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题名农杆菌介导甘蔗基因转化技术的优化
被引量：13
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作者
罗敬萍
张树珍
杨本鹏
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机构
中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
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出处
《热带作物学报》
CSCD
2003年第4期23-28,共6页
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基金
国家自然科学基金(30160045)
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文摘
以甘蔗(Saccharum officinarum L.)品种ROC10为转化受体材料,以GFP基因为报告基因,通过对农杆菌介导遗传转化的一系列条件,包括农杆菌菌株及侵染菌液浓度、侵染时间、受体愈伤组织龄期、AS活化时间及使用浓度、共培养时间等进行优化,同时进行了便于vir基因活化和T-DNA转移的条件组合,如附加果糖和葡萄糖、酸性环境感染,低温共培养等,从而建立了一个可行、有效而又简便的农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系。结果表明:农杆菌菌株EHA105优于LBA4404,其适宜侵染浓度D_(600)为1.3752;适宜受体愈伤组织龄期为25℃暗培养25d;适宜侵染时间为30min;适宜AS活化时间为2h,使用浓度为200μmol·L^(-1);适宜共培养时间为4d。获得2株有荧光信号的植株,对这2株植株进行斑点Southern杂交检测,均有阳性反应,证明GFP基因已整合到甘蔗基因组中并得到了有效表达,表明该转化体系确实是有效的。
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关键词
甘蔗
品种
基因转化技术
农杆菌
gfp基因
菌株
侵染菌液浓度
侵染时间
受体愈伤组织龄期
AS活化时间
使用浓度
共培养时间
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Keywords
agrobacterium tumefaciens gfp gene genetic transformation sugarcane
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分类号
S566.103.2
[农业科学—作物学]
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