扩增条件对茶类植物RAPD带的影响 被引量：16

1

作者 袁长春 施苏华 叶创兴 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 1999年第4期313-317,共5页

采用梯度分析的方法试验了模板ＤＮＡ、引物、镁离子、ｄＮＴＰ和Ｔａｑ酶的浓度对茶类植物进行ＲＡＰＤ分析中ＤＮＡ扩增结果的影响。实验表明这些条件的变化对扩增出来的ＲＡＰＤ带的数目和强弱会产生影响。经过比较分析，筛选出对于... 采用梯度分析的方法试验了模板ＤＮＡ、引物、镁离子、ｄＮＴＰ和Ｔａｑ酶的浓度对茶类植物进行ＲＡＰＤ分析中ＤＮＡ扩增结果的影响。实验表明这些条件的变化对扩增出来的ＲＡＰＤ带的数目和强弱会产生影响。经过比较分析，筛选出对于茶类植物进行ＲＡＰＤ分析较理想的扩增条件：２．０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，２００ｕｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ，１５ｎｇ引物／２０ｕｌ反应体积，４ｎｇ模板ＤＮＡ／ｕｌ反应体积，１ＵＴａｑ酶／２０ｕｌ反应体积。 展开更多

关键词 茶类植物 扩增条件 RAPD带

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几种因素对山茶属植物RAPD分析的DNA扩增的影响 被引量：14

2

作者 唐绍清 施苏华 林海波 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期185-188,共4页

多种因素会影响ＲＡＰＤ扩增，本研究试验了引物、Ｍｇ２＋和ｄＮＴＰ的浓度以及Ｔａｑ酶来源对山茶属植物进行ＲＡＰＤ分析的ＤＮＡ扩增的影响。结果表明这些因素对扩增结果都会产生影响，通过比较分析，得到了一个对于山茶属植物进行... 多种因素会影响ＲＡＰＤ扩增，本研究试验了引物、Ｍｇ２＋和ｄＮＴＰ的浓度以及Ｔａｑ酶来源对山茶属植物进行ＲＡＰＤ分析的ＤＮＡ扩增的影响。结果表明这些因素对扩增结果都会产生影响，通过比较分析，得到了一个对于山茶属植物进行ＲＡＰＤ分析较理想的扩增条件。 展开更多

关键词 山茶属 RAPD 扩增条件

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细叶桉ISSR-PCR体系的建立与优化 被引量：10

3

作者 田华 张党权 +4 位作者 谭晓风 黄青云 邓顺阳 樊绍刚 谷振军 《经济林研究》 2009年第1期13-16,79,共5页

细叶桉是我国近年来成功引种的耐寒桉树种类之一,但其种源关系难以区分,不利于后续新品种的培育。为给后续的分子水平上鉴定细叶桉种源关系打基础,以细叶桉叶片基因组DNA为材料,分析了能够影响细叶桉ISSR-PCR的主要参数如模板DNA、引物... 细叶桉是我国近年来成功引种的耐寒桉树种类之一,但其种源关系难以区分,不利于后续新品种的培育。为给后续的分子水平上鉴定细叶桉种源关系打基础,以细叶桉叶片基因组DNA为材料,分析了能够影响细叶桉ISSR-PCR的主要参数如模板DNA、引物浓度、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、退火温度等6个因素对扩增结果的影响情况,建立了适用于细叶桉ISSR-PCR的反应体系和扩增条件。 展开更多

关键词 细叶桉 ISSR—PCR 反应体系 扩增条件

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五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析 被引量：11

4

作者 陈娟 唐俊妮 +1 位作者 李键 陈丽君 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2014年第2期137-141,共5页

目的对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限。方法根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eae... 目的对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限。方法根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eaeA基因、单核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志贺菌的ipaH基因设计5对特异性引物进行多重PCR,对反应条件包括镁离子浓度、引物浓度和退火温度进行优化试验,并确定该检测方法的检出限。结果最佳反应条件为金黄色葡萄球菌、沙门菌和福氏志贺菌引物浓度为0.25μmol/L,单核增生李斯特菌引物浓度为0.4μmol/L,大肠杆菌O157∶H7引物浓度为0.3μmol/L,Mg2+浓度为2.25 mmol/L,退火温度为60℃;在此条件下金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌的多重PCR的DNA检出限分别为6.4、32、32、800和160 pg。结论通过对5种引物的PCR条件进行优化和检出限的分析,为食品中该5种致病菌的快速检测奠定基础,对实际应用具有指导意义。 展开更多

