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长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析
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作者 罗义勇 刘卫红 +3 位作者 柳陈坚 毕薇 张克勤 杨金奎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期213-222,共10页
为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异... 为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异表达基因,即AlATP7、AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88,应用DNA walking技术对它们两侧的未知序列进行克隆。DNA测序和Blast搜索表明,AlATP7基因开放阅读框为712 bp,含4个外显子和3个内含子,编码169个氨基酸;AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88基因未克隆到全长序列,5′末端还有200-300 bp才到达翻译起始密码子ATG;在这些DNA序列中,AlCIT1基因长1 214 bp,含1个内含子,编码386个氨基酸;AlGLUT基因长1 308 bp,含1个内含子,编码417个氨基酸;AlHSP88基因长2 087bp,含2个内含子,编码628个氨基酸。与其他丝状真菌的氨基酸序列同源性比对发现,AlATP7和线粒体ATP合酶D亚基、Al-CIT1和柠檬酸合成酶、AlGLUT和主要易化子超家族(MFS)类型葡萄糖转运子、AlHSP88和热休克蛋白HSP88分别具有很高的同源性。同时,还对4个DCFs胁迫差异表达基因的系统发育进行分析。基于这些蛋白功能的文献报道和前期的研究,推测A.longipes存在着一种新的DCFs抗性机制:A.longipes利用MFS类型葡萄糖转运子将DCFs排除到细胞外解毒,线粒体ATP合酶和柠檬酸合成酶参与能量供给,而热休克蛋白AlHSP88可能在该机制中促进一些重要蛋白的正确折叠和修复过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 长柄链格孢 线粒体 atp合酶D亚基 柠檬酸 主要易化子超家族类型葡萄糖转运子 热休克蛋白HSP88
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龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析 被引量:21
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作者 赖呈纯 赖钟雄 +2 位作者 方智振 林玉玲 姜顺日 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期3392-3401,共10页
【目的】克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因(mitochondrial F1-ATPase beta subunit gene),并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE法,通过T/A克隆测序,获得龙... 【目的】克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因(mitochondrial F1-ATPase beta subunit gene),并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE法,通过T/A克隆测序,获得龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因全长序列;随后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达规律。【结果】成功克隆龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因完整cDNA序列(GenBank登录号:FJ222749),该序列全长2099bp,由1677bp核苷酸组成的ORF,编码558个氨基酸。该基因与其它植物的线粒体ATP合酶β亚基基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面相似性较高。对来源于动、植物的28条线粒体ATP合酶β亚基基因编码区序列所构建的进化树分析表明,由线粒体ATP合酶β亚基基因编码区序列所建立的系统关系树与真实的动、植物进化基本一致,龙眼处在双子叶植物中,由于该基因在龙眼同科属的植物中为首次克隆,所以有自己单独的分支。qRT-PCR结果分析表明,随着龙眼体胚的发育,线粒体ATP合酶β亚基基因转录水平逐渐升高,到球形胚阶段达到最高,而后又急剧下降,到鱼雷形胚阶段降到最低,子叶形胚阶段略有升高。【结论】龙眼线粒体ATP合酶β亚基基因与其它植物相应序列具有较高同源性,在龙眼体胚发育过程中,以球形胚阶段的表达最高。 展开更多
关键词 龙眼 体细胞胚胎发生 线粒体atp合酶β亚基基因 基因克隆 实时荧光定量PCR
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达格列净通过改善线粒体功能减轻2型糖尿病小鼠及高糖诱导的血管内皮细胞损伤 被引量:18
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作者 周小莉 路晰媗 +2 位作者 梁海艳 赵丹 雷红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期425-433,共9页
