隐丹参酮对Akt2基因缺失雌鼠生殖功能及其效应机制的影响 被引量：8

1

作者 王宇 胡敏 +5 位作者 张跃辉 王馨悦 韩亚光 丛晶 李威 吴效科 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期577-582,共6页

目的评估隐丹参酮对Akt2基因缺失雌鼠生殖功能的影响并探讨其分子机制。方法将12周龄Akt2基因缺失(Akt2^(-/-))雌鼠50只按不同干预方法分为Akt2^(-/-)对照组(简称Akt KO组,25只)及Akt2^(-/-)治疗组(简称Akt KO-cry组,25只),并将与其同... 目的评估隐丹参酮对Akt2基因缺失雌鼠生殖功能的影响并探讨其分子机制。方法将12周龄Akt2基因缺失(Akt2^(-/-))雌鼠50只按不同干预方法分为Akt2^(-/-)对照组(简称Akt KO组,25只)及Akt2^(-/-)治疗组(简称Akt KO-cry组,25只),并将与其同窝出生的具有完整Akt2基因(Akt2^(+/+))雌鼠25只设为Akt2^(+/+)对照组(简称WT组)。Akt KO-cry组给予隐丹参酮连续2周灌胃治疗,而Akt KO组和WT组则给予等体积生理盐水灌胃。各组治疗结束后均进行口服葡萄糖耐量试验,随后进行每日阴道涂片观察动情周期变化情况,于动情间期进行取材并称重(双侧卵巢、双侧子宫、子宫旁脂肪及腹股沟脂肪)。放射免疫法测定各组小鼠血清17羟孕酮(17α-hydroxy progesterone,17α-OHP)及胰岛素(insulin,INS)水平。RT-PCR法检测类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute-regulatory protein,Star)、胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side-chain cleavage enzyme,Cyp11a1)、3β羟类固醇脱氢酶(3beta-hydroxy steroiddehy drogenase,3β-HSD)及17α-羟化酶(17alpha-hydroxylase,Cyp17a1)mRNA的表达水平。结果 Akt KO组17α-OHP、INS、糖后30 min、糖后60 min血糖及卵巢组织中Star、Cyp11a1、3β-HSD及Cyp17a1 mRNA表达水平均显著高于WT组(P<0.05)。隐丹参酮治疗后,与Akt KO组比较,Akt KO-cry组子宫旁脂肪重量、17α-OHP、INS、糖后60 min血糖、Star及3β-HSD mRNA表达的水平均显著降低(P<0.05)。结论 Akt2基因缺失导致雄激素水平升高及糖代谢异常,分子机制为雄激素合成关键酶的表达升高。隐丹参酮可显著降低17α-OHP、INS及血糖水平,作用机制为降调雄激素合成关键酶的表达,而其改善糖代谢及INS增敏作用的分子机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 隐丹参酮 akt2基因 雄激素 胰岛素

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AKT2 3'-UTR荧光素酶报告基因载体构建及与miRNA-625靶向关系验证 被引量：3

2

作者 魏斌 邓霞 +1 位作者 卞秀娟 钱粉红 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2016年第3期204-207,共4页

目的:通过构建荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-625与AKT2基因的靶向调控关系。方法:通过生物信息学软件预测AKT2为miRNA-625靶基因;构建野生型AKT2基因3'端非翻译区荧光素酶报告基因载体及miRNA-625靶序列突变型载体;将HEK-293... 目的:通过构建荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-625与AKT2基因的靶向调控关系。方法:通过生物信息学软件预测AKT2为miRNA-625靶基因;构建野生型AKT2基因3'端非翻译区荧光素酶报告基因载体及miRNA-625靶序列突变型载体;将HEK-293T细胞株随机分为野生型+miRNA-625组、野生型+miRNA内参组、突变型+miRNA-625组、突变型+miRNA内参组;Lipofectamine 2000转染相应的质粒与miRNA,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:构建野生型及突变型荧光素酶报告载体鉴定正确,双荧光素酶报告基因检测系统显示野生型+miRNA-625组相对荧光素酶活性较野生型+miRNA内参组明显降低(t=14.176 4,P<0.05)。结论:miRNA-625对野生型AKT2重组质粒荧光活性有明显的抑制作用,证实miRNA-625能够靶向调控AKT2基因。 展开更多

关键词 miRNA-625 akt2基因 荧光素酶报告基因 3'端非翻译区

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miR-137调节AKT2对内皮细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

3

作者 徐泽民 刘勇 +2 位作者 沈娜 方涛 田凤石 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2019年第10期975-979,共5页