关键词 多重PCR 扩增条件 优化 检出限 食源性致病菌 食品安全

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佛手RAPD扩增系统的建立 被引量：5

5

作者 马伯军 陈镖 +1 位作者 陈文静 张萍华 《浙江师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第2期158-161,共4页

试验了模板DNA、引物、镁离子和Taq酶的浓度对佛手RAPD分析结果的影响,从而建立了适合佛手RAPD扩增的系统.具体条件为:25μL反应体系中模板DNA100ng(4ng μL),MgCl23.0～5.0mmol L,dNTP200μmol L,10 merPrimer0.2μmol L及1UTaqPolymer... 试验了模板DNA、引物、镁离子和Taq酶的浓度对佛手RAPD分析结果的影响,从而建立了适合佛手RAPD扩增的系统.具体条件为:25μL反应体系中模板DNA100ng(4ng μL),MgCl23.0～5.0mmol L,dNTP200μmol L,10 merPrimer0.2μmol L及1UTaqPolymerase.扩增程序为:93℃120s;之后,93℃60s,35℃60s,72℃120s,进行42个扩增循环;最后72℃延伸600s. 展开更多

关键词 佛手 扩增 Taq酶 DNA 镁离子 引物 RAPD分析 反应体系 浓度 随机扩增多态DNA技术

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孓遗植物桫椤RAPD分析中主要反应参数的影响 被引量：3

6

作者 李雪雁 王艇 苏应娟 《生态科学》 CSCD 2003年第2期120-123,共4页

为得到桫椤RAPD扩增的最佳条件,对影响桫椤RAPD扩增的模板纯化方法、模板含量、酶浓度、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度和引物浓度及扩增程序等多种因素进行了探讨。结果表明,用玻璃奶和蛋白酶K纯化后获得的DNA作为模板进行RAPD反应,其扩增带比... 为得到桫椤RAPD扩增的最佳条件,对影响桫椤RAPD扩增的模板纯化方法、模板含量、酶浓度、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度和引物浓度及扩增程序等多种因素进行了探讨。结果表明,用玻璃奶和蛋白酶K纯化后获得的DNA作为模板进行RAPD反应,其扩增带比用未纯化的和仅用无水乙醇再沉淀的DNA为模板更亮,更清晰,重复性更好;模板浓度、酶浓度、Mg^(2+)及dNIT浓度、引物浓度及退火温度这些因素都会对RAPD产生影响。经过本实验的探索,发现桫椤RAPD扩增的最佳体系是(2.5×10^(-2)mL反应体积):模板浓度为70ng,Mg^(2+)浓度为2.5mmol·L^(-1),dNTP为0.2mmol·L^(-1),引物3×10^(-4)mL;最佳扩增程序为:94℃200s,一个循环;94℃60s,36℃60s,72℃120s,40个循环:72℃600s,一个循环:4℃保存。 展开更多

关键词 孓遗植物 桫椤 RAPD分析 反应参数

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土壤微生物总DNA的提取以及土壤真菌ITS-PCR体系的建立 被引量：10

7

作者 隋心 冯富娟 +1 位作者 娄鑫 韩士杰 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第9期166-169,共4页

18S rDNA及28S rDNA间的rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列已广泛运用到多种真菌种属水平的分类鉴定研究中,利用Tiangen DP330土壤提取试剂盒对土壤总DNA进行提取并对真菌的ITS-PCR体系进行优化。研究发现:样品在... 18S rDNA及28S rDNA间的rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列已广泛运用到多种真菌种属水平的分类鉴定研究中,利用Tiangen DP330土壤提取试剂盒对土壤总DNA进行提取并对真菌的ITS-PCR体系进行优化。研究发现:样品在-20℃低温下短期保存对DNA的提取质量无明显影响。对土壤真菌ITS-PCR扩增条件中的各个因素进行了优化,建立了引物浓度0.5μmol/L、dNTP浓度为0.2mmol/L、Taq酶的用量2.5U、DNA模板用量为30ng^90ng的最佳ITS-PCR扩增体系。 展开更多

关键词 DNA提取 ITS-PCR 土壤微生物 单因子试验

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红山茶总DNA提取及ITS-PCR扩增条件优化研究 被引量：6