目的:探讨达格列净对2型糖尿病小鼠胸主动脉内皮细胞损伤及高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的抑制作用及其分子机制。方法:(1)将20只2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组和达格列净组,另取10只正常db/m小鼠作为对照组。饲养40 d... 目的:探讨达格列净对2型糖尿病小鼠胸主动脉内皮细胞损伤及高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的抑制作用及其分子机制。方法:(1)将20只2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组和达格列净组,另取10只正常db/m小鼠作为对照组。饲养40 d后麻醉处死,迅速摘取眼球取血,分离血清,并收集胸主动脉组织。HE染色观察胸主动脉组织形态学改变,Western blot法检测小鼠胸主动脉组织中ATP合酶α亚基(ATP5A1)、内皮素1(ET-1)和前列环素(PGI_(2))蛋白表达水平。(2)将HUVECs分为对照组、DMSO组、高糖组和高糖+达格列净组;采用活性氧(ROS)荧光探针和线粒体ATP荧光探针检测HUVECs中ROS及线粒体ATP荧光强度;采用免疫细胞化学和Western blot检测HUVECs中ATP5A1、ET-1和PGI_(2)蛋白表达水平。结果:达格列净可显著减轻db/db小鼠胸主动脉组织损伤;与高糖组相比,达格列净治疗后HUVECs中ROS荧光强度显著降低,线粒体ATP荧光强度显著升高(均P<0.01);免疫细胞化学和Western blot结果显示,达格列净治疗后ATP5A1和PGI_(2)蛋白表达水平显著升高,ET-1蛋白表达水平显著降低(均P<0.01);ATP5A1过表达质粒转染后,HUVECs中ATP5A1和PGI_(2)蛋白表达水平显著升高,ET-1表达水平显著降低(均P<0.01)。结论:达格列净减轻2型糖尿病小鼠胸主动脉内皮细胞损伤及高糖诱导的HUVECs损伤,其机制可能与调控ATP5A1表达、改善线粒体功能有关。 展开更多
关键词 达格列净 血管内皮损伤 2型糖尿病 atp合酶α亚基 线粒体
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ATP合成相关基因在小麦BNS不育系育性转换中的差异表达 被引量:7
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作者 王震 范晓静 +3 位作者 张淼 张芳凝 李桂东 马翎健 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1501-1505,共5页
为了探讨ATP合酶α亚基和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)与温敏雄性不育系BNS育性的联系,利用荧光实时定量PCR方法,在花药发育的4个重要时期(四分体期、单核期、二核期和三核期),定量检测ATP合酶α亚基和APRT相关基因在不育及可育条件下... 为了探讨ATP合酶α亚基和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)与温敏雄性不育系BNS育性的联系,利用荧光实时定量PCR方法,在花药发育的4个重要时期(四分体期、单核期、二核期和三核期),定量检测ATP合酶α亚基和APRT相关基因在不育及可育条件下花药中的mRNA表达水平。不育条件下,ATP合酶α亚基基因从四分体到二核期表达量持续下降,与可育株相比在单核期表达量显著下降;APRT1在4个时期的表达量低于其在相应可育条件下的表达量,而APRT2基因在BNS不育和可育条件下维持较低的表达水平。APRT相关基因表达量在三核期均有较显著提高,且可育条件下比不育条件下提高更明显。因此认为,ATP合酶α亚基基因与BNS育性转换密切正相关,APRT基因在三核期转录水平的变化与BNS育性转换有一定关系。 展开更多
关键词 小麦 BNS雄性不育 atp合酶α亚基 腺嘌呤磷酸核糖基转移
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血清线粒体ATP合酶C亚基水平在脓毒症患者心功能状态及预后评估中的价值 被引量:7
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作者 孙莹莹 张瑶璐 +6 位作者 张璐瑶 赵光举 洪广亮 李萌芳 吴斌 支绍册 卢中秋 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第27期2140-2146,共7页
目的探讨血清线粒体ATP合酶C亚基水平在脓毒症患者心功能状态及预后评估中的价值。方法前瞻性纳入2017年1月1日至2018年12月31日在温州医科大学附属第一医院急诊重症监护室(EICU)收住的165例脓毒症患者,男103例(62.4%),女62例(37.6%),年... 目的探讨血清线粒体ATP合酶C亚基水平在脓毒症患者心功能状态及预后评估中的价值。方法前瞻性纳入2017年1月1日至2018年12月31日在温州医科大学附属第一医院急诊重症监护室(EICU)收住的165例脓毒症患者,男103例(62.4%),女62例(37.6%),年龄(63±14)岁。使用人ATP合成酶脂质结合蛋白(ATP5G1)ELISA试剂盒检测患者入EICU后24 h内的血清ATP合酶C亚基水平。对照组为健康体检者,共45例。收集患者临床资料,根据左室射血分数(LVEF)及临床结局不同进行分组,比较各组之间临床指标的差异,评价血清ATP合酶C亚基水平对脓毒症患者心功能状态及预后评估的价值,分析脓毒症患者心功能状态及预后的独立危险因素。结果脓毒症组血清ATP合酶C亚基水平高于对照组[(116±62)μg/L比(77±34)μg/L,P<0.001]。脓毒症心功能障碍组血清ATP合酶C亚基水平高于心功能正常组(P<0.001),死亡组血清ATP合酶C亚基水平高于存活组(P<0.05)。