目的探讨miR-137对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、凋亡的影响及机制.方法将HUVECs细胞分为低糖组(用5.5 mmol/L的葡萄糖处理)、高糖组(用33.36 mmol/L的葡萄糖处理)、anti-NC(转染an... 目的探讨miR-137对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、凋亡的影响及机制.方法将HUVECs细胞分为低糖组(用5.5 mmol/L的葡萄糖处理)、高糖组(用33.36 mmol/L的葡萄糖处理)、anti-NC(转染anti-NC后用33.36 mmol/L葡萄糖处理细胞)和anti-miR-137组(转染miR-137 inhibitor后用33.36 mmol/L萄糖处理细胞后),48 h后用qRT-PCR检测细胞miR-137表达;分别用CCK-8法及流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡率.通过双荧光报告基因检测系统及过表达或抑制miR-137表达后AKT2蛋白表达验证miR-137与AKT2的靶向关系.结果高糖可明显上调HUVECs细胞miR-137 mRNA的表达,细胞转染miR-137 inhibitor后miR-137表达明显减弱(P<0.05).高糖可明显抑制HUVECs细胞增殖,诱导细胞凋亡,而抑制miR-137表达可减弱高糖对HUVECs细胞增殖抑制和凋亡促进作用(P<0.05).抑制AKT2表达可减弱miR-137 inhibitor对HUVECs细胞增殖促进和凋亡抑制作用(P<0.05).结论抑制miR-137基因表达可减弱高糖诱导的HUVECs增殖抑制和凋亡促进作用,其机制与激活AKT2表达有关. 展开更多

关键词 血管内皮细胞 高糖 miR-137 akt2基因 凋亡

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人脑胶质瘤细胞中β-catenin/Tcf-4转录对AKT2基因表达的调控及对其生物学行为影响 被引量：2

4

作者 冯义伶 穆海玉 曲雅静 《医学分子生物学杂志》 CAS 2018年第6期417-421,共5页

目的研究人脑胶质瘤细胞中β-catenin/Tcf4转录对AKT2基因表达的调控及对其生物学行为的影响。方法通过荧光素酶实验以及CHIP-PCR实验确立砰4(属于AKT2启动子区)的结合活性以及具体结合位点。使用阿司匹林恢复AKT2基因的表达以及阻断B-c... 目的研究人脑胶质瘤细胞中β-catenin/Tcf4转录对AKT2基因表达的调控及对其生物学行为的影响。方法通过荧光素酶实验以及CHIP-PCR实验确立砰4(属于AKT2启动子区)的结合活性以及具体结合位点。使用阿司匹林恢复AKT2基因的表达以及阻断B-catenin/Tcf-4转录复合物活性,之后使用流式细胞术检测细胞的周期,最后使用Transwell实验检测细胞侵袭能力以及Annexin V检测细胞的凋亡情况。结果AKT2的引物1和引物2之间的某个区域存在结合位点,能够与Tcf-4直接结合进而调控AKT2的转录与表达:Tcf-4主要是通过位点2而调控AKT2基因的转录与表达;AKT2能恢复ASA引起的细胞周期的阻滞,使细胞进入S期;Transwell结果显示,对照组细胞的侵袭力较ASA组细胞的侵袭力高,且ASA组细胞的侵袭力较ASA+AKT2组低。结论B-eatenin/Tcf-4转录复合物以直接转录的方式调控AKT2的表达,进而促进胶质瘤细胞的增殖能力以及侵袭能力。 展开更多

关键词 胶质瘤细胞 调控 akt2基因

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胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对化疗药物替尼泊苷敏感性的影响 被引量：1

5

作者 崔勇 林靖 +5 位作者 王麒 王君玉 董艳 胡国汉 骆纯 卢亦成 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2013年第11期511-513,共3页

目的探讨脑胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对替尼泊苷(VM-26)敏感性的影响。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U87细胞,作为实验组;转染GFP-shRNA的U87细胞作为阴性对照组,未转染的U87细胞作为空白对照组。应用RT-PCR、... 目的探讨脑胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对替尼泊苷(VM-26)敏感性的影响。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U87细胞,作为实验组;转染GFP-shRNA的U87细胞作为阴性对照组,未转染的U87细胞作为空白对照组。应用RT-PCR、Western blot检测3组U87细胞中AKT2 mRNA和蛋白的表达变化。应用MTT法检测3组U87细胞对VM-26敏感性的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,实验组转染后的U87细胞AKT2 mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0.01)。实验组VM-26对U87细胞的半数抑制量(IC50)为(6.46±0.42)μg/ml,阴性对照组为(1.16±0.25)μg/ml,空白对照组为(1.15±0.22)μg/ml,实验组与两对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人脑胶质瘤U87细胞株对化疗药物VM-26的敏感性。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 akt2基因 替尼泊苷

