水貂阿留申病毒检测方法研究进展 被引量：3

1

作者 刘艺 冷雪 +8 位作者 时坤 李健明 曾范利 宗颖 宫庆龙 张姗姗 孙志博 刘亚东 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期74-77,共4页

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的以浆细胞增多为主要特征的慢性、消耗性、病毒性传染病。主要侵害水貂的免疫系统,导致机体免疫系统紊乱引起的器官衰竭,病死率极高,严重损害了水貂养殖产业的经济利益,该病存在于绝大多数养殖水貂... 水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的以浆细胞增多为主要特征的慢性、消耗性、病毒性传染病。主要侵害水貂的免疫系统,导致机体免疫系统紊乱引起的器官衰竭,病死率极高,严重损害了水貂养殖产业的经济利益,该病存在于绝大多数养殖水貂的国家和地区。目前,能有效预防该病的疫苗尚未研制成型,该病的防控已成为水貂养殖领域的世界性难题,在防控方面主要采取淘汰检疫阳性水貂的办法。论文主要针对目前该病在国内外检测方法的特点和流行情况进行阐述,以期为水貂阿留申病快速检测方法的建立及水貂阿留申病的有效防控提供参考。 展开更多

关键词 阿留申病毒 检测方法 防控

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阿留申病病原学研究进展 被引量：3

2

作者 肖家美 刘艳环 +2 位作者 金美伶 李红 赵卉 《特产研究》 2014年第4期63-66,共4页

本文对阿留申病毒的生物学特征、抵抗力、培养、分子生物学、流行病学、检测方法及防制的研究作了比较系统地综述,为阿留申病的诊断及防控提供了一定的理论依据。

关键词 阿留申病毒 病原学 研究进展

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水貂阿留申病诊断技术的研究进展 被引量：3

3

作者 张蕾 马凡舒 +3 位作者 孙彦刚 王洋 闫喜军 徐淑娟 《安徽农业科学》 CAS 2015年第6期156-157,160,共3页

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的自身免疫性疾病,目前尚无有效疫苗,每年结合打皮期筛查淘汰病貂是该病防控的主要手段。目前,水貂阿留申病的主要诊断方法是依据临床症状和血清的对流免疫电泳检测。对流免疫电泳需要在实验室内进行... 水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的自身免疫性疾病,目前尚无有效疫苗,每年结合打皮期筛查淘汰病貂是该病防控的主要手段。目前,水貂阿留申病的主要诊断方法是依据临床症状和血清的对流免疫电泳检测。对流免疫电泳需要在实验室内进行,使用范围局限。综述了国外该病诊断的最新研究进展,以期为该病诊断技术的开发提供思路。 展开更多

关键词 水貂阿留申病 诊断技术 对流免疫电泳

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5种分子伴侣对水貂阿留申病毒核衣壳蛋白VP2部分基因可溶性表达的影响 被引量：2

4

作者 柏玲 朱言柱 +2 位作者 潘悦 吕甜甜 张蕾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1699-1706,共8页

为实现水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus,ADV)部分VP2基因的可溶性表达,进一步探究目的蛋白的反应原性,本研究利用基因工程技术克隆ADV衣壳蛋白VP2部分基因,并亚克隆至原核表达载体pET30a(+)中,获得重组表达载体pET-30a-M,经诱导... 为实现水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus,ADV)部分VP2基因的可溶性表达,进一步探究目的蛋白的反应原性,本研究利用基因工程技术克隆ADV衣壳蛋白VP2部分基因,并亚克隆至原核表达载体pET30a(+)中,获得重组表达载体pET-30a-M,经诱导表达后,SDS-PAGE确定蛋白表达形式,尝试降低诱导温度及诱导剂浓度来增加可溶性蛋白表达量,但效果不显著;随后,为增加可溶性表达,尝试将pET-30a-M分别与pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf165种伴侣蛋白共表达。通过SDS-PAGE筛选有效的伴侣蛋白,将伴侣蛋白pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf165种质粒分别转入感受态细胞BL21(DE3),将pET-30a-M质粒分别转入含各种伴侣蛋白的感受态细胞。各种共表达菌株经双抗性筛选,诱导剂诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况。并从诱导温度和伴侣蛋白诱导剂L-Arabinose剂量两个方面筛选最佳表达条件。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明重组表达载体pET-30a-M诱导表达后,蛋白主要以包涵体形式存在,与伴侣蛋白pKJE7共表达后,上清中的可溶性目的蛋白的含量增加,相对分子质量约为70000,且具有反应原性;与pG-KJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16伴侣蛋白共表达,未见可溶性蛋白增加。随着温度的降低,30℃与25℃比37℃上清中的可溶性蛋白表达量有所增加,诱导剂浓度对蛋白表达量影响不大。pKJE7伴侣分子可以促进pET-30a-M可溶性表达,且表达量不受L-Arabinose诱导剂量影响,随着温度降低,可溶性蛋白表达量有所增加,表达的蛋白具有反应原性,本研究为进一步探究该蛋白的生物学功能奠定基础。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 伴侣蛋白 可溶性表达