绘制ATP合酶C亚基、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、B型钠尿肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、左房舒张末期内径、左室收缩末期内径、左室舒张末期容量、左室收缩末期容量受试者工作曲线(ROC)来评估脓毒症患者心功能障碍,曲线下面积(AUC)分别为0.928、0.661、0.837、0.814、0.703、0.831、0.794、0.765,其中ATP合酶C亚基截断值、灵敏度、特异度分别为139.44 ng/L、100%、75.2%。logistic回归分析得出ATP合酶C亚基、BNP、左房舒张末期内径是脓毒症患者心功能障碍的独立危险因素(均P<0.05)。绘制年龄、尿素氮(BUN)、ATP合酶C亚基、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ评分(APACHEⅡ)、简化急性生理评分(SAPSⅡ)ROC曲线来评估脓毒症患者预后,其AUC分别为0.719、0.772、0.656、0.868、0.884,其中ATP合酶C亚基的截断值、灵敏度、特异度分别为131.24 ng/L、61.9%、68.7%。logistic回归分析得出年龄、BUN、ATP合酶C亚基、发生心功能障� 展开更多
关键词 脓毒症 心功能障碍 atp合酶C亚基 预后
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华支睾吸虫F_0-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析 被引量:5
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作者 周红娟 胡旭初 +5 位作者 胡凤玉 徐劲 马长玲 郑小凌 陈晓湘 余新炳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期390-393,共4页
目的对华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基(CsF0-ATP-synt_B)基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。方法以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有F0-ATP合酶b亚基基因的质粒为模板,扩增该基因(去除线粒体靶向序列的成熟肽基因),将其克隆到原核... 目的对华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基(CsF0-ATP-synt_B)基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。方法以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有F0-ATP合酶b亚基基因的质粒为模板,扩增该基因(去除线粒体靶向序列的成熟肽基因),将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-!-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经亲和层析获得的纯化表达产物免疫SD大鼠,制备抗血清。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的免疫原性。结果华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基成熟肽基因的编码区含813个碱基,编码271个氨基酸,相对分子质量(Mr)为31171.9。经亲和层析获得的重组蛋白可被其免疫的大鼠血清识别。结论华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 F0-atp合酶b亚基 基因克隆 原核表达 免疫原性
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ATP合酶C亚基在缺血性心脏病患者血清中的表达及临床意义 被引量:4
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作者 黄大伟 高子弟 +5 位作者 林国 郭燕峰 林俊亮 陈时强 张孝兵 黄锡通 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1322-1326,共5页
目的探讨ATP合酶C亚基(Csub)在缺血性心脏病(IHD)患者血清中的表达及临床意义。方法选择2019年5月至2020年12月玉环市人民医院急诊科收治的101例胸痛患者,其中急性心肌梗死(AMI)59例,不稳定型心绞痛(UAP)42例;同时选择体检中心年龄匹配... 目的探讨ATP合酶C亚基(Csub)在缺血性心脏病(IHD)患者血清中的表达及临床意义。方法选择2019年5月至2020年12月玉环市人民医院急诊科收治的101例胸痛患者,其中急性心肌梗死(AMI)59例,不稳定型心绞痛(UAP)42例;同时选择体检中心年龄匹配的50例健康体检者作为健康对照(HC)。所有患者均于急诊抢救室药物及介入措施干预前完成抽血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Csub含量,分析Csub与临床特征之间的关系,同时用电化学发光法检测血中超敏心肌肌钙蛋白T(hs-cTnT)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),评估Csub、hs-cTnT及CK-MB对IHD的早期诊断价值。结果3组受试者年龄、性别、既往史等基线资料均衡,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、CK-MB、hs-cTnT及B型钠尿肽(BNP)差异具有统计学意义,其余生化指标差异均无统计学意义。AMI组及UAP组Csub含量均明显高于HC组〔8.96%(6.37%,11.53%)、4.27%(3.23%,6.49%)比1.56%(1.07%,2.33%),均P<0.01〕,且心肌缺血更为严重的AMI组Csub含量较UAP组进一步升高〔8.96%(6.37%,11.53%)比4.27%(3.23%,6.49%),P<0.01〕。59例AMI患者均接受了经皮冠状动脉介入治疗(PCI),根据Csub中位数将AMI患者分为高于中位数组(29例)和低于中位数组(30例),结果显示,两组冠状动脉病变支数、支架植入数量及术后用药情况差异均无统计学意义。ROC曲线分析显示,Csub对IHD的诊断效能〔曲线下面积(AUC)=0.98,95%可信区间(95%CI)为0.95~1.00〕略低于hs-cTnT(AUC=0.99,95%CI为0.99~1.00),却高于CK-MB(AUC=0.94,95%CI为0.89~0.99)。Csub最佳截断值为4.74%时,诊断IHD的敏感度为100%,特异度为87.0%。结论Csub在IHD患者血清中显著升高,且随着缺血程度的加剧进一步升高,其可作为诊断以及评估心肌缺血发展的新型诊断标志物。 展开更多