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AKT2在胶质瘤细胞中替莫唑胺化疗耐药的作用机制研究 被引量：1

6

作者 崔勇 张风林 +3 位作者 应奇 胡国汉 骆纯 卢亦成 《临床神经外科杂志》 CAS 2017年第1期26-29,共4页

目的研究AKT2基因在U251细胞株中对替莫唑胺化疗耐药中的作用机制。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U251细胞。应用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测RNA干扰AKT2后U251细胞对替莫唑胺敏感性的变化情况。流式细胞仪测定沉... 目的研究AKT2基因在U251细胞株中对替莫唑胺化疗耐药中的作用机制。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U251细胞。应用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测RNA干扰AKT2后U251细胞对替莫唑胺敏感性的变化情况。流式细胞仪测定沉默AKT2基因表达后各组细胞凋亡的改变情况。AKT2-shRNA干扰胶质母细胞瘤细胞株U251的AKT2表达,进而采用Western blot实验方法,来进一步分析和评价AKT2与MDR-1、MRP-1、MGMT、bcl-2、caspase-3、P53等相关蛋白表达情况和相互调控关系。结果 CCK8法检测结果计算替莫唑胺对U251细胞的半数细胞抑制浓度(IC50)从U251空白对照组的(39.72±2.41)μg/ml、阴性对照组的(39.43±2.24)μg/ml降到(27.23±1.93)μg/ml,AKT2干扰组U251细胞对替莫唑胺药物的IC50值显著降低。流式细胞仪检测凋亡实验显示,与空白对照的U251细胞[调亡细胞(16.95±1.32)%]和转染阴性对照的U251胶质瘤细胞[调亡细胞(17.93±2.29)%]相比,转染AKT2shRNA的U251细胞中早期、晚期调亡细胞明显增加,总调亡细胞达(38.16±4.83)%,干扰组凋亡水平有显著性增强(P<0.05)。AKT2-shRNA干扰U251后其凋亡明显增加,Real-time PCR和蛋白印迹实验结果提示bcl-2、survivin、MGMT明显下调,而caspase-3、PTEN、P53、beclin-1明显上调。结论 AKT2可能参与调控bcl-2、caspase-3、P53、survivin、beclin1等凋亡自噬相关蛋白及DNA损伤修复蛋白MGMT的表达,从而介导胶质母细胞瘤细胞株U251对替莫唑胺化疗抵抗。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 akt2基因 替莫唑胺

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AKT2基因突变致低血糖症一例并文献复习 被引量：1

7

作者 杜牧 宋福英 陈晓波 《中华全科医师杂志》 2021年第11期1171-1175,共5页

报道首都儿科研究所附属儿童医院内分泌科诊治的1例低胰岛素低酮低脂肪酸性低血糖症患者临床资料及基因检测结果,并以“低血糖症”“AKT2基因”及“hypoglycemia”为关键词,对万方数据知识服务平台、中国知网数据库及PubMed检索1980年1... 报道首都儿科研究所附属儿童医院内分泌科诊治的1例低胰岛素低酮低脂肪酸性低血糖症患者临床资料及基因检测结果,并以“低血糖症”“AKT2基因”及“hypoglycemia”为关键词,对万方数据知识服务平台、中国知网数据库及PubMed检索1980年1月至2021年3月收录的论文。本例患者女,1岁3个月,以低血糖为主要表现。空腹6 h血糖2.4 mmol/L,面部及肢体左右不对称,低血糖发作时D-3羟丁酸、尿酮体、游离脂肪酸水平均降低,升血糖激素升高,胰岛素<0.2μIU/ml。全外显子基因检测显示患者具有AKT2基因c.49G>A(p.E17K)杂合突变,为嵌合体,诊断为AKT2基因突变所致低胰岛素低酮低游离脂肪酸性低血糖。予以高碳水化合物饮食及睡前补充生玉米淀粉,治疗1年6个月后患者生长发育均正常,低血糖发作次数减少,双侧肢体不对称好转。文献共检索到国外确诊病例5例,国内无AKT2基因所致低血糖症病例报道。所报道患者临床表现类似先天性高胰岛素血症性低血糖症,但低血糖发作时胰岛素水平不高,可伴偏侧肢体肥大。提示以低血糖就诊的患者,如临床表现类似先天性高胰岛素血症性低血糖症,但有胰岛素水平降低及偏侧肢体肥大表现需注意AKT2基因突变。 展开更多