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3种饲料添加剂对阿留申病水貂血清生化指标的影响 被引量：2

5

作者 彭弟 崔凯 +1 位作者 刘冬婕 马泽芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第17期104-108,共5页

为了研究3种饲料添加剂对阿留申病水貂血清生化指标的影响,试验在对8~9月龄母貂用对流免疫电泳(CIEP)法进行阿留申病毒(ADV)抗体检测的基础上,选取ADV(+)水貂238只和ADV(-)水貂62只,各分为A、B、C、D四组(共计8组),A、B、C组每天分别在... 为了研究3种饲料添加剂对阿留申病水貂血清生化指标的影响,试验在对8~9月龄母貂用对流免疫电泳(CIEP)法进行阿留申病毒(ADV)抗体检测的基础上,选取ADV(+)水貂238只和ADV(-)水貂62只,各分为A、B、C、D四组(共计8组),A、B、C组每天分别在日粮中添加抗申宝、芪参散和酵母多糖,D组只饲喂日粮;分别在饲喂添加剂前和饲喂32 d后每组随机选取3只水貂断趾采血,测定血清16项生化指标。结果表明:ADV(+)水貂血清生化指标中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、钙(Ca)、磷(P)浓度均显著低于ADV(-)水貂(P≤0.05),而丙氨酸氨基转移酶(GPT)、天门冬氨酸氨基转移酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及γ-球蛋白(γ-GLOB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)浓度均显著高于ADV(-)水貂(P≤0.05),其余指标均差异不显著(P>0.05)。ADV(+)水貂中,与饲喂前比较,饲喂后A、B、C组IgG、Ca和P浓度均显著升高(P≤0.05),GPT、LDH活性及γ-GLOB、BUN和CRE浓度均显著降低(P≤0.05);A组IgM、TP和ALB浓度均显著升高(P≤0.05),GOT活性显著降低(P≤0.05);D组各项指标均无显著差异(P>0.05)。与饲喂前比较,饲喂抗申宝后,ADV(-)水貂IgG、IgM浓度均显著提高(P≤0.05)。说明抗申宝不仅对ADV(+)水貂血清生化指标影响显著,而且同样对ADV(-)水貂也具有影响。 展开更多

关键词 水貂 饲料添加剂 抗病毒成分 阿留申病毒 血清生化指标

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水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价 被引量：1

6

作者 秦飞燕 孙杰 +4 位作者 马凡舒 王洋 柏玲 张蕾 闫喜军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2135-2139,2151,共6页

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系... 为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1mmol/L、37℃诱导表达4h,蛋白表达量最高,其大小约为30000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 阿留申病毒 VP2蛋白 表位基因 原核表达 CIEP ELISA

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ADV VP2主要抗原表位基因核酸疫苗与IL-12、IFN-γ细胞因子佐剂质粒的构建及鉴定 被引量：1

