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单增李斯特菌组氨酸激酶AgrC对毒力的影响 被引量：3
1
作者 汪国俊 黄金梅 +2 位作者 季强 栗绍文 刘梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1270-1278,共9页
为了探究单增李斯特菌双组分系统AgrCA对毒力的影响,以自杀型温度敏感质粒pHT304-ts为载体,采用同源重组的方法构建组氨酸激酶AgrC的基因缺失株ΔagrC,以亲本株LM201为对照,对缺失株ΔagrC进行了肠上皮细胞Caco-2的黏附与侵袭试验、巨... 为了探究单增李斯特菌双组分系统AgrCA对毒力的影响,以自杀型温度敏感质粒pHT304-ts为载体,采用同源重组的方法构建组氨酸激酶AgrC的基因缺失株ΔagrC,以亲本株LM201为对照,对缺失株ΔagrC进行了肠上皮细胞Caco-2的黏附与侵袭试验、巨噬细胞RAW264.7胞内存活情况测定、小鼠组织载菌量测定和小鼠LD50的测定。结果显示,基因agrC的缺失导致菌株对肠上皮细胞的侵袭力显著下降(P<0.05),在巨噬细胞中的生存能力显著下降(P<0.05),在小鼠肝和脾内的菌量均显著低于亲本株(P<0.05),对小鼠的LD50值是亲本株的5倍。结果表明,AgrC对单增李斯特菌的毒力有调控作用,故以AgrC为靶标,研发针对该组分的抑制剂或拮抗剂将是控制单增李斯特菌的一个新策略。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 组氨酸激酶 agrc 毒力
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RF克隆结合巢式PCR构建金黄色葡萄球菌组氨酸蛋白激酶AgrC表达载体 被引量：3
2
作者 陆路 熊文 +3 位作者 张钰琨 王丽娜 权春善 范圣第 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期55-60,共6页
AgrC蛋白是位于金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶,能够感受细胞外的化学信号并将信号传递到细胞内,进而调控细胞内与致病性相关的一系列基因的表达。利用无限制克隆法(RF克隆),并结合巢式PCR成功构建了AgrC表达载体pET-28a-AgrC。将... AgrC蛋白是位于金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶,能够感受细胞外的化学信号并将信号传递到细胞内,进而调控细胞内与致病性相关的一系列基因的表达。利用无限制克隆法(RF克隆),并结合巢式PCR成功构建了AgrC表达载体pET-28a-AgrC。将表达载体电转入大肠杆菌中,并利用IPTG进行诱导表达AgrC蛋白。再经过低温超高压破碎、超高速离心、金属螯合层析与尺寸排阻层析等过程,分离纯化得到AgrC蛋白。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 agrc 无限制克隆法 巢式PCR
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利用表面活性剂介导的方法制备AgrC蛋白脂质体 被引量：2
3
作者 王丽娜 权春善 +3 位作者 许永斌 李西会 瞿晓晶 范圣第 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第2期233-240,共8页
膜蛋白AgrC是金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统的感受激酶.其信号转导机制的阐明对于解决细菌耐药问题具有重要意义.目前膜蛋白研究的主要瓶颈是难以获得大量高纯度和功能稳定的蛋白.将目标蛋白表达在大肠杆菌体内,利用表面活性剂将其... 膜蛋白AgrC是金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统的感受激酶.其信号转导机制的阐明对于解决细菌耐药问题具有重要意义.目前膜蛋白研究的主要瓶颈是难以获得大量高纯度和功能稳定的蛋白.将目标蛋白表达在大肠杆菌体内,利用表面活性剂将其从细胞膜上溶解,纯化,这一系列步骤容易引起膜蛋白不稳定和功能损失.本文报道了用表面活性剂介导的方法将膜蛋白AgrC镶嵌到脂质体上,即形成蛋白脂质体.脂质体和蛋白脂质体的结构、形貌以及平均粒径分别用透射电镜和动态光散射仪表征.蔗糖密度梯度离心的结果表明蛋白重构效率达80%.硫醇试剂标记实验确定AgrC的细胞质域在脂质体中取向于内侧.体外磷酸化实验表明AgrC蛋白在脂质体中的自我磷酸化活性远远高于表面活性剂中的活性,且其自我磷酸化活性在2周内几乎没有损失.蛋白脂质体的构建不仅解决了膜蛋白的不稳定性问题,也为体外研究AgrC蛋白的结构、功能和信号转导机制提供了新的思路. 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 agrc 表面活性剂 蛋白脂质体 膜蛋白