关键词 缺血性心脏病 atp合酶C亚基 超敏肌钙蛋白
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ATP合酶β亚基功能与疾病 被引量:3
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作者 袁李佳龙 秦旭平 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第4期464-470,共7页
ATP合酶,又称F_1F_0-ATP合成酶,是位于线粒体内膜、叶绿体类囊体膜和光合菌质膜上的参与呼吸链氧化磷酸化的最后环节。其结构包含F_1和F_0两个亚单位,共同作用于ATP的分解和合成。ATP合酶β亚基是F_1F_0-ATP合成酶F_1亚单位的重要组件,... ATP合酶,又称F_1F_0-ATP合成酶,是位于线粒体内膜、叶绿体类囊体膜和光合菌质膜上的参与呼吸链氧化磷酸化的最后环节。其结构包含F_1和F_0两个亚单位,共同作用于ATP的分解和合成。ATP合酶β亚基是F_1F_0-ATP合成酶F_1亚单位的重要组件,该亚基包含ATP合成和水解所需的催化位点,其功能好坏与疾病发生直接相关。本文就ATP合酶β亚基功能与糖尿病、肿瘤、肥胖症等疾病的关系作一综述。 展开更多
关键词 atp合酶β亚基 旋转催化 糖尿病 肿瘤 肥胖
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印楝素抑制基因转录导致棉铃虫幼虫蜕皮变态异常的分子机理 被引量:2
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作者 常彦鹏 张博 +3 位作者 耿梓宸 魏纪珍 安世恒 赵文丽 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期550-559,共10页
印楝素是一种对鳞翅目如棉铃虫Helicoverpa armigera有良好防治效果的植物源农药。本研究采用室内毒力测定方法,荧光定量PCR(qRT-PCR)和代谢产物差异分析等方法,分析了饲喂印楝素后导致棉铃虫幼虫死亡的分子机理。首先统计分析了5龄和6... 印楝素是一种对鳞翅目如棉铃虫Helicoverpa armigera有良好防治效果的植物源农药。本研究采用室内毒力测定方法,荧光定量PCR(qRT-PCR)和代谢产物差异分析等方法,分析了饲喂印楝素后导致棉铃虫幼虫死亡的分子机理。首先统计分析了5龄和6龄棉铃虫幼虫饲喂不同浓度的印楝素后的表型、体质量、死亡率和化蛹率,结果表明印楝素导致棉铃虫幼虫体质量降低、死亡率升高和化蛹率降低。随后,通过qRT-PCR、酶活和内源物质含量测定,明确了印楝素抑制海藻糖的生物合成和分解,抑制20E下游基因转录表达,并降低了ATP含量。本研究结果表明印楝素通过抑制棉铃虫海藻糖的生物合成和分解,抑制20E信号通路基因转录,降低ATP产量,导致幼虫蜕皮变态失败,最终导致幼虫死亡。本研究对进一步探索印楝素导致棉铃虫死亡的机制和防治有害生物具有重要意义。 展开更多
关键词 棉铃虫 印楝素 海藻糖 atp合酶α亚基 20E通路基因
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棉花3种抗逆相关基因对苗蚜为害的应答反应 被引量:3
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作者 张帅 崔金杰 +2 位作者 吕丽敏 王春义 雒珺瑜 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期215-221,共7页
使用荧光定量PCR方法,分析了中棉所41、中棉所44、中棉所49和中棉所79等4种不同遗传背景的棉花品种在受到苗蚜为害时,编码类受体蛋白激酶(LRR-RLK)、ATP合酶β亚基(Atpβ)和捕光蛋白复合物Ⅱ(Lhcb2)等3种代谢相关基因的变化情况。在4种... 使用荧光定量PCR方法,分析了中棉所41、中棉所44、中棉所49和中棉所79等4种不同遗传背景的棉花品种在受到苗蚜为害时,编码类受体蛋白激酶(LRR-RLK)、ATP合酶β亚基(Atpβ)和捕光蛋白复合物Ⅱ(Lhcb2)等3种代谢相关基因的变化情况。在4种棉花品种中,LRR-RLK的表达量变化情况差异较大,该类LRR-RLK的表达量变化与蚜虫的为害有关;Lhcb2基因在中棉所41的子叶和真叶中、中棉所49的真叶中、中棉所44和中棉所79的子叶中对棉蚜的为害应答比较强烈;Atpβ基因在中棉所41和中棉所49真叶中、中棉所44子叶和真叶中应答反应比较强烈,在中棉所79中应答反应较弱。以上试验结果暗示不同的棉花品种应对苗蚜为害可能存在不同的代谢途径。 展开更多
关键词 棉花 苗蚜 代谢相关基因 atp合酶β亚基(atpβ) 捕光蛋白复物Ⅱ 表达量
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华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位 被引量:2
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作者 胡旭初 周红娟 +6 位作者 胡凤玉 马长玲 赵俊红 黄灿 郑小凌 徐劲 余新炳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期95-101,共7页
