猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立 被引量：19

1

作者 王牟平 刘思国 +2 位作者 王春来 刘杰 尹训南 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期305-309,共5页

根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒素的基因序列 ,自行设计和合成了二对可扩增 448bp和 3 65bp目的片段的引物 ,成功的建立了检测APP的套式PCR方法。通过对猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体和猪丹毒... 根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒素的基因序列 ,自行设计和合成了二对可扩增 448bp和 3 65bp目的片段的引物 ,成功的建立了检测APP的套式PCR方法。通过对猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体和猪丹毒杆菌的DNA进行了PCR检测 ,结果均为阴性 ;对猪胸膜肺炎放线杆菌的 1、2、5、6、7、9国际标准血清型均扩增出 448bp和 3 65bp的特异性条带 ;检测的敏感度一步PCR可达到5 0 0个细菌 ,最低检出DNA浓度可达到0 .5 85ng/mL ;套式PCR可达到 5 0个细菌 ,最低检出DNA浓度可达到 5 8.5pg/mL。另外 ,对 5株从病猪体内分离的猪胸膜肺炎放线杆菌进行了检测 ,5株均成阳性反应 ;对 1 0只屠宰猪的肺脏分离物进行了检测 ,结果 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可做为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断和流行病学调查的手段。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR

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广东省猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定及耐药表型和耐药基因检测与分析 被引量：9

2

作者 徐民生 柯海意 +4 位作者 施科达 杨冬霞 翟少伦 臧莹安 李春玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3212-3225,共14页

【目的】了解广东省部分规模化猪场引起猪传染性胸膜肺炎(PCP)的病原菌猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的耐药表型和耐药基因携带情况,并分析比较其相关性,为有效防控该病提供理论依据。【方法】将2019-2021年从广东省不同地区规模化猪... 【目的】了解广东省部分规模化猪场引起猪传染性胸膜肺炎(PCP)的病原菌猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的耐药表型和耐药基因携带情况,并分析比较其相关性,为有效防控该病提供理论依据。【方法】将2019-2021年从广东省不同地区规模化猪场采集的疑似猪传染性胸膜肺炎病死猪病料通过病原分离培养、革兰氏染色、生化试验、PCR扩增等方法进行病原菌分离鉴定和测序分析,随后对分离株进行药敏试验并通过PCR检测其耐药基因,确定其耐药表型和耐药基因的携带率,分析比较两者的一致性。【结果】分离菌需在含有血清和NAD的培养板中生长;革兰氏染色结果显示分离菌为红色,可判定为革兰氏阴性细菌,通过生化试验、PCR结果及测序分析确定分离到20株APP,且没有表现出明显的地域特性。所有菌株均呈现多重耐药且约50%菌株呈8重及以上耐药;其中对四环素类、磺胺类、氯霉素类和大环内酯类药物耐药率较高,分别为77.5%、65.0%、55.0%和48.8%;进一步分析发现,分离菌主要对四环素、磺胺异噁唑、氟苯尼考和林可霉素等抗菌药物耐药,而对头孢唑啉(先锋Ⅴ)和阿奇霉素敏感。23种主要耐药基因中共检测到bla、aph(2″)-Ⅰb、sul1、sul2、sul3、tetA、tetB、tetM、tetO、tetR和floR这11种耐药基因,携带率分别为85%、85%、50%、60%、75%、30%、100%、85%、100%、70%和80%;未检测到喹诺酮类、大环内酯类和林可胺类相关耐药基因。【结论】从广东省猪群中分离到的APP表现出广泛耐药性,且为多重耐药,耐药基因与耐药表型基本一致,表明耐药基因的携带是细菌对抗菌药物产生耐药的主要原因之一,但也可能存在其他未检测的耐药基因,或存在新的耐药机制。 展开更多

关键词 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌(app) 分离鉴定 耐药表型 耐药基因

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猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立 被引量：3

3

作者 逯忠新 杨学山 +3 位作者 赵卫平 赵萍 高鹏程 储岳峰 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第6期6-8,共3页

根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (APP)外膜脂蛋白基因序列 ,设计合成了 1对特异性引物。经PCR扩增 ,APP 110标准血清型菌株均能扩增出大小为 980bp的DNA片段 ,而大肠埃希氏菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结... 根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (APP)外膜脂蛋白基因序列 ,设计合成了 1对特异性引物。经PCR扩增 ,APP 110标准血清型菌株均能扩增出大小为 980bp的DNA片段 ,而大肠埃希氏菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APPDNA的敏感性可达 2pg。表明 ,此PCR方法特异性好 ,敏感性高 ,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR 外膜脂蛋白基因