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肽受体跨膜镶嵌的人工细胞膜的构建:细菌组氨酸蛋白激酶跨膜区多肽在合成肽脂囊泡上的镶嵌 被引量：2
4
作者 权春善 马金龙 +2 位作者 王雪 李巍 范圣第 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1167-1173,共7页
选择agrI型金黄色葡萄球菌ATCC6538组氨酸蛋白激酶AgrC蛋白六个跨膜区中与跨膜信号转导过程最密切的一条肽链为受体,将此多肽采用超声法镶嵌到人工细胞膜上,采用透射电镜和原子力显微镜对其形态进行了分析,发现大部分囊泡及镶嵌体系的... 选择agrI型金黄色葡萄球菌ATCC6538组氨酸蛋白激酶AgrC蛋白六个跨膜区中与跨膜信号转导过程最密切的一条肽链为受体,将此多肽采用超声法镶嵌到人工细胞膜上,采用透射电镜和原子力显微镜对其形态进行了分析,发现大部分囊泡及镶嵌体系的单个形态为均一球状,直径大小在50～200nm范围内.考察悬浮液pH、体系温度及浓度等因素对其稳定性的影响,发现在pH为7.0,温度不超过30℃,多肽和N+C5Ala2C16的物质的量之比为1∶100时,镶嵌体系的稳定性最强.同时,通过圆二色谱、差示扫描量热分析等手段对镶嵌模型进行表征,分析发现多肽分子能稳定地插入双层膜囊泡中,且能主动地插入形成镶嵌体系. 展开更多
关键词 跨膜转导 金黄色葡萄球菌 agrc 跨膜镶嵌
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金黄色葡萄球菌agr系统受体蛋白AgrC的跨膜结构分析 被引量：2
5
作者 李巍 王军华 +2 位作者 权春善 郑维 范圣第 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期219-225,共7页
金黄色葡萄球菌agr系统中,受体组氨酸蛋白激酶AgrC能够被同源或非同源自诱导信号分子(autoinducingpe ptides,AIPs)激活或抑制。通过TMHMM软件对四种agr型AgrC蛋白的氨基酸序列进行分析及跨膜结构预测,发现agrⅠ型和agrⅣ型AgrC蛋白可... 金黄色葡萄球菌agr系统中,受体组氨酸蛋白激酶AgrC能够被同源或非同源自诱导信号分子(autoinducingpe ptides,AIPs)激活或抑制。通过TMHMM软件对四种agr型AgrC蛋白的氨基酸序列进行分析及跨膜结构预测,发现agrⅠ型和agrⅣ型AgrC蛋白可能在胞外的第二个Loop环与其AIP相互作用,agrⅡ型可能与AIPⅡ在胞外的第一个或第二个Loop环相互作用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 群体感应系统 agrc 跨膜结构
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金黄色葡萄球菌agrC的克隆及序列分析 被引量：1
6
作者 王军华 权春善 +3 位作者 郑维 李巍 王英国 范圣第 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期45-49,共5页
金黄色葡萄球菌agr系统能够调控多种毒力因子的表达,在该系统中,受体组氨酸蛋白激酶AgrC感受外部信号并传递给细胞内,在整个agr系统中起着重要的作用,成为药物发现的新靶点,该蛋白由agrC基因编码。通过分析发现,agrC基因的保守性非常差... 金黄色葡萄球菌agr系统能够调控多种毒力因子的表达,在该系统中,受体组氨酸蛋白激酶AgrC感受外部信号并传递给细胞内,在整个agr系统中起着重要的作用,成为药物发现的新靶点,该蛋白由agrC基因编码。通过分析发现,agrC基因的保守性非常差,这可能是由于它作为受体需要与信号分子结合的特异性所决定的。通过对已经公开的agrC基因序列进行比对分析,设计了多条引物,以金黄色葡萄球菌ATCC 6538的基因组DNA为模板,进行了PCR扩增并转化大肠埃希菌克隆该基因,获得了金黄色葡萄球菌ATCC 6538附属基因调节系统agrC基因的全序列。同时,通过对现有的提取金黄色葡萄球菌基因组的方法做了改进,得到了一种大量提取了金黄色葡萄球菌DNA的方法,获得的DNA纯度较高。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 DNA提取 克隆 附属基因调节系统 agrc 基因序列
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金黄色葡萄球菌附属基因调节子的表达与纯化
7
作者 李学军 戴晓天 杨和平 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1188-1189,1192,共3页
