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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬 被引量:5
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作者 安志远 丁文一 +1 位作者 郑春明 黄骁舾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2267-2270,2276,共5页
目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blo... 目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测Omp A对RAW264. 7细胞自噬的影响。结果:Omp A可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高Omp A引起的LC3B-II表达升高。结论:鲍曼不动杆菌Omp A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264. 7细胞自噬。这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白A RAW264.7细胞 自噬 akt/mtor/p70S6k信号通路
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利多卡因通过调控miR-520a/AKT/mTOR/p70S6K通路对SH-SY5Y细胞自噬的影响
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作者 张雯 马琳 +1 位作者 李瑞轩 徐桂萍 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第1期7-13,共7页
目的探讨利多卡因通过调控自噬对神经毒性的影响及相关分子机制。方法培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,MTT实验和乳酸脱氢酶(LDH)测定检测利多卡因对SH-SY5Y细胞活力和毒性的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-520a的相对表达;West... 目的探讨利多卡因通过调控自噬对神经毒性的影响及相关分子机制。方法培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,MTT实验和乳酸脱氢酶(LDH)测定检测利多卡因对SH-SY5Y细胞活力和毒性的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-520a的相对表达;Western blot检测利多卡因对AKT/mTOR/p70S6K通路相关蛋白和自噬相关蛋白的影响;细胞免疫荧光染色评估LC3B的表达;生物信息学预测AKT1是miR-520a的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a和AKT1之间的相互作用。结果与对照组比较,SH-SY5Y细胞活力受到明显的抑制,且呈时间和剂量依赖性,LDH的释放量随利多卡因剂量增多而增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低,LC3B的荧光强度显著增强,miR-520a的表达显著增加,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-520ainhibitor组WT-AKT1的荧光素酶活性显著升高(P<0.05),而MUT-AKT1的荧光素酶活性没有变化(P>0.05)。与利多卡因组+NC inhibitor组比较,利多卡因+miR-520a inhibitor组SH-SY5Y细胞中miR-520a水平降低,LDH的释放量显著降低,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著降低,p62蛋白表达显著升高,LC3B的荧光强度显著降低(P<0.05)。结论利多卡因通过上调miR-520a的表达和抑制AKT/mTOR/p70S6K信号通路促进神经细胞自噬。 展开更多
关键词 利多卡因 神经毒性 miR-520a akt/mtor/p70S6k信号通路 自噬
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干扰小RNA沉默CAV1表达对人绒毛膜癌JEG-3细胞侵袭、迁移能力的影响及其作用机制研究 被引量:2
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作者 陈静鸽 周斌 +5 位作者 王川红 程玉敏 周新华 李新敏 王陈英 乔文菲 《癌症进展》 2018年第5期571-574,583,共5页
目的探究干扰小RNA(si RNA)沉默小窝蛋白-1(CAV1)基因表达对人绒毛膜癌JEG-3细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法将人绒毛膜癌JEG-3细胞分为对照组(不进行转染)、阴性组(转染si RNA-NC)和si RNA-CAV1组(转染si RNA-CAV1)... 目的探究干扰小RNA(si RNA)沉默小窝蛋白-1(CAV1)基因表达对人绒毛膜癌JEG-3细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法将人绒毛膜癌JEG-3细胞分为对照组(不进行转染)、阴性组(转染si RNA-NC)和si RNA-CAV1组(转染si RNA-CAV1)。Transwell法检测下调CAV1表达对细胞侵袭、迁移能力的影响;实时定量PCR(q RT-PCR)检测转染细胞中CAV1 m RNA的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CAV1、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(MTOR)、核糖体p70S6激酶(p70S6K)、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化MTOR(p-MTOR)、磷酸化p70S6K(p-p70S6K)蛋白的表达水平。结果 si RNA-CAV1组JEG-3细胞中CAV1 m RNA和蛋白的相对表达量均低于对照组(P﹤0.05);si RNA-CAV1组JEG-3细胞的侵袭数目、迁移数目均低于对照组(P﹤0.05);si RNA-CAV1组JEG-3细胞中AKT、MTOR、p70S6K以及磷酸化水平均低于对照组(P﹤0.05)。结论沉默CAV1表达可以抑制人绒毛膜癌JEG-3细胞的侵袭和迁移能力,该作用与AKT/MTOR/p70S6K信号通路有关。 展开更多
