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基于ATP再生体系快速检测乳品中微生物 被引量:12
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作者 常超 王凌 伍金娥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期320-324,共5页
基于焦磷酸(pyrophosphoric acid,PPi)再生三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)建立乳品中微生物快速检测方法。通过单因素试验优化PPi再生ATP反应条件,并考察方法的灵敏度、准确度、精密度和稳定性。结果表明,PPi再生ATP最佳反应... 基于焦磷酸(pyrophosphoric acid,PPi)再生三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)建立乳品中微生物快速检测方法。通过单因素试验优化PPi再生ATP反应条件,并考察方法的灵敏度、准确度、精密度和稳定性。结果表明,PPi再生ATP最佳反应条件为腺苷酰硫酸(adenosine phosphosulfate,APS)浓度10μmol/L,ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)活力0.15 U/m L、反应p H 7.8。在最佳的ATP再生条件下偶联生物发光法,对ATP标准品、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的检测限分别为10^(-17) mol/m L、10~2 CFU/m L和10~2 CFU/m L。工作曲线在10~2~10~7 CFU/m L范围内线性关系良好,对乳品基质的回收率为81.33%~97.78%,变异系数为14.24%~22.17%,与国标平板计数法对比显示两种方法检测结果相关性良好,相关系数为0.96。本方法快速、简单、灵敏、稳定,适用于乳品中微生物快速监测。 展开更多
关键词 atp再生 生物发光 快速检测 乳品
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ATP再生系统与固定化酵母细胞偶联制备1,6-二磷酸果糖的研究 被引量:5
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作者 王旻 张宏兴 +1 位作者 王丁刚 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 1995年第4期50-52,共3页
戊二醛交联的酵母细胞,包埋于聚乙烯醇中,制成含有糖酵解部分酶系的固定化多酶体系颗粒。该固定化多酶体系可以以葡萄糖为底物,通过糖酵解途径生产1,6-二磷酸果糖(FDP)。为了使FDP大量积累,选择氯丙嗪作为醛缩酶抑制剂... 戊二醛交联的酵母细胞,包埋于聚乙烯醇中,制成含有糖酵解部分酶系的固定化多酶体系颗粒。该固定化多酶体系可以以葡萄糖为底物,通过糖酵解途径生产1,6-二磷酸果糖(FDP)。为了使FDP大量积累,选择氯丙嗪作为醛缩酶抑制剂,再偶联上ATP再生系统,连续批式生产FDP。当再生的ATP浓度达0.2mg/ml时,FDP产量可提高数倍。批式反应,连续生产5批,FDP产量可维持在18.5mg/ml。结果表明,采用再生的方法来补充ATP,可保证固定化酵母细胞连续生产FDP。 展开更多
关键词 atp再生 1 6-二磷酸果糖 固定化酶 酵母细胞
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共表达PPK和GMAS全细胞催化合成L-茶氨酸 被引量:6
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作者 潘鑫茹 刘均忠 +1 位作者 张宏娟 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1827-1832,共6页
利用pETDuet-1质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达了多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS),并以共表达PPK和GMAS的重组菌全细胞催化合成L-茶氨酸,优化了反应参数。SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS共表达成功;最佳全细胞催化反应... 利用pETDuet-1质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达了多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS),并以共表达PPK和GMAS的重组菌全细胞催化合成L-茶氨酸,优化了反应参数。SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS共表达成功;最佳全细胞催化反应条件为:35℃,pH=7.0,谷氨酸钠300mmol/L,乙胺盐酸盐420 mmol/L,六偏磷酸钠100 mmol/L,添加2 mmol/L起始量ATP,在100 mL反应体系中转化24 h,L-茶氨酸浓度达到199 mmol/L,谷氨酸钠的转化率达到66.34%。 展开更多
关键词 共表达 多聚磷酸盐激酶 γ-谷氨酰甲胺合成酶 L-茶氨酸 atp再生 生物工程
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来源于泗阳鞘氨醇杆菌的聚磷酸激酶的克隆表达及在ATP再生系统中的应用 被引量:5