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猪胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 被引量：5

4

作者 米丰泉 陈小玲 +3 位作者 赵玉军 王翠敏 王凤强 张彦 《饲料工业》 2005年第4期38-40,共3页

在已经建立的猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的筛选,成功地建立了APP、PM、HPS复合PCR诊断方法,并应用于临床。利用一次PCR反应,即可同时扩增APP的342bp... 在已经建立的猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的筛选,成功地建立了APP、PM、HPS复合PCR诊断方法,并应用于临床。利用一次PCR反应,即可同时扩增APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 猪多杀性巴氏杆菌 副猪嗜血杆菌 复合PCR

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猪胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因的克隆及其原核表达 被引量：6

5

作者 王冬梅 刘磊 +3 位作者 逯忠新 赵萍 高鹏程 储岳峰 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第5期373-376,共4页

参照GenBank上登录的猪胸膜肺炎放线杆菌血清5 型菌株(AF363361)的apxⅠA基因序列设计了1对特异性引物,用PCR法扩增apxⅠA基因,获得了3 069 bp的片段,将其克隆到pMD 18 T载体,经酶切、PCR鉴定和序列分析,表明克隆是成功的。再将长为1 14... 参照GenBank上登录的猪胸膜肺炎放线杆菌血清5 型菌株(AF363361)的apxⅠA基因序列设计了1对特异性引物,用PCR法扩增apxⅠA基因,获得了3 069 bp的片段,将其克隆到pMD 18 T载体,经酶切、PCR鉴定和序列分析,表明克隆是成功的。再将长为1 149 bp的apxⅠA基因的部分片段(编码ApxⅠ的N 端的片段)插入到原核表达载体pET 28(a)中,构建了重组表达质粒pET apxⅠA,转化大肠埃希氏菌JM109(DE3),在IPTG 诱导下获得了高效表达,经SDS PAGE检测,证实表达产物大小约为41 ku。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxⅠA基因 克隆 原核表达

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猪传染性胸膜肺炎发病机制研究进展 被引量：1

6

作者 黄麒霖 仇正英 +3 位作者 王贵波 景小涵 李维 辛蕊华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期31-37,共7页

猪传染性胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种严重呼吸道疾病,在全世界广泛流行。APP主要通过直接接触、气溶胶和污染物在猪群之间传播,猪只感染后,多种毒力... 猪传染性胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种严重呼吸道疾病,在全世界广泛流行。APP主要通过直接接触、气溶胶和污染物在猪群之间传播,猪只感染后,多种毒力因子触发一系列细胞因子级联反应,引发“炎症风暴”造成脓毒血症,导致肺脏病变及坏死,最急性型的死亡率可达80%~100%。PCP在我国的发病率呈逐年上升趋势,已成为危害养猪业最严重的疾病之一,给我国养殖业造成严重的经济损失。临床上常用抗生素治疗PCP,但由于细菌耐药性日益严重,使得抗生素对该病的防控愈发困难。此外APP血清型较多,不同类型血清型之间交叉免疫不强,导致疫苗防控效果不理想,感染后死亡率和发病率均处于上升趋势。目前,人们对APP发病机制的研究主要集中在毒力因子方面,关于该菌的侵袭过程(如细菌的定植和营养获取、逃避宿主防御、诱导组织损伤等)对PCP的发生、发展及预后的影响尚不清楚。因此,文章主要综述了PCP的发病机制,揭示了多种因素的作用,以期了解APP的感染过程及机体的免疫机制,在抗炎和增强免疫力等环节为防治PCP提供理论依据。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌(app) 猪传染性胸膜肺炎(PCP) 动物传染病 发病机制 毒力因子

原文传递

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌参考株抗血清的制备及野毒株血清型鉴定 被引量：5

7

作者 陈本龙 崔治中 +1 位作者 刁有祥 姜世金 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期257-258,261,共3页