关键词 小窝蛋白-1 绒毛膜癌 侵袭 迁移 akt/mtor/p70S6k信号通路
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丹酚酸对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护 被引量:1
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作者 沈芸 张占丰 +1 位作者 王红灵 赵冀安 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第10期1111-1118,共8页
目的:分析丹酚酸通过AKT/mTOR/p70S6K信号通路对骨骼肌缺血再灌注损伤小鼠细胞自噬及凋亡的影响。方法:选取SPF级雄性大鼠45只,随机数字表法分为假手术组、模型组、丹酚酸组,模型组、丹酚酸组制备骨骼肌缺血再灌注损伤模型,丹酚酸组分... 目的:分析丹酚酸通过AKT/mTOR/p70S6K信号通路对骨骼肌缺血再灌注损伤小鼠细胞自噬及凋亡的影响。方法:选取SPF级雄性大鼠45只,随机数字表法分为假手术组、模型组、丹酚酸组,模型组、丹酚酸组制备骨骼肌缺血再灌注损伤模型,丹酚酸组分别在开始实验前72 h、48h、24 h及再灌注前15 min,腹腔注射剂量为30mg/kg的丹酚酸溶液1 mL,假手术组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水1 mL。观察各组大鼠腓肠肌组织病理形态,血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,腓肠肌组织Akt、p-Akt、p70S6K、p-p70S6K、mTOR及p-mTOR蛋白表达及腓肠肌组织内Bcl-2、Bax表达。结果:再灌注0 h、4 h及24 h时模型组大鼠腓肠肌湿/干重(W/D)比值较假手术组升高,丹酚酸组腓肠肌W/D比值较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);再灌注0 h、4 h及24 h时模型组大鼠血清LDH、CK含量较假手术组升高,丹酚酸组大鼠血清LDH、CK含量较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠腓肠肌Akt蛋白表达较假手术组降低,p-Akt蛋白表达较假手术组升高;丹酚酸组大鼠Akt、p-Akt、p70S6K、p-p70S6K、mTOR及pmTOR蛋白表达较模型组升高,差异有统计学意义(P<0.05);光密度值(IOD)量化腓肠肌细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达,模型组Bcl-2 IOD数值、Bcl-2/Bax比值较假手术组降低,Bax IOD数值较假手术组增加;丹酚酸组Bcl-2 IOD数值、Bcl-2/Bax比值较模型组升高,Bax IOD数值较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丹酚酸可维持骨骼肌缺血再灌注损伤大鼠骨骼细胞Bax与Bcl-2动态平衡,抑制细胞凋亡,其作用机制可能和激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路有关。 展开更多
关键词 骨骼肌缺血再灌注损伤 akt/mtor/p70S6k信号通路 丹酚酸 细胞凋亡
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育亨宾对肾移植中肾间质纤维化的抑制作用及其机制
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作者 张瑞琴 吴东娟 +3 位作者 韩士超 李转 陈利娟 贺海玲 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第7期863-870,共8页
目的探索育亨宾对肾移植大鼠肾间质纤维化的抑制作用及其机制。方法在F344大鼠(供体)和Lewis大鼠(受体)之间进行原位左肾移植。对照组大鼠行右肾切除,其他组大鼠为肾移植大鼠。肾移植后,将48只Lewis大鼠随机分为4组:对照组、肾移植组、0... 目的探索育亨宾对肾移植大鼠肾间质纤维化的抑制作用及其机制。方法在F344大鼠(供体)和Lewis大鼠(受体)之间进行原位左肾移植。对照组大鼠行右肾切除,其他组大鼠为肾移植大鼠。肾移植后,将48只Lewis大鼠随机分为4组:对照组、肾移植组、0.1 mg/kg育亨宾治疗组(低剂量组)和0.5 mg/kg育亨宾治疗组(高剂量组)。从肾移植后的第1天起,育亨宾治疗组每周2次大鼠腹腔分别注射0.1 mg/kg和0.5 mg/kg的育亨宾(2 ml),对照组和肾移植组大鼠腹腔注射2 ml的0.9%生理盐水,共治疗16周。通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson三色染色检测肾形态和纤维化。通过肌氨酸氧化酶法检测大鼠血清肌酐(Scr),通过二乙酰肟比色法检测血尿素氮(BUN),通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)。通过免疫组化和Western blotting检测肾组织中α-SMA、E-cadherin、Smurf1、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、P70S6K和p-P70S6K的表达。