7

作者 柏玲 朱言柱 +4 位作者 胡博 朱翔宇 张海玲 廉士珍 张蕾 《特产研究》 2020年第2期1-8,14,共9页

为研制安全有效的水貂阿留申病毒(ADV)VP2核酸疫苗,本研究构建了不含有形成抗原抗体复合物表位的VP2核酸疫苗以及IL-12、IFN-γ细胞因子真核表达质粒,在体外细胞水平鉴定上述目的基因的表达情况。首先,以各克隆质粒为模板,PCR扩增获得AD... 为研制安全有效的水貂阿留申病毒(ADV)VP2核酸疫苗,本研究构建了不含有形成抗原抗体复合物表位的VP2核酸疫苗以及IL-12、IFN-γ细胞因子真核表达质粒,在体外细胞水平鉴定上述目的基因的表达情况。首先,以各克隆质粒为模板,PCR扩增获得ADV的VP2主要抗原表位M、鼠IL-12和IFN-γ的基因片段,连接至pVAX1载体,经酶切及测序鉴定后,确定构建正确;其次,将真核表达质粒转染入293T细胞,通过间接免疫荧光及Western Blot分析表达情况。结果显示:pVAX1-M可正常表达,并且目的蛋白可与ADV阳性血清结合,具有良好的反应原性。含细胞因子的真核表达质粒pVAX1-IL及pVAX1-IF转染293T细胞后,通过间接免疫荧光、Western Blot及ELISA分析证明,目的蛋白可在体外正常表达,且具有生物学活性。本研究可为水貂阿留申病核酸疫苗深入研究奠定基础。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 VP2 抗原抗体复合物 IL-12 IFN-Γ 核酸疫苗

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水貂阿留申病毒体外中和试验的研究

8

作者 吴威 聂金珍 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期334-338,共5页

首次应用乙醚处理的阿留申病毒（Ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＡＤＶ）Ｇ株（ＡＤＶ－Ｇ）与阿留申病毒阳性血清进行体外中和试验获得成功。试验证明，经乙醚处理后ＡＤＶ抗原决定簇充分暴露，使ＡＤＶ能有效地被特异性... 首次应用乙醚处理的阿留申病毒（Ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＡＤＶ）Ｇ株（ＡＤＶ－Ｇ）与阿留申病毒阳性血清进行体外中和试验获得成功。试验证明，经乙醚处理后ＡＤＶ抗原决定簇充分暴露，使ＡＤＶ能有效地被特异性抗体中和。水貂在感染ＡＤＶ１０天即可产生中和抗体，６０天中和抗体滴度高达１２８００。乙醚处理的ＡＤＶ－Ｇ可被兔抗ＡＤＶ结构蛋白标准阳性血清和纯化的抗ＡＤＶＦａｂ片段所中和，说明ＡＤＶ中和抗原决定簇主要位于结构蛋白上。比较了对流免疫电泳（ＣＩＥＰ）、免疫组织化学法（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｔｒｙ，ＩＨＣ）和γ－球蛋白含量测定的结果，证明中和试验是诊断阿留申病最敏感的方法。同时，阐明了各检测方法间的相关性。 展开更多

关键词 水貂 阿留申病毒 中和试验

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实验动物雪貂阿留申病病毒核酸检测方法的建立

9

作者 赵鹏 郭智 +1 位作者 佟巍 向志光 《实验动物科学》 2019年第6期5-8,共4页

目的建立阿留申病病毒PCR检测方法,以用于实验动物雪貂阿留申病病毒的检测。方法参考Genebank中阿留申病病毒核酸VP2基因序列设计一对引物,建立PCR检测方法,进行特异性、敏感性测试,并对实验雪貂粪便样品进行筛查。结果测序结果显示,使... 目的建立阿留申病病毒PCR检测方法,以用于实验动物雪貂阿留申病病毒的检测。方法参考Genebank中阿留申病病毒核酸VP2基因序列设计一对引物,建立PCR检测方法,进行特异性、敏感性测试,并对实验雪貂粪便样品进行筛查。结果测序结果显示,使用设计的引物可特异性地扩增获得阿留申病病毒的VP2中531 bp基因片段;在常见实验动物DNA病毒,小鼠多瘤病毒、小鼠细小病毒、犬细小病毒、疱疹病毒、鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠腺病毒中均未扩增出目的条带;以目的片段核酸为模板测试该方法敏感性,检测下限达到90.6 copy/μL。应用该方法对39份雪貂粪便样品进行检测,未检测出阿留申病病毒核酸阳性。结论本研究建立的方法具备一定的特异性和敏感性,可作为实验动物雪貂中阿留申病病毒感染病原筛查的方法。 展开更多