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌全部12个血清型的国际参考菌株接种于培养基大量培养。回收菌体、甲醛灭活后，加入蜂胶佐剂制成疫苗。分别免疫健康的试验用白兔。获得针对该菌单一血清型的抗血清。虽然不同血清型间有一定的交叉反应，但对... 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌全部12个血清型的国际参考菌株接种于培养基大量培养。回收菌体、甲醛灭活后，加入蜂胶佐剂制成疫苗。分别免疫健康的试验用白兔。获得针对该菌单一血清型的抗血清。虽然不同血清型间有一定的交叉反应，但对同源菌株的菌体抗原的凝集效价最高。分别可达6～8个log2。用该套血清对2003年从山东省各地分离到的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌野毒株11株进行了血清型鉴定。分别为3型（2株）、4型（1株）、5型（4株）和7型（4株）。 展开更多

关键词 猪 胸膜肺炎放线杆菌 抗血清 血清型鉴定

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不同NAD含量条件下培养的猪胸膜肺炎放线杆菌对小白鼠致病性和免疫保护性的影响 被引量：3

8

作者 王辉 刁有祥 孟凡磊 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期400-404,共5页

将在含体积分数为0.050%、0.001%的尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的LB培养基中培养的血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),分别以3×109CFU.只-1的菌量对30日龄小白鼠进行接种,观察不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠致病性的影响.结果... 将在含体积分数为0.050%、0.001%的尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的LB培养基中培养的血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),分别以3×109CFU.只-1的菌量对30日龄小白鼠进行接种,观察不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠致病性的影响.结果表明:用0.001%NAD培养的血清5型APP对小白鼠的致病性较强,小白鼠接种APP后,多数表现肺脏严重出血;而用0.050%NAD培养的血清5型APP接种小白鼠后,只有少数小白鼠肺脏出血严重,多数表现为轻度出血.将上述条件培养的APP按常规方法制备油乳剂灭活疫苗,分别在第3周龄和第6周龄对小白鼠进行免疫接种,在2免后3周对免疫的小白鼠进行同源攻击,并对免疫前后小白鼠的抗体效价进行检测.结果表明:分别用0.050%、0.001%NAD培养的血清5型APP制备的灭活疫苗,对小白鼠的保护率差异不显著;用0.001%NAD培养的血清5型APP制备的灭活疫苗免疫小白鼠,用血清5型APP同源攻击后,发病的小白鼠肺脏出血较轻,而用0.050%NAD培养的疫苗免疫小白鼠攻毒后,发病的小白鼠肺脏出血严重.可见在不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠的致病性和免疫保护力不同. 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌(app) 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 致病性 免疫保护性

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胸膜肺炎放线杆菌对四环素类抗生素的耐药分析及相关基因检测 被引量：4

9

作者 李海利 朱文豪 +9 位作者 张青娴 游一 方剑玉 焦文强 徐引弟 许峰 王治方 郎利敏 张立宪 王克领 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第1期121-124,共4页

四环素类药物是在兽医临床中常用的一类抗生素,为了解胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)对四环素类抗生素的耐药情况,本研究对从临床分离鉴定的85株APP进行了四环素类抗生素临床耐药情况和相关基因的分析和检测。... 四环素类药物是在兽医临床中常用的一类抗生素,为了解胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)对四环素类抗生素的耐药情况,本研究对从临床分离鉴定的85株APP进行了四环素类抗生素临床耐药情况和相关基因的分析和检测。应用药敏纸片法进行药敏试验,结果:APP对四环素的耐药率较高为76.5%,其次为金霉素54.1%、美他环素48.2%、多西环素45.9%、土霉素28.2%、米诺霉素25.9%、替加环素22.3%。采用PCR方法对四环素类10种耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL1和tetL2进行检测,结果:tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL2、tetL1耐药基因的扩增阳性率分别为78.8%、41.2%、15.3%、8.2%、21.2%、15.3%、43.5%、24.7%和30.6%,而tetL1扩增则全部阴性,未检出其耐药基因。本研究结果为四环素类抗生素在猪传染性胸膜肺炎临床上的应用和新药研发提供了一定的理论依据。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌(app) 四环素类抗生素 耐药基因

原文传递

替米考星、红霉素体外诱导猪胸膜肺炎放线杆菌耐药性的初步研究 被引量：4

10

作者 王绍琛 王桂琴 +1 位作者 吴聪明 沈建忠 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第11期7-9,共3页