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作者 黄欣 李益民 +1 位作者 杜聪 袁文杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4669-4680,共12页
聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)在体外催化合成ATP的反应中有着重要作用。为寻找能利用短链聚磷酸盐(polyphosphate,polyP)为底物高效合成ATP的聚磷酸激酶,本文以来源于泗阳鞘氨醇杆菌(Sphingobacteriumsiyangensis)的聚磷酸激酶... 聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)在体外催化合成ATP的反应中有着重要作用。为寻找能利用短链聚磷酸盐(polyphosphate,polyP)为底物高效合成ATP的聚磷酸激酶,本文以来源于泗阳鞘氨醇杆菌(Sphingobacteriumsiyangensis)的聚磷酸激酶(PPK2)为研究目标,利用pET-29a构建重组质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,并将其作为ATP再生系统的关键酶与L-氨基酸连接酶(YwfE)联用生产丙谷二肽(Ala-Gln)。ppk2长度为810bp,编码270个氨基酸;SDS-PAGE结果表明PPK2为可溶性表达,分子量为29.7 kDa。对PPK2的最适反应条件进行了优化,结果发现其在22-42℃、pH7-10的范围内均可以保持较好活性,且在37℃、pH为7、镁离子(Mg^(2+))浓度为30 mmol/L、底物ADP与六偏磷酸钠浓度分别为5 mmol/L和10 mmol/L时酶活最大,在0.5 h时ATP产率可以达到理论值的60%以上。作为模式反应体系,当PPK2与YwfE联用生产Ala-Gln时,达到与直接添加ATP相同的效果。此聚磷酸激酶作为ATP再生系统具有较好的适用性,适用的温度和pH范围广,且能以廉价易得的短链polyP为底物高效合成ATP,为依赖ATP的催化反应体系的能量再生提供了新酶的来源。 展开更多
关键词 泗阳鞘氨醇杆菌 聚磷酸激酶 atp再生 双酶偶联 二肽
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PPK和GMAS共表达重组菌株的构建及其在L-茶氨酸合成中的应用 被引量:5
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作者 李元 刘珊 祝俊 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1745-1749,共5页
构建了共表达ATP再生和L-茶氨酸合成酶的重组大肠杆菌菌株,并将其应用于L-茶氨酸的合成中。合成多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS)基因序列,分别利用p ETDuet-1和p ET-21a(+)载体,构建共表达重组质粒p ETDuet-ppk+gmas和p... 构建了共表达ATP再生和L-茶氨酸合成酶的重组大肠杆菌菌株,并将其应用于L-茶氨酸的合成中。合成多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS)基因序列,分别利用p ETDuet-1和p ET-21a(+)载体,构建共表达重组质粒p ETDuet-ppk+gmas和p ET21a-ppk+gmas。将上述两种重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得重组菌株TPG和APG。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS在两种重组菌中均可溶性表达。当用于催化L-茶氨酸合成时,来自APG的GMAS-PPK要优于TPG。利用APG所产的酶进行L-茶氨酸合成,在37℃、p H 7.0条件下,使用催化量ATP可实现L-茶氨酸的摩尔产率为86.0%。该结果一方面扩展了酶法ATP再生系统的应用,另一方面为生物催化合成L-茶氨酸提供了一种有效方法。 展开更多
关键词 atp再生 γ-谷氨酰甲胺合成酶 多聚磷酸盐激酶 L-茶氨酸 共表达 双酶偶联
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基于能量循环再生系统酶法生产谷胱甘肽 被引量:5
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作者 张星 崔向伟 +1 位作者 李宗霖 李志敏 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期688-693,共6页
以多聚磷酸(polyP)为能量供体,通过构建双酶级联反应,以及偶联多聚磷酸激酶(PPK)和谷胱甘肽双功能合成酶(GshF),酶法合成了谷胱甘肽(GSH)。对GshF和PPK诱导表达条件进行了优化,表明低温18℃有利于蛋白的可溶表达。将GshF和PPK纯化后,建... 以多聚磷酸(polyP)为能量供体,通过构建双酶级联反应,以及偶联多聚磷酸激酶(PPK)和谷胱甘肽双功能合成酶(GshF),酶法合成了谷胱甘肽(GSH)。对GshF和PPK诱导表达条件进行了优化,表明低温18℃有利于蛋白的可溶表达。将GshF和PPK纯化后,建立纯酶反应系统,对反应条件进行优化,结果表明,当polyP和MgCl2的浓度比为30:45、腺苷二磷酸(ADP)浓度为0.5 mmol/L时,反应效率较高;45℃为反应最优温度;在PPK质量浓度为4 g/L,GshF质量浓度为1 g/L时,3 h内GSH产量达到了(58±3.3)mmol/L。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 谷胱甘肽双功能合成酶 多聚磷酸激酶 atp再生