关键词 低血糖症 面部不对称 先天性高胰岛素血症 akt2基因 偏侧肢体肥大

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AKT2-siRNA对肺癌细胞NCI-H446沉默作用的研究

8

作者 曹婷婷 张茂林 +2 位作者 赵国强 卢滨 王静 《中国肺癌杂志》 CAS 2008年第4期505-508,共4页

背景与目的肺癌是目前发病率较高的恶性肿瘤之一,其病死率居恶性肿瘤的首位,随着分子生物学研究的不断进展,人们越来越清楚地认识到肺癌的发生和发展是一个多基因参与的多步骤的过程,RNAi作为基因治疗中一种新的效率高、特异性强的治疗... 背景与目的肺癌是目前发病率较高的恶性肿瘤之一,其病死率居恶性肿瘤的首位,随着分子生物学研究的不断进展,人们越来越清楚地认识到肺癌的发生和发展是一个多基因参与的多步骤的过程,RNAi作为基因治疗中一种新的效率高、特异性强的治疗手段愈来愈多地受到人们的重视。本研究应用RNA干扰(RNAi)技术,以AKT2为靶基因,设计并构建重组真核表达载体,转染肺癌细胞NCI-H446,观察其对AKT2基因的沉默作用。方法利用已知AKT2的mRNA基因序列设计并合成具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列及一条无关对照序列,与pGEM-TEasy载体连接后以T7和SP6为引物进行PCR鉴定,对表达载体pRNAT-U6.2及阳性克隆产物进行双酶切,将得到的基因及线性化的表达载体再次连接,利用PCR的方法进行重组体的筛选鉴定及测序分析,利用脂质体转染肺癌细胞NCI-H446,RT-PCR检测AKT2-mRNA沉默效果。结果将合成的DNA序列克隆到表达载体上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染肺癌细胞NCI-H446后,AKT2-mRNA表达明显降低。结论成功构建的靶向AKT2-RNA的干扰重组表达载体可有效抑制肺癌细胞NCI-H446mRNA的表达。 展开更多

关键词 akt2基因 RNA干扰 肺肿瘤

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两种配制胶对单链构象多态性筛查AKT2基因突变的影响

9

作者 张庆英 成文翔 《汕头大学医学院学报》 2007年第2期120-121,125,共3页

目的:观察单链构象多态性(SSCP)筛查AKT2基因突变时凝胶配制的不同对筛查结果的影响。方法:采用PCR扩增AKT2基因第6外显子片段,分别采用添加体积分数5%的甘油和不加甘油的非变性聚丙烯酰胺胶进行电泳,银染后观察结果,选取阳性样本测序... 目的:观察单链构象多态性(SSCP)筛查AKT2基因突变时凝胶配制的不同对筛查结果的影响。方法:采用PCR扩增AKT2基因第6外显子片段,分别采用添加体积分数5%的甘油和不加甘油的非变性聚丙烯酰胺胶进行电泳,银染后观察结果,选取阳性样本测序验证。结果:单链DNA在两种胶中呈现出不同的带型,经测序验证后突变检出率有差别。结论:加入甘油的聚丙烯酰胺胶降低了AKT2基因第6外显子的突变检出率。 展开更多

关键词 单链构象多态性 甘油 akt2基因 突变

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靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序

10

作者 曹婷婷 张茂林 +2 位作者 赵国强 卢滨 王静 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第28期19-21,共3页

目的利用RNA干扰技术,以Akt2为靶基因,设计并构建重组表达载体,并进行测序鉴定。方法利用GenBank中已知Akt2的mRNA基因序列设计具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列,经退火形成互补双链,与pGEM-T Easy载体进行连接,经蓝白筛选后以T7和SP6... 目的利用RNA干扰技术,以Akt2为靶基因,设计并构建重组表达载体,并进行测序鉴定。方法利用GenBank中已知Akt2的mRNA基因序列设计具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列,经退火形成互补双链,与pGEM-T Easy载体进行连接,经蓝白筛选后以T7和SP6为引物进行PCR鉴定,对表达载体pRNAT-U6.2及亚克隆产物进行双酶切,将得到的基因及线性化的表达载体再次连接,利用PCR方法进行重组体的筛选鉴定并进行测序分析。结果将合成的DNA序列克隆到表达载体上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列。结论Akt2靶向RNA干扰重组表达载体构建成功。 展开更多

关键词 akt2基因 RNA干扰 重组表达载体

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雌性Akt2基因缺失小鼠生殖表型研究 被引量：2

11

作者 张跃辉 郭文艳 +1 位作者 王娜梅 吴效科 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期65-69,共5页