采用微量稀释法测定了替米考星和红霉素对5株临床分离猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的最小抑菌浓度,并用药物浓度递增法体外诱导App对两种药物的耐药性。结果表明替米考星和红霉素对App都具有很高的体外抑菌活性;经15代诱导,App对替米考星的... 采用微量稀释法测定了替米考星和红霉素对5株临床分离猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的最小抑菌浓度,并用药物浓度递增法体外诱导App对两种药物的耐药性。结果表明替米考星和红霉素对App都具有很高的体外抑菌活性;经15代诱导,App对替米考星的最高耐受浓度没发生明显变化,而对红霉素的最高耐受浓度有了较大程度的提高,表明App对替米考星不易产生耐药,而对红霉素可缓慢产生耐药。试验结果提示替米考星是治疗App感染的理想药物。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 替米考星 红霉素 耐药性

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胸膜肺炎放线杆菌血清型特异的疫苗候选基因的筛选及痤疮丙酸杆菌异源免疫 被引量：4

11

作者 雷连成 韩文瑜 +2 位作者 孙长江 杨鹏 冯新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期838-842,共5页

目的筛选猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型与5型特异的疫苗候选基因,并研究痤疮丙酸杆菌对猪传染性胸膜肺炎的异源免疫。方法采用cDNA代表性差异分析、大肠杆菌核糖体展示、免疫筛选和RT-PCR技术筛选APP1型和5型血清型特异的疫苗候选基因,进... 目的筛选猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型与5型特异的疫苗候选基因,并研究痤疮丙酸杆菌对猪传染性胸膜肺炎的异源免疫。方法采用cDNA代表性差异分析、大肠杆菌核糖体展示、免疫筛选和RT-PCR技术筛选APP1型和5型血清型特异的疫苗候选基因,进行克隆、测序及同源序列分析。并用与APP疫苗候选基因具有同源序列的痤疮丙酸杆菌(PA)免疫小鼠,研究其对APP感染的异源免疫。结果获得血清1型APP6条疫苗候选基因,2条为未知基因,2条与PA同源性为98%,2条与人cDNA有同源性。获得血清5型APP7条疫苗候选基因,其中2条为未知基因,2条与PA同源性分别为93%和100%。用PA全菌免疫小鼠,产生的抗血清可与1型和5型APP发生强的免疫反应,ELISA检测效价达1∶3200;脾淋巴细胞检测结果显示,免疫组CD3+、CD4+T细胞的百分率及CD4+/CD8+比值与对照组相比均升高,两组CD3+T细胞百分率差异有显著意义。以10倍LD501型和5型APP分别感染PA免疫小鼠,小鼠存活率分别为95%和90%,并且在攻毒后第15天体内APP可全部被清除。结论1型与5型APP存在不同的疫苗候选基因,痤疮丙酸杆菌与之存在共同抗原,能够产生交叉免疫应答,对血清1型和5型APP的感染具有预防作用。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 疫苗候选基因 痤疮丙酸杆菌 异源免疫

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胸膜肺炎放线杆菌Apx ⅢA、Apx ⅣA蛋白表达及重组亚单位疫苗的研究 被引量：3

12

作者 宋丹 李鹏 +4 位作者 刘翠翠 陈金顶 易琳 丁红星 赵明秋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期836-841,共6页

为研制以胸膜肺炎放线杆菌(APP) 4种外毒素蛋白(ApxⅠA、ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA)和外膜蛋白(OMP)为组分的亚单位疫苗,在本研究室已表达纯化的r ApxⅠA、r ApxⅡA、r OMP的基础上,本研究通过PCR扩增得到ApxⅢA、ApxⅣA基因,并分别将其... 为研制以胸膜肺炎放线杆菌(APP) 4种外毒素蛋白(ApxⅠA、ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA)和外膜蛋白(OMP)为组分的亚单位疫苗,在本研究室已表达纯化的r ApxⅠA、r ApxⅡA、r OMP的基础上,本研究通过PCR扩增得到ApxⅢA、ApxⅣA基因,并分别将其克隆至表达载体p ET-32a中,测序验证后将重组质粒转化入宿主菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后获得重组蛋白r ApxⅢA和r ApxⅣA。将获得的5种蛋白(rApxⅠA、r ApxⅡA、r ApxⅢA、r ApxⅣA和r OMP)按一定比例混合制备成亚单位疫苗免疫BALB/c雌鼠进行免疫效果测定,设灭活疫苗组(Ⅰ组)、弗氏佐剂乳化的亚单位疫苗组(Ⅱ组)、白油佐剂乳化的亚单位疫苗组(Ⅲ组)、灭活疫苗+白油佐剂乳化的亚单位疫苗组(Ⅳ组)和PBS组(Ⅴ组)。Western blot结果显示,表达了重组蛋白r ApxⅢA和r ApxⅣA且具有较好的反应原性;抗体检测结果显示,加强免疫后,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组的r ApxⅠA、r ApxⅢA、r ApxⅣA和r OMP抗体水平基本一致(p>0.05),均显著高于Ⅴ组和Ⅰ组(p<0.05);攻毒保护试验结果显示,Ⅱ组与Ⅲ组保护率一致(p>0.05),显著高于Ⅴ组(p<0.05)。表明本研究中的亚单位疫苗具有一定的免疫保护效果,为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌(app) 表达 亚单位疫苗