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基于土壤宏基因组的聚磷酸激酶的筛选与鉴定
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作者 章素平 高森浩 +3 位作者 李王馨月 张锦豪 杨诗韵 尤忠毓 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期254-261,共8页
聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)是一类磷酸基团转移酶,能催化磷酸基团在ATP与多聚磷酸之间的转移反应,可用于生物催化过程中的ATP再生,基于PPK的ATP再生系统已成为生物催化领域的研究热点之一。该研究旨在利用序列驱动的宏基因... 聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)是一类磷酸基团转移酶,能催化磷酸基团在ATP与多聚磷酸之间的转移反应,可用于生物催化过程中的ATP再生,基于PPK的ATP再生系统已成为生物催化领域的研究热点之一。该研究旨在利用序列驱动的宏基因组技术,从土壤宏基因组中挖掘新型的PPK基因。根据文献报道的PPK氨基酸序列保守区域,设计简并引物,以土壤宏基因组DNA为模板进行PCR扩增,筛选到一条来源于Serratia marcescens的PPK编码基因,该基因包含一个2064 bp的开放阅读框,编码一个由687个氨基酸组成的蛋白(SmPPK)。多重序列比对发现SmPPK与Escherichia coli来源的PPK具有较高的序列一致性(87.9%)。系统发育树分析表明,SmPPK与Serratia nevei、Gibbsiella quercinecans等来源的PPK在同一分支上,同属于PPK1家族。同源建模结果显示,SmPPK由4个结构域组成典型的L型空间结构,其活性中心主要由His433、Asp468、His590和Glu621组成。将SmPPK基因与pET 28a连接后转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳显示在80 kDa处存在明显的蛋白表达条带,与理论分子质量一致。酶活性检测显示,SmPPK可以在多聚磷酸钠的存在下,实现ATP的合成,其最高产率为46.5%。利用SmPPK构建ATP再生系统与灵菌红素缩合酶PigC耦合,成功实现灵菌红素类似物的合成。该研究的开展为ATP依赖的生物催化过程提供了构建ATP再生系统的新酶源。 展开更多
关键词 聚磷酸激酶 宏基因组 序列筛选 重组表达 atp再生
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面包酵母和耐高温酵母在谷胱甘肽合成过程中作为ATP再生菌株的比较 被引量:2
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作者 童群义 陈坚 +1 位作者 堵国成 李华钟 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 2000年第6期537-541,共5页
分别考察了面包酵母、耐高温酵母合成ATP的最适条件和重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的最适条件 ,比较了面包酵母和耐高温酵母作为ATP再生菌株对谷胱甘肽合成的影响 .结果表明 :由耐高温酵母构建的ATP再生 谷胱甘肽合成耦合体系 ,与用面包... 分别考察了面包酵母、耐高温酵母合成ATP的最适条件和重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的最适条件 ,比较了面包酵母和耐高温酵母作为ATP再生菌株对谷胱甘肽合成的影响 .结果表明 :由耐高温酵母构建的ATP再生 谷胱甘肽合成耦合体系 ,与用面包酵母构建的耦合体系相比 ,其谷胱甘肽产量提高 4 3.6%以上 ;与直接添加ATP相比 ,其谷胱甘肽产量提高 14.5%以上 . 展开更多
关键词 面包酵母 耐高温酵母 谷胱甘肽 atp再生
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多聚磷酸激酶及其在ATP再生体系构建中的进展 被引量:1
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作者 程峰 李欢 +4 位作者 李可欣 刘海云 沈其 薛亚平 郑裕国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4413-4427,共15页
构建高效的腺嘌呤核苷三磷酸(adenosinetriphosphate,ATP)再生体系可显著提高生物催化磷酸基团转移反应的效率。多聚磷酸激酶(poly phosphate kinase,PPK)能利用来源广、廉价且稳定的多聚磷酸(polyphosphate,Poly P)盐作为磷酸基供体,... 构建高效的腺嘌呤核苷三磷酸(adenosinetriphosphate,ATP)再生体系可显著提高生物催化磷酸基团转移反应的效率。多聚磷酸激酶(poly phosphate kinase,PPK)能利用来源广、廉价且稳定的多聚磷酸(polyphosphate,Poly P)盐作为磷酸基供体,能够实现单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)、二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)、ATP、PolyP之间磷酸基的高效定向转移,已成为构建ATP再生体系的首选。本文介绍了不同类型PPK的结构特征、相关催化机制以及不同来源的PPK在酶活、催化效率、稳定性和底物偏好性的特征差异;归纳和列举了针对野生PPK酶学性质不足进行分子改造的实例,并对PPK在ATP再生体系构建的研究进展进行了总结。 展开更多