通过对雌性Akt2基因敲除纯合子小鼠(Akt2(-/-))及野生型小鼠(Akt2(+/+))基础指标、大体形态学指标、血清糖脂水平和性激素水平等方面的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢和卵巢功能影响。雌性Akt2(+/+)及Akt2(-/-)小鼠各16只,行口服糖耐... 通过对雌性Akt2基因敲除纯合子小鼠(Akt2(-/-))及野生型小鼠(Akt2(+/+))基础指标、大体形态学指标、血清糖脂水平和性激素水平等方面的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢和卵巢功能影响。雌性Akt2(+/+)及Akt2(-/-)小鼠各16只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2mg/kg),阴道涂片监测动情周期,于动情间期进行动力学实验,将纯合子和野生型小鼠分别随机分为空白组和刺激组2组,刺激组予HMG(人绝经期尿促性激素)(0.5IU/g)刺激2h,空白组予等体积的生理盐水刺激2h,检测各组小鼠体重、体内脂肪重量、血脂、空腹胰岛素水平和生殖激素水平,卵巢常规病理检测各组小鼠卵巢形态学变化。结果发现,同野生型小鼠相比,纯合子小鼠动情周期显著延长(P<0.05),随机血糖、0h血糖、2h血糖、空腹胰岛素水平和HOMA指数均显著升高(P<0.05),而血清甘油三酯(TG)水平则显著降低(P<0.05);性激素检测发现纯合子小鼠血清17羟孕酮(17-OHP)、雌二醇(E2)、△17-OHP、△E2均显著升高。综上,本文认为Akt2基因不仅可以影响机体糖脂代谢,同时也影响卵巢功能,说明胰岛素调节糖代谢的关键信号分子对卵巢生殖功能同样具有重要的调节作用。 展开更多

关键词 akt2基因敲除小鼠 动物模型 卵巢 生殖 多囊卵巢综合征

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雄性Akt2基因缺失小鼠生殖表型研究 被引量：1

12

作者 张跃辉 吕占强 +2 位作者 王娜梅 侯丽辉 吴效科 《生殖医学杂志》 CAS 2011年第4期319-323,共5页

目的通过对雄性Akt2基因敲除纯合子小鼠(Akt2—/—)及野生型小鼠(Akt2+/+)基础指标、血清糖脂及性激素水平的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢及睾丸功能的影响。方法雄性Akt2+/+及Akt2—/—小鼠各15只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2 mg/kg)... 目的通过对雄性Akt2基因敲除纯合子小鼠(Akt2—/—)及野生型小鼠(Akt2+/+)基础指标、血清糖脂及性激素水平的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢及睾丸功能的影响。方法雄性Akt2+/+及Akt2—/—小鼠各15只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2 mg/kg),予动力学实验,将纯合子和野生型小鼠分别随机分为2组,空白组和刺激组,刺激组予人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激4h,空白组予等体积的生理盐水刺激4h,检测各组小鼠体重、体内脂肪重量、血脂、空腹胰岛素及生殖激素水平。结果 Akt2—/—小鼠同Akt2+/+小鼠相比,餐后随机血糖、0h、1h血糖均显著升高(P<0.05);睾丸重量显著增加(P<0.01)。性激素检测发现Akt2—/—小鼠血清雄烯二酮(A2)(P<0.01)和睾酮(T)(P<0.05)显著升高;hCG刺激后,Akt2—/—与Akt2+/+小鼠的17-羟孕酮(17-OHP)、A2和T均显著升高,但Akt2+/+小鼠的T升高更明显。结论 Akt2基因不仅影响糖代谢,同时影响睾丸功能,说明胰岛素调节糖代谢的关键信号分子可能对睾丸生殖功能同样具有重要的调节作用。hCG刺激后,同Akt2+/+小鼠相比,Akt2—/—小鼠A2和T升高的幅度较小,说明Akt2基因缺失使雄激素合成亢进,但降低了睾丸对hCG的敏感性。 展开更多

关键词 akt2基因敲除小鼠 血糖 胰岛素 睾丸功能 雄激素

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Akt2基因缺陷与2型糖尿病

13

作者 静雨 《国外医学情报》 2002年第11期44-44,共1页

美国的研究人员近日报道说,缺乏Akt2(磷酸肌醇-依赖型-丝氨酸蛋白激酶)基因的小鼠出现一种类似于2型糖尿病的症状,这表明Akt2在胰岛素信号通道中起作用。

关键词 胰岛素 信号通道 akt2基因缺陷 2型糖尿病

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