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxIA基因在大肠杆菌中的融合表达与纯化 被引量：3

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作者 黄琦 谢芝勋 +4 位作者 庞耀珊 刘加波 邓显文 谢志勤 谢丽基 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1063-1067,共5页

选取猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIA基因序列中的抗原决定簇集中的区域,采用PCR方法从APP血清1型参考株259的基因组DNA中,扩增apxIA基因中约954bp的片段,连接到pMD-18T载体,经测序正确后,以EcoRI和NotI双酶切,亚克隆到原核表达载体... 选取猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIA基因序列中的抗原决定簇集中的区域,采用PCR方法从APP血清1型参考株259的基因组DNA中,扩增apxIA基因中约954bp的片段,连接到pMD-18T载体,经测序正确后,以EcoRI和NotI双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌DH5α,经0.4mmol/LIPTG诱导表达,产物通过尿素变性复性,并以Glutathione Sepharose 4B亲和层析的方法对目的蛋白进一步纯化。SDS-PAGE分析结果显示,目的基因在大肠杆菌DH5α中以包涵体形式高效表达,经薄层凝胶扫描分析占菌体总蛋白的32%,纯化后的GST融合蛋白纯度达到95%,为亚单位疫苗和诊断抗原的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxIA基因 大肠杆菌 融合表达 纯化

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多重耐药胸膜肺炎放线杆菌GD2107株全基因组测序及生物信息学分析

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作者 徐民生 柯海意 +7 位作者 杨冬霞 施科达 孙泽仪 牛佳伟 常鑫 翟少伦 臧莹安 李春玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期4019-4031,共13页

【目的】通过对多重耐药胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)GD2107株进行全基因组测序及生物信息学分析,丰富APP基因组数据库信息;构建基于ApxⅣ基因的系统进化树,分析该菌株的进化关系,为探索APP致病机制和临床防... 【目的】通过对多重耐药胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)GD2107株进行全基因组测序及生物信息学分析,丰富APP基因组数据库信息;构建基于ApxⅣ基因的系统进化树,分析该菌株的进化关系,为探索APP致病机制和临床防控猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumia,PCP)提供参考。【方法】通过药敏试验测定分离菌株的耐药谱;采用全基因组测序技术(whole genome sequencing,WGS)对细菌DNA进行全基因组测序,分别利用Illumina NovaSeq、PacBio SequeI测序平台对全基因组测序结果进行基因功能注释及生物信息学分析(包括基因组基本信息、功能元件分析及亚系统分析等);基于ApxⅣ基因构建系统进化树。【结果】药敏试验结果显示,GD2107菌株对青霉素、头孢拉定(先锋Ⅵ)、卡那霉素等14种抗菌药均耐药。对GD2107株全基因组测序得到1条大小为2271987 bp的环状染色体(GC含量为41.21%)和2个大小分别为5027和3497 bp的环状质粒,共预测到2290个编码基因,包含19个rRNA(7个5S rRNA、6个16S rRNA、6个23S rRNA)、21个tRNA基因、20个ncRNA;23个基因岛、4个原噬菌体和2组CRISPR相关序列;分别有2112、1549和1866个基因在COG、KEGG和GO数据库中得到注释,且相关蛋白集中分布于APP的代谢过程;另外在毒力因子(VFDB)和耐药因子(CARD)数据库中还注释到48个毒力基因和22个耐药基因(仅floR基因位于质粒上)。绘制该菌株的全基因组圈图,将基因组信息提交至NCBI,获得染色体GenBank登录号为CP097377,质粒登录号分别为CP097378和CP097379。系统进化树分析发现,该菌株与来自中国的APP菌株(CP063424.1)进化关系最近。【结论】本研究完成了对多重耐药菌株GD2107的全基因组测序与生物信息学分析,全面认识了该菌株基因组的结构和功能并探究了耐药和致病机制中的相关基因,进化关系显示该菌株具有一定的地域流行性,为预防PCP的流行 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌(app) 全基因组测序 生物信息学分析 耐药基因 系统进化分析

