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高浓度尿酸盐对肠道细胞尿酸转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2表达及其功能的影响
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作者 杨帆 丁雪丽 +3 位作者 李晓宇 宋玉君 田字彬 郭英杰 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2024年第1期57-63,共7页
目的探讨高浓度尿酸盐对肠道细胞HT-29尿酸转运功能的影响,明确高浓度尿酸盐干预下三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)表达及功能的改变并探讨可能的机制。方法实验组分别使用2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 mg/dl浓度梯度的尿酸对HT... 目的探讨高浓度尿酸盐对肠道细胞HT-29尿酸转运功能的影响,明确高浓度尿酸盐干预下三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)表达及功能的改变并探讨可能的机制。方法实验组分别使用2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 mg/dl浓度梯度的尿酸对HT-29细胞进行干预,对照组使用0 mg/dl干预,通过细胞计数试剂盒(CCK8法)检测细胞活性,流式细胞术检测ABCG2转运功能,Western blot法和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测β-catenin/ABCG2蛋白及mRNA表达水平,免疫共沉淀(Co-IP)检测ABCG2与β-catenin的结合水平,激光共聚焦显微镜观察细胞ABCG2及β-catenin的蛋白定位。结果与对照组相比,2.5、5.0 mg/dl浓度尿酸处理24 h后,HT-29细胞的增殖活性无明显改变,而10.0、15.0、20.0 mg/dl浓度尿酸处理24 h后,细胞活性受损较为显著,细胞活性分别下降至(80.67±1.59)%、(77.85±2.41)%、(69.49±1.45)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较,低浓度尿酸(2.5、5.0 ml/dl)干预下,β-catenin/ABCG2在蛋白水平和mRNA水平表达差异均无统计学意义(均P>0.05),高浓度尿酸(7.5、10.0、15.0、20.0 mg/dl)干预下β-catenin/ABCG2在蛋白水平和mRNA水平表达均显著下降(均P<0.05)。选择对照(0 mg/dl)和高浓度(15.0 mg/dl)尿酸进行进一步相关实验,研究发现高浓度尿酸显著下调了HT-29细胞的转运功能(P<0.05)。免疫共沉淀证实ABCG2和β-catenin蛋白间存在相互结合作用,与对照组相比,高浓度尿酸干预组中ABCG2和β-catenin蛋白结合呈下降趋势但无统计学意义(均P>0.05)。激光共聚焦显微镜下观察显示,与对照组相比,高浓度尿酸组中ABCG2与β-catenin共定位减少,且定位于胞膜的ABCG2数量减少(P<0.05)。结论高浓度尿酸盐可下调肠道细胞β-catenin/ABCG2的表达及功能,进而影响细胞的转运功能,且高浓度尿酸作用下破坏了β-catenin/ABCG2的共定位。 展开更多
关键词 高浓度尿酸盐 尿酸转运 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白g2 Β-CATENIN
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