目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)的虫体组织定位,并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。方法用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠,取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色,观察CsATP-synt_B蛋白在华... 目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)的虫体组织定位,并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。方法用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠,取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色,观察CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫组织中的分布。根据生物信息学预测的CsATP-synt_B线粒体转运序列(MTS序列)和核定位序列(NLS序列)位置,设计4组引物[CsATP-synt_B全长序列,以及3个缺失突变体(MTS-缺失线粒体转运序列、NLS-缺失核定位序列、MTS-NLS-线粒体-核定位双缺失)引物],扩增出全长基因和3个突变体基因,构建重组质粒pEGFP-N1-CsATP-synt_B1-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B30-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B(1-238)+(257-300)及pEGFP-N1-CsATP-synt_B(30-238)+(257-300)。将这些重组质粒用阳离子脂质体转染HeLa细胞,48h后用激光共聚焦显微镜观察CsATP-synt_B全长基因和3个突变体在HeLa细胞的表达和亚细胞定位。结果CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫中分布较为广泛,主要分布在腹吸盘、卵巢、卵黄腺和皮层。绿色荧光蛋白GFP表明CsATP-synt_B全长序列表达于线粒体或细胞核,线粒体转运序列缺失突变体表达于细胞核,核定位序列缺失突变体表达于线粒体,双缺失突变体仅表达于胞浆。结论CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫的分布与线粒体的分布一致,主要集中在能量代谢较旺盛的组织部位。CsATP-synt_B蛋白既可进入线粒体,也可进入细胞核,理论预测的定位序列得到证实。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 atp合酶b亚基 免疫组织化学 亚细胞定位 靶向序列
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淡色库蚊ATP合酶B亚基基因克隆和序列分析及其与溴氰菊酯抗性的关系 被引量:2
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作者 王卫杰 刘新颖 +4 位作者 方福瑾 过琴 王贺 齐莉莉 赵文爱 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期900-905,共6页
【目的】克隆淡色库蚊Culex pipiens pallens ATP合酶B亚基基因编码区序列,并进行生物信息学分析,研究其与溴氰菊酯抗性关系。【方法】通过PCR方法扩增ATP合酶B亚基基因编码区序列;利用生物信息学网站在线分析工具,预测ATP合酶B亚基基... 【目的】克隆淡色库蚊Culex pipiens pallens ATP合酶B亚基基因编码区序列,并进行生物信息学分析,研究其与溴氰菊酯抗性关系。【方法】通过PCR方法扩增ATP合酶B亚基基因编码区序列;利用生物信息学网站在线分析工具,预测ATP合酶B亚基基因编码蛋白的理化性质和功能特征;通过实时定量PCR方法比较ATP合酶B亚基基因在室内筛选的淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系中的表达,并在现场种群溴氰菊酯敏感和抗性个体中做进一步验证。【结果】成功克隆淡色库蚊ATP合酶B亚基基因编码区序列(Gen Bank登录号:KY783434),长717 bp,编码238个氨基酸。生物信息学分析表明,其编码蛋白理论相对分子量为26.96 k D,等电点为8.97,在第70-231位氨基酸具有ATP合酶B亚基结构域,未发现信号肽和跨膜区。实时定量PCR结果显示,ATP合酶B亚基基因在室内筛选的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和现场种群溴氰菊酯抗性个体中表达量均上调。【结论】本研究获得了淡色库蚊ATP合酶B亚基基因编码区序列,进行了生物信息学分析,并证实其在溴氰菊酯抗性个体中高表达,为进一步研究该基因在蚊抗药性中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 淡色库蚊 atp合酶B亚基 抗药性 溴氰菊酯 生物信息学
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华支睾吸虫ATP合酶b亚基模拟亚细胞定位与细胞周期的关系 被引量:2
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作者 周红娟 余新炳 +6 位作者 徐劲 胡凤玉 黄灿 赵俊红 马长玲 郑小凌 胡旭初 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期325-329,共5页