关键词 多聚磷酸激酶 蛋白质工程 atp再生 生物合成
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多聚磷酸盐激酶双底物通道腔的理性设计及其在无细胞催化生产谷胱甘肽中的应用 被引量:1
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作者 高惠 王晴 +2 位作者 刘婷婷 徐美娟 饶志明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3318-3335,共18页
三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)是一种重要的辅助因子,参与许多需能的生物催化反应。多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinases,PPK)由于其底物聚磷酸盐廉价易得,可以为消耗ATP的反应提供能量。本研究选择哈氏噬纤维菌(Cytophaga ... 三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)是一种重要的辅助因子,参与许多需能的生物催化反应。多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinases,PPK)由于其底物聚磷酸盐廉价易得,可以为消耗ATP的反应提供能量。本研究选择哈氏噬纤维菌(Cytophaga hutchinsonii)来源的Ch PPK,进行了底物谱和耐受性分析,通过分子对接和定点突变,理性改造多聚磷酸盐激酶的双底物通道腔来提高PPK酶的催化活性。与野生型相比,筛选得到突变体Ch PPKK81H-K103V的相对酶活提高了326.7%,同时,双突变扩大了Ch PPK的底物利用范围与耐受性,提高了该酶的耐热性与耐碱性。基于该ATP再生系统,本研究偶联谷胱甘肽双功能酶GshAB和Ch PPKK81H-K103V,破细胞后采用无细胞催化生产谷胱甘肽,加入5 mmol/L ATP后,该体系6 h可以生产(25.4±1.9)mmol/L的谷胱甘肽,比突变前的催化体系提高了41.9%。优化无细胞催化体系的缓冲液、裂解液菌体量、补料时间后,无细胞体系可产生(45.2±1.8)mmol/L谷胱甘肽,底物L-半胱氨酸的转化率达到90.4%。提高Ch PPK生产ATP的能力,可有效增强底物的转化率,降低催化成本,实现了无细胞催化生产谷胱甘肽的高产量、高转化率与高经济价值的统一。本研究提供了一种绿色高效的ATP再生系统,可为消耗ATP的生物催化反应平台提供可持续动力。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐激酶 atp再生 突变 无细胞催化 谷胱甘肽
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基于双菌耦合发酵策略的烟酰胺单核苷酸合成
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作者 孙婷 张洪涛 +3 位作者 杨峰 柴文刚 薛皓阳 谭淑引 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第24期201-210,共10页
本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶(nicotinamideribosidekinase,NRK)和多聚磷酸酶(polyphosphatekinase,PPK)的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)生产中的应用。首先... 本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶(nicotinamideribosidekinase,NRK)和多聚磷酸酶(polyphosphatekinase,PPK)的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)生产中的应用。首先分别构建表达NRK1和NRK2的工程菌株,筛选得到高活性的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)-pET28a-NRK1,NMN产量5.17 g/L,产率77.4%;然后对NRK1的诱导表达条件进行优化,发现低温16℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷0.7 mmol/L、接种量3%、诱导时长22 h更利于蛋白的可溶性表达;进一步对E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1合成NMN的最优体系进行探索,发现在菌体质量浓度100 g/L、温度18℃、时间12 h、ATP与烟酰胺核糖(nicotinamide riboside,NR)浓度比1∶1.5时,NMN产量最高为5.73 g/L,产率85.78%;最后,通过对E. coli BL21(DE3)pET28a-PPK和E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1耦合发酵系统进行优化,得到最优体系为ATP与NR浓度比1∶3.5、菌体质量浓度比1∶2、发酵时间16 h,NMN产量达11.81 g/L。本研究所建立的高密度双菌耦合发酵产NMN工艺为高效、低成本的大规模发酵生产NMN开辟了新途径。 展开更多