关键词 雪貂 阿留申病病毒 PCR 特异性 敏感性

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水貂阿留申病毒不同密度表位肽的串联表达研究

10

作者 秦飞燕 孙杰 +2 位作者 马凡舒 张蕾 闫喜军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期45-48,52,I0004,共6页

为比较含有水貂阿留申病毒(ADV)VP2蛋白不同表位密度重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位肽的编码序列进行2、4、6、8重复串联,得到4个表位串联体P2、P4、P6、P8,将其克隆到表达载体pET-30a(+)上,构建4个重组质粒,在大肠杆菌系统中诱导表... 为比较含有水貂阿留申病毒(ADV)VP2蛋白不同表位密度重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位肽的编码序列进行2、4、6、8重复串联,得到4个表位串联体P2、P4、P6、P8,将其克隆到表达载体pET-30a(+)上,构建4个重组质粒,在大肠杆菌系统中诱导表达;经Western Blot和对流免疫电泳(CIEP)鉴定其抗原性。采用间接ELISA方法对各重组蛋白进行抗原性分析比较。结果显示,成功表达的3个重组蛋白PP4、PP6、PP8均具有良好的抗原性;8段表位肽串联的重组蛋白PP8的抗原性最强。本研究制备的串联重组蛋白为建立ADV血清学诊断方法提供了科学依据。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 VP2蛋白 表位串联 抗原性

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水貂血液阿留申病病毒及其抗体的检测与分析 被引量：10

11

作者 邵西群 章秀婷 +3 位作者 岳志刚 荣敏 闫喜军 杨福合 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1893-1898,1905,共7页

为了确定鉴定阿留申病的适宜方法,尤其在阿留申病毒高感染貂场,本试验联合应用对流免疫电泳(CIEP)和PCR方法,对1个貂场连续2年于11~12月间检测1次貂血液的阿留申病毒及其抗体。用CIEP检测产仔(断乳成活数≥5只/窝)母貂及其仔貂。通过比... 为了确定鉴定阿留申病的适宜方法,尤其在阿留申病毒高感染貂场,本试验联合应用对流免疫电泳(CIEP)和PCR方法,对1个貂场连续2年于11~12月间检测1次貂血液的阿留申病毒及其抗体。用CIEP检测产仔(断乳成活数≥5只/窝)母貂及其仔貂。通过比较貂群的检测结果来分析2种检测方法鉴别阿留申病貂的适用性。2次检测结果显示各貂群CIEP阳性率为60%~97%,PCR阳性率为20%~63%,水貂的CIEP与PCR检测阳性结果不完全匹配。根据CIEP和PCR联合检测结果,貂群被分为4个群体CIEP+PCR+、CIEP-PCR-、CIEP-PCR+和CIEP+PCR-。2次检测的CIEP+PCR-貂在当年母貂中分别占48%、39%,在老母貂中分别占43%、77%,在公貂中分别占21%、51%。2次检测的CIEP+PCR-貂在貂群所占比例大,而CIEP-PCR-和CIEP-PCR+貂在貂群中所占比例小。公貂、老母貂经PCR阳性淘汰间隔1年再次检测,CIEP+PCR-貂在群体中比例明显提高。产仔2~4年龄母貂有72%~80%CIEP+貂,而其60日龄仔貂仅有11%~16%CIEP+貂。结果分析指出,中国阿留申病病毒高感染率养殖貂群不适宜单纯采用CIEP检测淘汰阳性貂净化阿留申病。发现每年11至12月用CIEP和PCR联合检测貂血样,易检出CIEP+PCR-的潜在阿留申病毒感染康复貂。 展开更多

关键词 水貂阿留申病病毒 抗体 对流免疫电泳(CIEP) PCR 血液

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水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：8

12

作者 张秀丽 于慧娟 +5 位作者 徐超 张桉潮 宋兴超 郝俊伟 赵家平 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期1-5,共5页

