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抗HBc-ScFv基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及其体外表达 被引量：2
1
作者 汤正好 马会慧 +3 位作者 臧国庆 余永胜 李刚 姚集鲁 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期734-738,共5页
目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因. 方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗卜HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5 型腺病... 目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因. 方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗卜HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5 型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染B15183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd—ScFV,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗HBc scFv基因的重组腺病毒Ad—scFv,体外转染HepG2细胞,PCR和ELISA法检测目的基因及其表达. 结果:构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1015 PFU/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因. 结论:成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础. 展开更多
关键词 缺陷型腺病毒载体 体外表达 基因复制 人源性抗hbc单链抗体 scfv基因 复制缺陷型腺病毒 ELISA法检测 DNA重组技术 重组腺病毒载体 HepG2细胞 病毒核心蛋白 目的基因 构建表达 真核细胞 293细胞 乙型肝炎 穿梭质粒 基因克隆
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