目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)核定位序列(NLS)介导该蛋白进入细胞核与细胞周期的关系,及该蛋白对自身和宿主同源基因表达的影响。方法将已构建的CsATP-synt_B与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒(pEGFP-N1-CsATP-synt_B)... 目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)核定位序列(NLS)介导该蛋白进入细胞核与细胞周期的关系,及该蛋白对自身和宿主同源基因表达的影响。方法将已构建的CsATP-synt_B与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒(pEGFP-N1-CsATP-synt_B)转染Hela细胞,转染细胞经同步化处理后,在激光共聚焦显微镜下观察在不同细胞周期相,细胞不同部位的荧光分布。流式细胞技术检测该融合蛋白表达量的变化,并通过半定量RT-PCR分析不同细胞周期相CsATP-synt_B和Hela细胞同源基因的表达。结果转染细胞经同步化处理后,流式细胞检测结果显示,空载体pEGFP-N1在G0/G1期Hela细胞中的表达量明显下降,而pEGFP-N1-CsATP-synt_B在该时期表达量呈上升趋势;在其他细胞周期时相,两者的荧光表达量的变化趋势相似。显微镜观察发现,在G0/G1期、S期和G2/M期CsATP-synt_B集中在线粒体表达,G1/S期细胞核内见绿色荧光,且多数细胞的绿色荧光集中见于核仁。在不同的细胞周期,半定量RT-PCR分析结果显示,该重组蛋白进入细胞核后,目的基因CsATP-synt_B和人源性ATP-synt_B(Ho-moATP-synt_B)mRNA的表达均呈上升趋势,CsATP-synt_B上升幅度较大,但两者的表达变化趋势一致。结论 CsATP-synt_B在G1/S期进入细胞核,受细胞能量需求和细胞周期的调控。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 atp合酶b亚基 细胞同步化 亚细胞定位
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刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 曹蕾 邢朝斌 +2 位作者 陈龙 梁能松 何闪 《安徽农业科学》 CAS 2012年第2期646-647,654,共3页
[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-... [目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262~271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。 展开更多
关键词 刺五加 atp合酶β亚基 克隆 序列分析
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Csub、BNP对急性心肌梗死患者PCI术后主要不良心血管事件的预测价值
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作者 黄锡通 黄大伟 +5 位作者 林俊亮 高子弟 陈时强 张孝兵 张强 陈苗 《心电与循环》 2023年第2期122-125,130,共5页
目的探讨血清ATP合酶C亚基(Csub)、脑钠肽(BNP)对急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2019年5月至2020年12月在玉环市人民医院行急诊PCI的59例AMI患者为研究对象,术后1年内发... 目的探讨血清ATP合酶C亚基(Csub)、脑钠肽(BNP)对急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2019年5月至2020年12月在玉环市人民医院行急诊PCI的59例AMI患者为研究对象,术后1年内发生MACE 15例(MACE组),未发生MACE 44例(无MACE组)。比较有、无MACE患者临床资料,分析PCI术后发生MACE的影响因素,同时采用ROC曲线分析这些影响因素对PCI术后发生MACE的预测效能。结果MACE组年龄、血清BNP水平均明显大于无MACE组(均P<0.05);两组患者在性别、发病至就诊时间、左心室射血分数、呼气末二氧化碳、高血压、糖尿病、ST段抬高心肌梗死、血栓抽吸、Csub、肌钙蛋白T、D-二聚体、血肌酐、中性粒细胞与淋巴细胞计数比值、Gensini评分、冠状动脉植入支架总长度等方面比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。将上述P<0.05的2个因素(年龄、BNP)以及P值接近于0.05的2个因素(Csub、冠状动脉植入支架总长度)纳入Cox多因素回归分析,结果显示Csub(HR=1.003)、BNP(HR=1.002)是AMI患者PCI术后发生MACE的影响因素(均P<0.05)。Csub、BNP及两者联合预测AMI患者PCI术后发生MACE的AUC、灵敏度、特异度分别为0.664、0.733、0.705,0.799、0.733、0.841以及0.779、0.533、0.955。结论行急诊PCI的AMI患者早期血清Csub和(或)BNP水平越高,术后1年内发生MACE的风险越大。 展开更多
关键词 atp合酶C亚基 脑钠肽 急性心肌梗死 经皮冠状动脉介入 主要不良心血管事件
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淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因ATP合酶g亚基cDNA克隆与序列分析 被引量:1
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作者 刘新颖 王卫杰 +3 位作者 过琴 王贺 齐莉莉 赵文爱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期757-761,共5页