根据水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)基因序列(GenBank登录号:NC_001662.1)设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥102拷贝... 根据水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)基因序列(GenBank登录号:NC_001662.1)设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥102拷贝/μL具有良好的特异性和重复性。同时利用该方法对8份疑似AMDV血清进行检测,结果6份阳性,阳性率为75%。本研究为水貂阿留申病的鉴别诊断及净群根除奠定了技术基础。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 标准曲线

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水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白在疾病诊断与疫苗研发中的应用 被引量：8

13

作者 杨莘 易立 +2 位作者 王建科 罗彬 程世鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期69-72,共4页

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的一种持续感染性疾病,危害毛皮动物养殖业的发展。水貂阿留申病毒的致病特点、免疫机制等与其他细小病毒不同,存在自身的复杂性。目前,众多研究者寻求新的疫苗来预防水貂阿留申病的发生,但没有取得... 水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的一种持续感染性疾病,危害毛皮动物养殖业的发展。水貂阿留申病毒的致病特点、免疫机制等与其他细小病毒不同,存在自身的复杂性。目前,众多研究者寻求新的疫苗来预防水貂阿留申病的发生,但没有取得理想的效果。疾病诊断及疫苗研发对防控水貂阿留申病具有积极的意义。水貂阿留申病毒结构蛋白在病毒感染、机体免疫过程中发挥关键作用,而非结构蛋白在病毒转录与复制过程中有着重要作用,疾病的诊断和疫苗的研发均在二者的基础上展开。应用水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白建立新的水貂阿留申病毒诊断方法,研发新型基因工程疫苗,对控制水貂阿留申病的发生与传播,具有重要的意义。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 结构蛋白 非结构蛋白 诊断 疫苗研发

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水貂阿留申病病毒分子生物学研究进展 被引量：7

14

作者 李艳伍 张瑞 +1 位作者 姜平 贾赟 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第9期100-104,共5页

水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和... 水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用。该病毒的分子生物学诊断技术主要有核酸杂交技术、PCR和基因芯片检测技术。 展开更多

关键词 水貂阿留申病病毒 结构蛋白 非结构蛋白 分子生物学诊断技术

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水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：6

15

作者 杨瑞梅 张传美 +1 位作者 张洪亮 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2288-2293,共6页

为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒（AMDV）纳米PCR检测方法,根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物,对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,... 为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒（AMDV）纳米PCR检测方法,根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物,对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,此纳米PCR的最佳退火温度为51℃,普通PCR为55℃;加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8nmol·L-1,纳米PCR与普通PCR产物测序相似性大于99%。特异性检测表明该纳米PCR方法只扩增AMDV而不能扩增犬瘟热病毒和水貂肠炎细小病毒。在粪尿样品检测中该纳米PCR敏感性比普通PCR高10倍。检测40份临床样品,结果表明该方法比对流免疫电泳检测敏感性提高,从而为用粪、尿等低病毒样品检测水貂阿留申病提供了一种新的有效方法。 展开更多

关键词 水貂阿留申病病毒 纳米PCR 检测

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水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用 被引量：5

16

作者 马芹 王元智 +3 位作者 闫文卓 赵丽丽 陈洪岩 陆涛峰 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第12期97-101,共5页

目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病... 目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化。结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×10~4拷贝、MEV每微升3.02×10~4拷贝和CDV每微升1.72×10~5拷贝。临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品。 展开更多

关键词 多重PCR 水貂阿留申病毒 水貂肠炎病毒 犬瘟热病毒

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水貂阿留申病毒核酸标准物质的研制 被引量：1

17

作者 王春霞 商金源 +9 位作者 吴顺 闫曼平 冯二凯 罗国良 易立 叶京飞 赵宗正 高华 程悦宁 王振军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期26-33,共8页