结果肾移植组大鼠肾小管扩张、上皮萎缩、间质炎性细胞浸润、间质间隙明显扩张,胶原沉积明显。低剂量组和高剂量组大鼠的肾组织形态较肾移植组明显改善。与肾移植组比较,低剂量组和高剂量组大鼠肾组织纤维化面积明显减小(P<0.05),血清TNF-α和TGF-β1水平明显降低(P<0.05),Scr和BUN水平明显降低(P<0.05)。与肾移植组比较,低剂量组和高剂量组大鼠α-SMA和Smurf1的蛋白表达水平降低(P<0.05),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR和p-P70S6K/P70S6K水平降低(P<0.05),而E-cadherin的蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论育亨宾可改善肾移植大鼠的肾形态和功能,并减轻肾纤维化,育亨宾对移植肾的保护作用可能通过Smurf1和Akt-mTOR-P70S6K信号通路来介导。 展开更多
关键词 育亨宾 肾移植 肾间质纤维化 Smurf1 akt-mtor-p70S6k信号通路
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木瓜总三萜通过调节miR-10a和PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胃癌细胞凋亡 被引量:16
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作者 冯旻璐 许海燕 +4 位作者 贺海波 张媛媛 江伟杰 覃慧林 张继红 《中药材》 CAS 北大核心 2019年第12期2929-2935,共7页
目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-... 目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-1法检测细胞活性和线粒体活性,实时定量PCR法检测miR-10a mRNA表达,Western blot法检测HGC-27细胞中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达及其磷酸化。结果:木瓜总三萜可显著降低HGC-27细胞活性和线粒体活性,促进细胞凋亡;上调miR-10a mRNA表达,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达及降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值(P<0.05)。结论:木瓜总三萜具有抑制人胃癌HGC-27细胞线粒体活性和细胞增殖的作用,其机制可能与促进miR-10a表达,抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活有关。 展开更多
关键词 木瓜总三萜 胃癌 HGC-27细胞 pI3k/akt/mtor/p70S6k信号通路
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扶脾柔肝颗粒对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制研究 被引量:7
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作者 安祯祥 何远利 +3 位作者 唐东昕 黄丹 王敏 王芳 《中国药房》 CAS 北大核心 2021年第21期2587-2592,共6页
目的:研究扶脾柔肝颗粒(FRG)对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱片组(化学药阳性对照,0.2mg/kg)、扶正化瘀胶囊组(中药阳性对照,0.415g/kg)和FRG低、中、高剂量组(20、40、80g/kg),除空白... 目的:研究扶脾柔肝颗粒(FRG)对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱片组(化学药阳性对照,0.2mg/kg)、扶正化瘀胶囊组(中药阳性对照,0.415g/kg)和FRG低、中、高剂量组(20、40、80g/kg),除空白组和模型组各11只大鼠外(各取1只用于判断是否造模成功),其余每组10只。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液并灌胃30%乙醇以复制肝纤维化模型。造模成功后,各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续4周。末次灌胃后,观察大鼠肝组织病理形态学变化;检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平;检测大鼠肝组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平;检测大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肝小叶结构紊乱,纤维组织增生明显,部分有假小叶形成;血清中HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平和肝组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平以及Akt、AMPK、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,FRG各剂量组大鼠肝组织损伤明显减轻,血清和肝组织中上述指标(FRG低剂量组LN、PCⅢ除外)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FRG可改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与下调肝组织中自噬相关蛋白和Akt/AMPK/mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 扶脾柔肝颗粒 肝纤维化 自噬 akt/AMpk/mtor/p70S6k信号通路 大鼠
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