体筛选在输血中的重要意义。方法:对2012-07-2013-07我院5 231例输血患者做输血前不规则抗体检测。结果:在5 231例需输血患者中检出不规则抗体28例,阳性检出率0.54%。结论:不规则抗体筛选应作为输血前的常规项目,对预防溶血性输血反应、保障患者生命安全具有重要意义。 展开更多
关键词 抗体筛选 微柱凝胶技术 不规则抗体 溶血性输血反应
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