8

作者 倪穗 田敏 +1 位作者 李纪元 高捍东 《浙江林业科技》 北大核心 2007年第2期16-19,共4页

利用CTAB法对红山茶组植物总DNA进行提取研究,发现用嫩叶可获得纯度较高的DNA,样品在-20℃低温下短期保存对DNA的提取质量无明显影响,同时,对红山茶PCR扩增条件中的各个因素也进行了多梯度的优化研究,建立了引物浓度0.5μmol/L、Mg2+浓... 利用CTAB法对红山茶组植物总DNA进行提取研究,发现用嫩叶可获得纯度较高的DNA,样品在-20℃低温下短期保存对DNA的提取质量无明显影响,同时,对红山茶PCR扩增条件中的各个因素也进行了多梯度的优化研究,建立了引物浓度0.5μmol/L、Mg2+浓度为2.0～2.5mmol/L、dNTP浓度为0.2mmol/L、Taq酶的用量为1.2U、DNA模板用量为50～60ng的最佳ITS-PCR扩增条件。 展开更多

关键词 总DNA提取 ITS-PCR反应体系 红山茶

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杂草稻nrDNA ITS片段的PCR扩增条件优化及测定 被引量：1

9

作者 刘志文 韩旭 +3 位作者 周索童 王丽 李宪臻 陈温福 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期168-170,共3页

对杂草稻的nrDNA ITS片段的PCR扩增条件进行了优化并测定,建立的PCR最优体系为:20μL反应体系含1μL模板DNA,0.125 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L正反向引物,1 UTaq酶,2.0μL 10×TaqPCR Buffer;退火温度为57℃。这样的条件下充分保证了I... 对杂草稻的nrDNA ITS片段的PCR扩增条件进行了优化并测定,建立的PCR最优体系为:20μL反应体系含1μL模板DNA,0.125 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L正反向引物,1 UTaq酶,2.0μL 10×TaqPCR Buffer;退火温度为57℃。这样的条件下充分保证了ITS PCR产物的质量和纯度要求,直接测序结果为600 bp左右,与网上结果十分类似,表明结果准确可靠。这些ITS片段的系统学信息将为杂草稻的起源进化提供有力的分子水平证据。 展开更多

关键词 杂草稻 NRDNA ITS PCR扩增条件 测序

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杂草稻叶绿体psbA-trnH片段的PCR扩增条件优化 被引量：1

10

作者 刘志文 周索童 +5 位作者 韩旭 曲佐寅 王占久 孙之音 李宪臻 陈温福 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期718-721,共4页

对杂草稻叶绿体psbA-trnH片段的PCR扩增条件进行了优化,建立的最优体系为:20μL反应体积含1μL模板DNA,0.125mM dNTPs,0.5μM正反向引物,1U Taq酶,2.0μL 10×Taq PCR buffer;退火温度为61℃,在此条件下充分保证了psbA-trnH PCR产... 对杂草稻叶绿体psbA-trnH片段的PCR扩增条件进行了优化,建立的最优体系为:20μL反应体积含1μL模板DNA,0.125mM dNTPs,0.5μM正反向引物,1U Taq酶,2.0μL 10×Taq PCR buffer;退火温度为61℃,在此条件下充分保证了psbA-trnH PCR产物的质量和纯度要求。对该片段进行了直接测序,结果为510bp左右,在NCBI中比较分析表明其测序结果准确可靠,经ClustW分析表明含有丰富的系统学信息。 展开更多

关键词 杂草稻 叶绿体psbA-trnH PCR扩增条件 测序

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RAPD法研究穗花杉遗传多样性的反应条件优化

11

作者 朱柏芳 朱笃 +2 位作者 李思光 刘如龙 邓荣根 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2005年第2期142-145,共4页

以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,... 以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,PCR反应体积为20μL.最佳扩增程序为94℃5min,1个循环;94℃1min、37℃1min、72℃2min,40个循环;72℃10min,1个循环. 展开更多

关键词 反应条件优化 穗花杉 遗传多样性 RAPD法 改进CTAB法 随机扩增多态性 Buffer 最佳反应体系 RAPD分析 MG^2+ 总DNA 濒危植物 Taq酶 扩增程序 反应体积 缓冲液 MOL PCR 循环 模板

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白菜RAPD反应条件的优化 被引量：14

12

作者 张鲁刚 王鸣 +2 位作者 陈杭 刘玲 SamuelS.M.Sun 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期1-7,共7页