目的构建金黄色葡萄球菌附属基因调节子(accessory gene regulator C,agrC)的原核表达质粒pET28α(+)-agrC,并诱导该基因在原核细胞中表达与纯化。方法提取金黄色葡萄球(简称金葡菌)菌基因组DNA,PCR扩增agrC基因的目的片断全长,插入表... 目的构建金黄色葡萄球菌附属基因调节子(accessory gene regulator C,agrC)的原核表达质粒pET28α(+)-agrC,并诱导该基因在原核细胞中表达与纯化。方法提取金黄色葡萄球(简称金葡菌)菌基因组DNA,PCR扩增agrC基因的目的片断全长,插入表达质粒载体pET28α(+)中,构建pET28α(+)-agrC重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌DH5α,异丙基--βD硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,His标签磁株纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测鉴定蛋白表达。结果成功构建了金葡菌pET28α(+)-agrC大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高表达,分离纯化的产物纯度达到90%。结论agrC的成功表达和分离纯化,为该蛋白的生物功能研究和筛选出与该蛋白特异性结合的小肽奠定了基础,从而为深入研究agrC的作用机制并设计针对agrC作用的抗菌药物提供了有力依据。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 agrc 蛋白表达
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金黄色葡萄球菌agrC结合小肽对生物膜的抑制作用
8
作者 李学军 杨和平 戴晓天 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期871-875,共5页
目的:体外观察金黄色葡萄球菌附属基因调节子(Accessory gene regulator,agr)agrC的特异结合小肽对葡萄球菌生物膜形成的影响。方法:人工合成agrC结合小肽(命名为N1),微量板半定量和激光共聚焦显微镜观察其对生物膜形成的影响;RT-PCR及W... 目的:体外观察金黄色葡萄球菌附属基因调节子(Accessory gene regulator,agr)agrC的特异结合小肽对葡萄球菌生物膜形成的影响。方法:人工合成agrC结合小肽(命名为N1),微量板半定量和激光共聚焦显微镜观察其对生物膜形成的影响;RT-PCR及Western blot观察其对自溶血素(Autolysin E,altE)和icaA蛋白的转录与表达水平的影响。结果:N1在金葡菌的粘附聚集期能显著抑制生物膜的形成,并影响生物膜形成相关因子的转录与表达。结论:N1可用于预防和治疗早期金葡菌生物膜相关感染。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 生物膜 agrc
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不同电性脂质体对金黄色葡萄球菌组氨酸激酶AgrC跨膜镶嵌效率的影响 被引量：5
9
作者 熊文 权春善 +4 位作者 王丽娜 张旭宁 赵晶 郑维 范圣第 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1901-1907,共7页
通过改变脂质体中磷脂成分，构建了不同电性的脂质体。利用表面活性剂介导方法，将截短的金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶AgrC（ AgrCTM6-7C ）蛋白重构到不同电性的脂质体上。结果表明，阴离子脂质体对AgrCTM6-7C蛋白的镶嵌效率明... 通过改变脂质体中磷脂成分，构建了不同电性的脂质体。利用表面活性剂介导方法，将截短的金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶AgrC（ AgrCTM6-7C ）蛋白重构到不同电性的脂质体上。结果表明，阴离子脂质体对AgrCTM6-7C蛋白的镶嵌效率明显高于阳离子脂质体，约60%~70%镶嵌至阴离子脂质体中的AgrCTM6-7C蛋白的细胞质域朝向脂质体囊泡的外部，并保持较高活性。利用圆二色光谱比较了AgrCTM6-7C蛋白在表面活性剂胶束和脂质体中的二级结构稳定性，发现阴离子脂质体对AgrCTM6-7C蛋白的二级结构具有一定的保护作用，可明显提高蛋白的热稳定性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 组氨酸激酶agrc 脂质体 蛋白脂质体 膜蛋白
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