为研制均匀、稳定的水貂阿留申病毒(AMDV)核酸标准物质,选择水貂阿留申病毒AMDV-G株接种CRFK细胞进行病毒繁殖,经灭活后,制备水貂阿留申病毒核酸检测标准物质。利用微滴式数字PCR方法对制备的核酸标准物质进行均匀性检验、稳定性评估及... 为研制均匀、稳定的水貂阿留申病毒(AMDV)核酸标准物质,选择水貂阿留申病毒AMDV-G株接种CRFK细胞进行病毒繁殖,经灭活后,制备水貂阿留申病毒核酸检测标准物质。利用微滴式数字PCR方法对制备的核酸标准物质进行均匀性检验、稳定性评估及联合8家实验室进行合作定值。均匀性检验结果:F=1.56<Fa(F(0.05,14,30)=2.04),表明本标准物质组内和组间无统计学差异。稳定性评估结果表明:本标准物质在-20℃环境中可稳定保存6个月、在4℃环境中可稳定保存9 d、在-20℃环境下可稳定冻融4次。经8家有实验室检测资质认证的实验室合作定值及不确定度评定,最后得到本标准物质的定值为1.05×10^(4)copies/μL,扩展不确定度为0.14×10^(4)copies/μL。本标准物质定值准确、均匀性好、量值稳定,可用于水貂阿留申病毒核酸检测等相关实验,有利于水貂阿留申病的诊断和防控。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 核酸标准物质 微滴式数字PCR

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水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用 被引量：1

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作者 蔡晓庆 姜世金 +2 位作者 张金叶 孙圣福 王贵升 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期164-170,共7页

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为... 为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板,通过各反应条件的优化,初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板,按照本研究建立的ddPCR方法检测,评估其特异性;将1.43×10^(7)拷贝/μL~1.43×10^(0)拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测,评估该方法的敏感性;分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验,以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示,该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示,该方法仅可检测到AMDV和质粒标准品,而其他相关病毒均为阴性结果。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.43拷贝/μL,qPCR对质粒标准品的检测限为1.43×10^(2)拷贝/μL,前者比后者的敏感性高100倍。重复性试验结果,批内和批间重复性试验的变异系数均小于3%。对采集的70份病貂肝脏、脾、肾脏、环境拭子、肛拭子样品进行ddPCR和qPCR检测,结果显示,ddPCR对AMDV的检出率为24.28%(17/70);qPCR的检出率为15.7%(11/70),二者的阳性符合率为64.7%,阴性符合率为89.83%,总符合率为91.42%。上述结果表明,本研究建立的ddPCR方法特异性强、敏感性高和重复性好,可以检测各种临床样品及含量极低样品中的AMDV,为AMDV早期感染的检测、流行病学调查及AMD的防控提供有力技术手段。 展开更多

关键词 微滴式数字PCR 检测 水貂阿留申病毒

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水貂阿留申病诊断技术研究进展 被引量：3

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作者 韦韬 吴艳虹 +3 位作者 丛丽 赵永强 马瑞芳 邵西群 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期78-82,共5页

水貂阿留申病是水貂养殖业的重要疫病,目前无疫苗预防,主要通过发展诊断技术,淘汰感染貂防控该病。论文总结了在貂场应用的基因与抗体检测技术,基因检测具有高灵敏度和特异性,能够检测到动物带毒感染,不同类型的基因检测技术对变异性强... 水貂阿留申病是水貂养殖业的重要疫病,目前无疫苗预防,主要通过发展诊断技术,淘汰感染貂防控该病。论文总结了在貂场应用的基因与抗体检测技术,基因检测具有高灵敏度和特异性,能够检测到动物带毒感染,不同类型的基因检测技术对变异性强的阿留申病毒检测各有所长;抗体检测是水貂阿留申病的主要检测方式,研究者不断创新和改进原有技术,趋向对阿留申病的规模化精准检测,但单一的抗体检测方法淘汰感染貂具有局限性。论文通过对两类检测技术分析,建议采用基因与抗体的联合检测方法,从感染貂群中区分耐受貂或抗性貂,期望为国内高感染率貂场的检测和选种提供参考。 展开更多

关键词 水貂阿留申病 阿留申病毒 诊断

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水貂阿留申病毒的分子生物学研究进展 被引量：4

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作者 刘晓 刁燕 杜锐 《经济动物学报》 CAS 2010年第1期52-55,共4页

从水貂阿留申病毒(ADV)基因组特点出发,就阿留申病毒的分子生物学研究进展作以简单综述。

关键词 水貂阿留申病毒 分子生物学 研究进展

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