目的克隆淡色库蚊(Culex pipiens pallens)ATP合酶g亚基基因编码区序列并进行生物信息学分析,比较其在溴氰菊酯抗性品系和敏感品系中的表达方法利用PCR方法扩增ATP合酶g亚基基因编码区序列。利用生物信息学分析工具,预测ATP合酶g亚基基... 目的克隆淡色库蚊(Culex pipiens pallens)ATP合酶g亚基基因编码区序列并进行生物信息学分析,比较其在溴氰菊酯抗性品系和敏感品系中的表达方法利用PCR方法扩增ATP合酶g亚基基因编码区序列。利用生物信息学分析工具,预测ATP合酶g亚基基因编码蛋白的理化性质、蛋白结构域、跨膜区、信号肽和亚细胞定位;对淡色库蚊和其他物种的ATP合酶g亚基进行氨基酸序列多重比对,并构建系统发育树。通过实时定量PCR检测比较ATP合酶g亚基基因在淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系中的表达。结果克隆出长306bp的淡色库蚊ATP合酶g亚基基因编码区序列(GenBank登录号:KY783435),该基因编码101个氨基酸。生物信息学分析ATP合酶g亚基基因编码蛋白理论分子质量单位(Mr)为11×10~3,等电点为9.56,在第6-98位氨基酸具有ATP合酶g亚基结构域,未发现信号肽和跨膜区,亚细胞定位预测以线粒体表达量最多(占39.1%)。实时定量PCR检测ATP合酶g亚基基因在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系中表达量的3.14倍。结论获得淡色库蚊ATP合酶g亚基基因编码区序列,并进行了生物信息学分析,证实该基因在溴氰菊酯抗性品系中高表达。 展开更多
关键词 atp合酶g亚基 淡色库蚊 抗药性 溴氰菊酯 生物信息学
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Cloning and Sequence Analysis of ATPase Beta Subunit Gene from Eleutherococcus senticosus
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作者 曹蕾 邢朝斌 +2 位作者 陈龙 梁能松 何闪 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第12期1787-1789,1841,共4页
[Objective] This study aimed to clone and analyze the cDNA of ATPase β subunit gene from Eleutherococcus senticosus.[Method] A pair of homologous primers was designed according to the chloroplast ATPase β subunit ge... [Objective] This study aimed to clone and analyze the cDNA of ATPase β subunit gene from Eleutherococcus senticosus.[Method] A pair of homologous primers was designed according to the chloroplast ATPase β subunit gene sequences of the known species;then the gene cDNA of E.senticosus were amplified by RT-PCR and compared with that of the known species;its structure was predicted finally.[Result] 1 099 bp of ATPase beta subunit cDNA of E.senticosus which encodes 366 amino acids was amplified by RT-PCR.Sequence comparison and structure prediction showed that amino acids encoded by the ATPase beta subunit gene of E.senticosus shared the highest homology,up to 96.41% with that of Oryza sativa.In the secondary structure,the protein contained 171 alpha helixes accounting for 46.72%,53 extended strands accounting for 14.48%,27 beta sheets accounting for 7.38% and 115 random coils which took up 31.42%.The amino acids 262-271 were the symbolic site of ATPase β subunit.The whole peptide chain had no obvious hydrophobic region and was primarily confirmed as a hydrophilic protein.[Conclusion] The cNDA of ATPase β subunit gene cloned from E.senticosus in this study will provide reference for learning the effect of energy metabolism on secondary metabolism,structure and function of ATPase in E.senticosus. 展开更多
关键词 Eleutherococcus senticosus atpase β subunit CLONING Sequence analysis
