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高通量表达系统在EV71单链抗体表达中的应用 被引量：1
1
作者 余秋凡 陶焱炀 +3 位作者 李靖欣 王圆媛 张黎 朱凤才 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期641-645,共5页
目的 建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法,将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。方法 PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段,使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。... 目的 建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法,将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。方法 PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段,使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。瞬时转染293T细胞,并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody,IFA)检测抗体表达盒中ScFv的表达和抗体的活性。从噬菌体库淘选出的阳性克隆中挑取96个抗体,用该表达盒进行高通量表达,并对表达效果进行评价。结果 成功扩增出3个基因片段,并将3个片段连接成1个线性的表达盒。线性表达盒可直接在293T细胞中瞬时表达,表达上清经Western blot检测可见约相对分子质量为38×103的条带;ELISA和IFA结果均显示表达出来的ScFv抗体能与其对应的抗原特异性结合。同时该系统可以用于噬菌体抗体库中抗体基因的高通量表达。结论 成功构建了ScFv的线型表达盒,并实现了抗体的快速高通量表达。 展开更多
关键词 ScFv抗体 抗体表达盒 重叠PCR 高通量表达
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卡式微柱凝胶技术在血型鉴定及输血前红细胞不规则抗体检验中的作用研究 被引量：2
2
作者 何芸 《中国医疗器械信息》 2023年第9期126-128,共3页
目的:分析卡式微柱凝胶技术在血型鉴定、输血前红细胞不规则抗体检验中的价值。方法:随机选取2020年1月~2021年10月在本院进行输血的患者197例,所选患者输血前分别应用卡式微柱凝胶技术及聚凝胺技术进行血型鉴定及红细胞不规则抗体检验... 目的:分析卡式微柱凝胶技术在血型鉴定、输血前红细胞不规则抗体检验中的价值。方法:随机选取2020年1月~2021年10月在本院进行输血的患者197例,所选患者输血前分别应用卡式微柱凝胶技术及聚凝胺技术进行血型鉴定及红细胞不规则抗体检验,对比两种检验方法ABO血型、RhD血型鉴定结果以及红细胞不规则抗体检出情况。结果:与聚凝胺法相比,卡式微柱凝胶法在ABO血型与RhD血型一次性中的鉴定准确率差异有统计学意义(P<0.05)。卡式微柱凝胶法红细胞不规则抗体检出率显著较聚凝胺法高且总检出率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:卡式微柱凝胶技术在血型鉴定、输血前红细胞不规则抗体检验中有着较高的应用价值,有助于保证输血的安全性,临床应用价值高于聚凝胺技术。 展开更多
关键词 血型鉴定 红细胞不规则抗体 卡式微柱凝胶技术 聚凝胺法
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三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2特异性人源肺癌噬菌体单链抗体的筛选和鉴定 被引量：2
3
作者 赵文思 罗弋 +1 位作者 黎博一 张涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2343-2347,共5页
目的通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库,并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体。方法取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA,PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL,SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因sc Fv,克隆入噬菌体表达载体p ... 目的通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库,并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体。方法取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA,PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL,SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因sc Fv,克隆入噬菌体表达载体p CANTAB5E,制备初级抗体库。以A549细胞及ABCG2蛋白对抗体库进行6轮淘选。Western blot检测单链抗体的可溶性表达和对ABCG2蛋白表达的影响,ELISA和ICC鉴定其特异性,CCK-8检测其顺铂增敏作用。结果成功筛选出抗ABCG2人源肺腺癌噬菌体单链抗体。Western blot证实其可溶性表达,大小约为34×103且可明显下调ABCG2蛋白的表达。ELISA和ICC检测到该抗体对ABCG2抗原的识别率高达75%,并与A549细胞具有结合特异性。CCK8结果则显示该sc Fv可增加A549细胞对顺铂的敏感性,明显减小其IC50值。结论成功构建了人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选出了能与ABCG2蛋白特异性结合的单链抗体,为后续体内可视化研究和靶向ABCG2+的肺癌干样细胞奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体单链抗体scFv 肺腺癌 ABCG2 靶向治疗 化疗增敏
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利用线性表达框高通量表达人源单克隆抗体 被引量：1
4
作者 张梦雄 杨志新 +4 位作者 王荣 陆健昇 夏炳辉 周晓巍 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2016年第2期158-162,共5页
目的:建立不通过克隆步骤高通量表达来源于人单个B细胞的抗体轻、重链基因的方法。方法和结果:PCR扩增3个末端重叠的DNA片段,即1CMV启动子和编码抗体引导区序列的片段;2抗体Ig G1重链恒定区序列和牛生长激素(BGH)poly(A)信号序列,轻链I... 目的:建立不通过克隆步骤高通量表达来源于人单个B细胞的抗体轻、重链基因的方法。方法和结果:PCR扩增3个末端重叠的DNA片段,即1CMV启动子和编码抗体引导区序列的片段;2抗体Ig G1重链恒定区序列和牛生长激素(BGH)poly(A)信号序列,轻链Igκ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列,轻链Igλ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列;以及3抗体基因可变区序列V_H、V_κ或V_λ。3个片段通过重叠延伸PCR构建全长线性片段即线性表达框,将此来源于人单个B细胞的配对的抗体轻、重链线性表达框共转染293E细胞,72 h收集上清检测到表达的抗体。结论:构建的抗体基因线性表达框是无须克隆,快速高通量表达抗体基因进行筛选分析的策略。 展开更多
关键词 单克隆抗体 单个B细胞 抗体基因 重叠延伸PCR 线性表达框
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ABCG2特异性肺腺癌单链抗体的裸鼠体内放免显像及其抑瘤作用 被引量：1
5
作者 赵文思 周寒静 罗弋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期2600-2605,共6页
目的观察ABCG2特异性肺腺癌单链抗体(scFv)在裸鼠体内的放免显像和代谢动力学特征,并探讨其对肿瘤生长的作用。方法采用不同浓度梯度scFv处理肺腺癌细胞后,Western blot检测ABCG2靶蛋白表达量的变化;CCK-8检测细胞增殖能力改变并绘制生... 目的观察ABCG2特异性肺腺癌单链抗体(scFv)在裸鼠体内的放免显像和代谢动力学特征,并探讨其对肿瘤生长的作用。方法采用不同浓度梯度scFv处理肺腺癌细胞后,Western blot检测ABCG2靶蛋白表达量的变化;CCK-8检测细胞增殖能力改变并绘制生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化;放射性核素131I标记抗体后行裸鼠体内生物分布和SPECT/CT放免显像研究;进一步建立移植瘤模型检测scFv的体内抑瘤能力。结果 scFv干预肺腺癌细胞后导致ABCG2蛋白表达水平较对照组显著降低,并明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞(P<0.05)。裸鼠体内生物分布和放免显像结果显示该scFv具有良好的代谢动力学特征,表现为高效、快速的肿瘤靶部位特异性结合及体内清除能力。结论肺腺癌ABCG2 scFv具有良好的放免显像效果,并显示出较好的代谢动力学、亲肿瘤和抗肿瘤特性,对肿瘤的生长有抑制作用。 展开更多
关键词 肺腺癌 单链抗体 ABCG2 代谢动力学 肿瘤抑制
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