以芜菁、大白菜及其杂交 1代为试材 ,系统分析了 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对 RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的 RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 0μL,Mg Cl2... 以芜菁、大白菜及其杂交 1代为试材 ,系统分析了 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对 RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的 RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 0μL,Mg Cl2 浓度为 1 .5mmol/L ,d NTP浓度为 2 0 0μmol/L ,随机引物浓度为 0 .4μmol/L ,模板 DNA为 2 0 ng,TaqDNA聚合酶为 6.67μmol/( L· min)。在 8种热循环条件下 ,该体系具有稳定的重现性 ,其扩增程序为 :94℃ /1′→ 36℃ /2 0″→ 72℃ /1 0″预扩增 2循环 ;94℃ /1 0″→ 36℃ /1 5″→ 72℃ /70″扩增38循环 ;72℃ 展开更多

关键词 大白菜 RAPD 反应条件 TAgDNA聚合酶

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木根麦冬（Ophiopogon　xylorrhizus）干叶提取DNA用于RAPD分析 被引量：9

13

作者 张大明 陈新露 邓峥嵘 《生物多样性》 CAS CSCD 1996年第2期119-122,共4页

木根麦冬（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｘｙｌｏｒｒｈｉｚｕｓ）是我国珍稀濒危植物，分布仅限于云南西双版纳雨林，在植物系统学和保护生物学研究中具有独特的意义。随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法是揭示群体遗传多样性的高效、简便方... 木根麦冬（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｘｙｌｏｒｒｈｉｚｕｓ）是我国珍稀濒危植物，分布仅限于云南西双版纳雨林，在植物系统学和保护生物学研究中具有独特的意义。随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法是揭示群体遗传多样性的高效、简便方法，但一般均以新鲜材料提取总ＤＮＡ，对一些分布边远地区物种难以采用此法。本文研究从木根麦冬干叶片中提取总ＤＮＡ，进行ＲＡＰＤ分析。样品取自４个居群、４９个个体。选取生长旺盛的叶片，在野外用硅胶快速干燥保存样品。采用高盐低ｐＨ值法提取总ＤＮＡ，每克鲜重所得的干叶可得８０～１６０μｇ。通过对模板ＤＮＡ的各种处理和ＰＣＲ扩增程序的调整，解决了扩增片段边缘弥散、界线模糊、产率低等问题，获得了理想的扩增带型。 展开更多

关键词 麦冬 木根麦冬 干叶 DNA提取

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用于牛肉掺杂肉成分检测的荧光PCR方法研究 被引量：2

14

作者 杨军辉 《中国食物与营养》 2020年第10期10-14,共5页

目的:研究用于牛肉掺杂肉成分检测的荧光PCR方法。方法:制备不同混合比例的牛肉、猪肉、鸭肉样品,采用DNA提取方法分别提取牛肉、猪肉、鸭肉的DNA,并以不同源性基因为靶基因设定特异性引物和探针;利用荧光PCR的反应条件对DNA实施扩增,... 目的:研究用于牛肉掺杂肉成分检测的荧光PCR方法。方法:制备不同混合比例的牛肉、猪肉、鸭肉样品,采用DNA提取方法分别提取牛肉、猪肉、鸭肉的DNA,并以不同源性基因为靶基因设定特异性引物和探针;利用荧光PCR的反应条件对DNA实施扩增,分析不同掺杂比例的混合肉样品。结果:该方法设计的荧光PCR引物和探针具备良好的特异性和敏感性,可有效检测出相同质量牛肉、猪肉、鸭肉的DNA浓度差异,可检测出牛肉中猪源性成分、鸭源性成分的质量百分比,且误差均在5%以内,同时可检测实际牛肉食品中牛源性含量差异,并通过DNA检测条带清楚呈现。结论:该方法具备牛肉中掺杂肉成分检测的有效性。 展开更多

关键词 荧光PCR 成分检测 DNA提取 引物 探针 特异性 扩增条件 敏感性

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猪链球菌RAPD-PCR(RAPD)反应条件的优化

15

作者 刘翊中 高真贞 刘博涛 《中兽医医药杂志》 2010年第2期18-21,共4页

研究猪链球菌随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增条件。结果表明,当MgCl2浓度为2mmol/L,DNA模板为50ng,dNTP加入量为1.5μL/25μL时扩增效果最好;引物SBSBG07、SBSBG10、SBSBG17及SBSE03、SBSE05、SBSE11号扩增效果较好,即有6条引物可获得理... 研究猪链球菌随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增条件。结果表明,当MgCl2浓度为2mmol/L,DNA模板为50ng,dNTP加入量为1.5μL/25μL时扩增效果最好;引物SBSBG07、SBSBG10、SBSBG17及SBSE03、SBSE05、SBSE11号扩增效果较好,即有6条引物可获得理想的扩增结果。 展开更多

关键词 猪链球菌 RAPD 扩增条件 优化

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