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ATP5B原核表达和单克隆抗体的制备及其鉴定
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作者 李时孟 赵丽纯 +2 位作者 乔璐 何成彦 刘卓 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期184-189,220,共7页
目的:制备高纯度ATP合酶β亚基(ATP5B)单克隆抗体并进行鉴定,为其后续研究奠定基础。方法:应用PCR法扩增ATP5B基因,克隆入pET28a载体中并转入大肠杆菌BL21 (DE3)。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达并用镍亲和层析柱纯化... 目的:制备高纯度ATP合酶β亚基(ATP5B)单克隆抗体并进行鉴定,为其后续研究奠定基础。方法:应用PCR法扩增ATP5B基因,克隆入pET28a载体中并转入大肠杆菌BL21 (DE3)。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达并用镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白纯度。用纯化的融合蛋白免疫3只雌性Balb/C小鼠,取小鼠尾静脉血,间接酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中ATP5B抗体效价。取血清效价最高的免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞混合培养建立杂交瘤细胞,采用间接ELISA法筛选融合细胞并行单克隆化培养,对阳性细胞进行核型分析。取12周龄Balb/C小鼠,腹腔注射杂交瘤细胞制备腹水模型,收集腹水,间接ELISA法检测效价,SDS-PAGE检测抗体纯度,应用ELISA法检测抗体亚型。结果:PCR扩增后得到1 455bp的特异性条带,连接pET28a空载体获得重组pET28a/ATP5B载体。IPTG诱导转化的菌液表达目的蛋白,SDS-PAGE检测,在相对分子质量为51 000处出现明显的诱导蛋白条带。间接ELISA法检测免疫小鼠静脉血,血清效价最高达1∶64 000。杂交瘤细胞染色体核型分析,染色体总数约为骨髓瘤细胞与正常小鼠脾细胞之和。采用杂交瘤细胞株制备小鼠腹水,抗体最高效价为1∶240 000,杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的亚型为IgG1。结论:通过克隆、表达和纯化重组蛋白,成功制备出抗ATP5B蛋白单克隆抗体。 展开更多
关键词 atp合酶β亚基 单克隆抗体 原核表达 蛋白纯化
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酿酒酵母ATP合酶δ亚基融合蛋白的构建、表达及生物学功能分析
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作者 于立权 闫智慧 蒋伶活 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期99-103,共5页
利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表... 利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表明该融合蛋白具有野生型δ亚基的功能。同时,构建了在大肠杆菌细胞中表达该δ亚基的ScAtp16p-His6融合蛋白,并用纯化的融合蛋白在家兔中制备了其多抗血清。结果表明此多抗可以很好地与ScAtp16p-His6和HA-ScAtp16p两种融合蛋白特异性结合。这些研究材料的获得为深入研究ATP合酶的解偶联机制和磷酸化调控机理奠定了基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母F1F0-atp合酶δ亚基 蛋白 功能分析
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棉铃虫ATP合酶亚基α对Cry2Ab毒理的影响 被引量:3
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作者 姚雪 马洌扬 +5 位作者 张博 常彦鹏 李瑞敬 王明月 赵文丽 魏纪珍 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1034-1042,共9页
为探究棉铃虫Helicoverpa armigera ATP合酶亚基α(ATP synthase subunitα,ATPs-α)对Cry2Ab毒理的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测了ATPs-α基因在棉铃虫幼虫不同发育阶段、不同组织及受Cry2Ab诱导后的表达量,并通过在昆虫细胞中过... 为探究棉铃虫Helicoverpa armigera ATP合酶亚基α(ATP synthase subunitα,ATPs-α)对Cry2Ab毒理的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测了ATPs-α基因在棉铃虫幼虫不同发育阶段、不同组织及受Cry2Ab诱导后的表达量,并通过在昆虫细胞中过表达和干扰ATPs-α基因验证其在Cry2Ab毒理中的功能。结果显示:ATPs-α基因在棉铃虫各发育阶段和组织中普遍表达,其中在幼虫的1龄和2龄期,以及5龄的中肠、头部和表皮中表达较高。棉铃虫取食Cry2Ab 6 h后,ATPs-α基因表达量开始显著降低,一直持续到36 h;在Sf9细胞系中成功表达ATPs-α蛋白后,显著增强了Cry2Ab的细胞毒力;在美洲棉铃虫H.zea的中肠细胞中干扰ATPs-α基因后,显著降低了Cry2Ab的细胞毒力。表明棉铃虫ATPs-α参与Cry2Ab的毒理过程。 展开更多
关键词 棉铃虫 atp合酶亚基α CRY2AB 细胞毒力
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