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长链非编码RNA AURKAPS1通过上调RAC1活化细胞外信号调节激酶信号通路促进肝癌进展的机制研究
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作者 赵静 樊洁净 +2 位作者 冯娟娟 郑守华 李建华 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期1864-1868,共5页
目的探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制,为肝癌的防治提供新思路。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测;将肝癌细胞系随机分为空白组,AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组... 目的探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制,为肝癌的防治提供新思路。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测;将肝癌细胞系随机分为空白组,AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组,其中空白组表示肝癌细胞不进行任何干预,AURKAPS1组中的肝癌细胞仅接受AURKAPS1干预,RAC1组为转染RAC1的肝癌细胞,AURKAPS1+RAC1组表示同时转染AURKAPS1和RAC1,采用实时荧光定量PCR技术检测4组细胞中RAC1的表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术和Transwell转移法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移能力;蛋白质免疫印迹法测定各组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)和RAC1蛋白表达;间接免疫荧光检测细胞中ERK的表达。组间独立样本采用t检验,多组间进行F检验、LSD检验。结果肝癌组织中RAC1 mRNA的表达量(0.98±0.08)显著高于正常人肝上皮细胞组织(0.72±0.03),差异有统计学意义(t=30.431,P<0.05);AURKAPS1组(1.03±0.10)、RAC1组(1.05±0.09)及AURKAPS1+RAC1组(1.16±0.07)的RAC1 mRNA的表达量均高于空白组(1.16±0.07),AURKAPS1+RAC1组的RAC1 mRNA表达量也显著高于分别转染AURKAPS1、RAC1的肝癌细胞组,差异有统计学意义(F=5.991,P<0.05);CCK-8法检测肝癌细胞的增殖,随着时间的增加,除空白组,其余3组的吸光度(A)_(450)值均增加,96 h后AURKAPS1+RAC1组的A_(450)值显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F_(0 h)=2.941,F_(24 h)=26.454,F_(48 h)=104.60,F_(72 h)=319.555,F_(96 h)=564.65)P<0.05;AURKAPS1组[(5.89±3.82)%]、RAC1组[(5.81±3.85)%]及AURKAPS1+RAC1组[(4.23±4.15)%]的总凋亡率均低于空白组[(6.75±3.36)%],且AURKAPS1+RAC1组的总凋亡率显著低于RAC1、AURKAPS1组,F=77.369,P<0.05;AURKAPS1组(131.24±9.25)、RAC1组(129.87±9.41)及AURKAPS1+RAC1组(153.62±7.48)的穿膜细胞数均高于空白组(117.64±10.53),且AURKAPS1+RAC1组的穿膜细胞数显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F=91.118,P<0.05);Western blo 展开更多
关键词 长链非编码RNA aurkaps1 Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物1 细胞外信号调节激酶信号通路 肝癌细胞 实时荧光定量聚合酶链反应
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长链非编码RNA AURKAPS1调控肝癌细胞增殖、运动迁移能力的研究
2
作者 李建华 望鑫 +4 位作者 段彩纹 范颖浩 郑守华 赵海霞 邱新光 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期1853-1857,共5页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)AURKAPS1对肝癌细胞增殖、运动迁移能力的影响。方法采用慢病毒包被质粒感染肝癌细胞构建AURKAPS1过表达细胞系,实时荧光定量PCR检测慢病毒感染后的AURKAPS1的表达量。将肝癌细胞系随机分为对照组,AURKAPS... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)AURKAPS1对肝癌细胞增殖、运动迁移能力的影响。方法采用慢病毒包被质粒感染肝癌细胞构建AURKAPS1过表达细胞系,实时荧光定量PCR检测慢病毒感染后的AURKAPS1的表达量。将肝癌细胞系随机分为对照组,AURKAPS1组(对照组无任何干预,AURKAPS1组仅接受AURKAPS1干预);采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、克隆形成和流式细胞分选方法体外检测过表达AURKAPS1对肝癌细胞增殖能力的影响;采用皮下注射裸鼠荷瘤实验体内检测过表达AURKAPS1对肝癌细胞增殖能力的影响。划痕实验体外检测过表达AURKAPS1对肝癌细胞运动能力的影响。所得数据组间采用独立样本t检验及单因素方差分析,多组间采用重复测量方差分析、LSD检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果过表达AURKAPS1后,肝癌细胞HepG2与BEL-7402细胞增殖都有增强(F_(HepG2)=205.593,P<0.001,η^(2)=0.934,F_(BEL-7402)=161.641,P<0.001,η^(2)=0.976);过表达AURKAPS1后,肝癌细胞HepG2和BEL-7402的克隆数均高于对照组(t_(BEL7402)=-9.806,P<0.01;t_(HepG2)=-14.425,P<0.01),AURKAPS1组BEL-7402与HepG2的G2和S期细胞比例相较于对照组明显高于G1期(F_(BEL-7402)=93.091,P<0.01,F_(HepG2)=360.071,P<0.001);裸鼠荷瘤结果显示肝癌细胞AURKAPS1组重量高于对照组(t=-2.427,P<0.05);AURKAPS1组HepG2和BEL-7402细胞平均划痕距离低于对照组(F_(HepG2)=125.472,P<0.001;F_(BEL-7402)=4465.901,P<0.001)。结论过表达AURKAPS1促进肝癌细胞生长增殖、促进肝癌细胞周期从G_(1)期向G_(2)和S期转变;增强肝癌细胞运动、迁移的能力。 展开更多
关键词 肝癌 假基因 aurkaps1 增殖 迁移
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