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装载温控双基因裂解质粒的App菌影检测方法研究

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作者 魏延宏 徐良 +5 位作者 李媛 孙颖 刘颖 孙铭君 宋桂敏 金天明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期104-106,共3页

为了提高对前期试验中制备的胸膜肺炎放线杆菌(App)菌影的检测效率,试验通过形态学鉴定、电镜扫描、PCR鉴定和间接ELISA法对App及其菌影进行检测。结果表明:PCR检测方法特异性显著,可检测AppⅠ、pMC-WK AppⅠ及其裂解情况,具有准确、灵... 为了提高对前期试验中制备的胸膜肺炎放线杆菌(App)菌影的检测效率,试验通过形态学鉴定、电镜扫描、PCR鉴定和间接ELISA法对App及其菌影进行检测。结果表明:PCR检测方法特异性显著,可检测AppⅠ、pMC-WK AppⅠ及其裂解情况,具有准确、灵敏、容易操作等优点。说明将菌影的形态学检查、电镜扫描、PCR和血清学检测相结合,可准确检验试验中不同阶段的App及其菌影。 展开更多

关键词 温控双基因 胸膜肺炎放线杆菌(app) 菌影 电镜扫描(SEM) PCR 间接ELISA

原文传递

S100A12在胸膜肺炎放线杆菌诱导猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子表达及吞噬中的作用

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作者 刘海瑶 李娜 +8 位作者 张晓光 李子亨 鲍春彤 姜合祥 刘柏君 肖佳孟 王俊 李丰阳 雷连成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4262-4273,共12页

试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)炎性细胞因子表达及吞噬中的作用。PAM细胞接种APP菌株后,用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点... 试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)炎性细胞因子表达及吞噬中的作用。PAM细胞接种APP菌株后,用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平;构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化,用MTT法检测其对PAM的细胞毒性,实时荧光定量PCR检测不同浓度(0、5、50和500 ng/mL)S100A12重组蛋白对PAM炎性细胞因子mRNA表达水平的影响;构建S100A12干扰质粒,用Western blotting、实时荧光定量PCR及流式细胞术检测其干扰效率及其对APP感染PAM后炎性细胞因子mRNA表达水平和细胞凋亡的影响;用平板计数法检测S100A12表达对APP的黏附侵袭及其在PAM细胞内存活的影响。结果表明,APP感染促进PAM中IL-6、IL-8、IL-18、IL-1β和TNF-α等炎性细胞因子表达的同时也促进S100A12的表达,且该表达随APP感染剂量增大及时间的延长均显著或极显著增加(P<0.05;P<0.01)。5、50和500 ng/mL重组蛋白S100A12对PAM均没有毒性。5和50 ng/mL的重组蛋白S100A12均可显著促进PAM中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-21和IL-5等炎性细胞因子的表达(P<0.05),而高浓度的S100A12重组蛋白则对上述炎性细胞因子表达无影响(P>0.05)。干扰质粒可成功阻断S100A12蛋白的表达,与转染shNC的对照组相比,在APP诱导下转染shS100A12干扰质粒的PAM中细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和IL-5的转录水平显著或极显著降低,且细胞凋亡率也显著或极显著增加(P<0.05;P<0.01)。进一步研究发现,干扰PAM中S100A12蛋白的表达可显著增强APP对PAM的黏附侵袭能力及其在PAM内的存活能力(P<0.05),相反,体外添加S100A12重组蛋白则显著抑制APP对PAM细胞的黏附侵袭及其在PAM内的存活(P<0.05)。以上研究表明,S100A12具有增强APP感染后PAM炎性细胞因子的表达、抑制APP诱导的PAM凋亡和降低APP对PAM� 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌(app) S100A12 猪肺泡巨噬细胞(PAM) 细胞因子

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胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅳ与多杀性巴氏杆菌OmpH基因的表位筛选及真核表达载体的构建

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作者 姚景丽 武静桥 +5 位作者 范真玮 张东超 赵微 陈婷 何敬文 金天明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2132-2140,共9页

为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素ApxⅣ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命... 为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素ApxⅣ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命名为New),并利用在线生物信息软件对其进行分析;分别将ApxⅣ、OmpH和New基因序列通过同源重组的方法构建至真核表达载体GV658,通过双酶切验证目的基因的大小;将新构建的3种重组质粒转染HEK293细胞,CCK-8试验评估其对细胞的安全性;RT-PCR和Western blot验证外源基因蛋白的转录和表达情况;免疫荧光(IFA)验证重组质粒中外源基因蛋白在细胞中的免疫定位。结果显示,New肽段具有较好的免疫源性,所构建的重组质粒GV658-ApxⅣ、GV658-OmpH和GV658-New双酶切结果与目的基因大小相符,可转染HEK293细胞并成功表达,且对HEK293细胞无明显损伤作用。本研究所构建的3种质粒等比混合,可用于制备APP与Pm二联亚单位疫苗。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ 多杀性巴氏杆菌 OmpH 表位 重组质粒

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猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的克隆及序列分析

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作者 沈萍 王喜军 《湖南农业科学》 2011年第8期154-156,161,共4页

为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMD18-T载体上,... 为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMD18-T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴定后,对阳性菌落进行序列测定并进行序列分析。结果表明:本研究得到的长沙(CS)株与血清3、5、7型同源性为99.4%～99.6%,与李氏放线杆菌、脲放线杆菌、马驹放线杆菌、荚膜放线杆菌同源性分别为97.8%、96.3%、97.3%、96.3%。该结果为APP分子流行病学调查、亲缘性关系的研究提供了依据,同时为APP的监控奠定了基础。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 16S RDNA基因 克隆及序列分析

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猪胸膜肺炎放线杆菌ZY株TfbA基因的克隆及序列分析 被引量：5

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作者 陆春萌 李明义 +1 位作者 刘新文 范伟兴 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第2期11-13,共3页

对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumon iae,App)生物I型ZY(App-1)株TfbA基因进行克隆和序列测定,结果表明:ZY株TfbA基因全长1 782 bp,编码594个氨基酸残基组成的多肽;对App ZY株与AP37(App-1)株、AP213(App-5)株和AP205(A... 对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumon iae,App)生物I型ZY(App-1)株TfbA基因进行克隆和序列测定,结果表明:ZY株TfbA基因全长1 782 bp,编码594个氨基酸残基组成的多肽;对App ZY株与AP37(App-1)株、AP213(App-5)株和AP205(App-7)株的TfbA基因进行分析比较,结果表明三型TfbA的核苷酸的同源性分别为99.8%、74.4%和72.2%;氨基酸的同源性分别为99.7%、64.1%和58.6%。系统发育进化树分析结果表明,ZY株与AP37株的亲缘关系最近。分析组成TfbA蛋白N-端重叠的16聚体多肽发现了3个有转铁蛋白结合活性的区域,长度为13或14个氨基酸。第1和第3个区域在App-1、App-5、App-7型间变异较大,同源性很低,第2个区域在App-1型和App-5型两者之间同源性高,几乎相同。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌ZY株 TIbA基因 进化树分析

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5a型ApxⅣA全基因的序列测序及其分子特征

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作者 赖玉兰 田明星 +2 位作者 曹三杰 文心田 黄勇 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期479-486,共8页

根据GenBank上公布的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型1型和血清型3型ApxⅣA基因全序列,设计了7对引物,对APP血清5a型毒株263株ApxⅣA基因全序列进行了分段PCR扩增和克隆。序列测定结果表明:该基因核酸序列全长5856 bp,比GenBank上... 根据GenBank上公布的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型1型和血清型3型ApxⅣA基因全序列,设计了7对引物,对APP血清5a型毒株263株ApxⅣA基因全序列进行了分段PCR扩增和克隆。序列测定结果表明:该基因核酸序列全长5856 bp,比GenBank上公布的血清1型和3型的相应基因核酸序列分别长438 bp和1287 bp,与其核酸和氨基酸序列同源率均分别为95.5%和87.6%;与GenBank刚公布的血清5b型毒株L20株的核酸和氨基酸序列的同源性均为98.2%。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有较强的亲水性,共有66个抗原决定簇,存在较多的可能性功能位点。 展开更多

关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 血清5a型 ApxⅣA基因 生物信息学分析

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