关键词 烟酰胺单核苷酸 烟酰胺核苷激酶 多聚磷酸酶 atp再生 耦合发酵
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药物性甲状腺功能减退伴肌酸激酶升高1例及文献复习 被引量:1
12
作者 刘元平 龙健 刘纯 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1192-1194,共3页
肌酸激酶(creatine kinase,CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞质和线粒体中,它可逆地催化肌酸与三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)之间的转磷酰基反应,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接... 肌酸激酶(creatine kinase,CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞质和线粒体中,它可逆地催化肌酸与三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)之间的转磷酰基反应,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。 展开更多
关键词 肌酸激酶升高 甲状腺功能减退 文献复习 药物性 三磷酸腺苷 肌肉收缩 atp再生 线粒体
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生物合成谷胱甘肽种间耦合ATP再生系统的构建 被引量:7
13
作者 李寅 李华钟 +1 位作者 林金萍 陈坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期191-197,共7页
利用重组大肠杆菌Ⅱ 1中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH J7中的ATP生物合成酶系 ,构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加 1mmol/LAMP和 0 0 5mmol/LNADH ... 利用重组大肠杆菌Ⅱ 1中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH J7中的ATP生物合成酶系 ,构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加 1mmol/LAMP和 0 0 5mmol/LNADH ,即可启动酵母的酵解途径。提高耦合系统中的葡萄糖浓度 ,可促进GSH的合成。当葡萄糖浓度为 40 0mmol/L时 ,系统内GSH浓度达到 1 0 4mmol/L(3 2 g/L)。Mg2 +缺乏时 ,耦合系统和外加ATP的非耦合系统均不能合成谷胱甘肽。耦合系统中Mg2 +与ATP形成螯合物 ,可能是导致耦合系统中GSH产量较低的原因。在耦合系统中补加Mg2 +,反应 6h时GSH浓度达到 1 4 3mmol/L(4 4g/L)。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 面包酵母 种间耦合 atp再生系统 谷胱甘肽 生物合成
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大肠杆菌—面包酵母种间耦合ATP再生系统中生物合成谷胱甘肽 被引量:6
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作者 李华钟 林金萍 +1 位作者 李寅 陈坚 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 1999年第4期1-5,共5页
利用混合悬浮培养的方法,构建了一个由重组大肠杆菌的谷胱甘肽生物合成酶系与面包酵母的糖酵解途径组成的ATP再生系统,验证了该系统用于谷胱甘肽(GSH)生物合成的可行性.研究了葡萄糖浓度、细胞量对耦合系统合成GSH 能力... 利用混合悬浮培养的方法,构建了一个由重组大肠杆菌的谷胱甘肽生物合成酶系与面包酵母的糖酵解途径组成的ATP再生系统,验证了该系统用于谷胱甘肽(GSH)生物合成的可行性.研究了葡萄糖浓度、细胞量对耦合系统合成GSH 能力的影响,讨论了所构建的ATP再生系统中GSH 合成能力较低的可能原因. 展开更多
关键词 atp再生系统 谷胱甘肽 合成 大肠杆菌 面包酵母
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ATP再生系统及其应用 被引量:3
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作者 李寅 陈坚 伦世仪 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期60-65,共6页
构建ATP再生系统是提高生物合成酶反应经济性的一个有效措施。本文讨论了ATP再生系统的两种形式自耦合反应系统与种间耦合反应系统在生产GMP、ATP、IMP、GSH和CDP胆碱中的应用,提出了构建ATP再生系统的必要条... 构建ATP再生系统是提高生物合成酶反应经济性的一个有效措施。本文讨论了ATP再生系统的两种形式自耦合反应系统与种间耦合反应系统在生产GMP、ATP、IMP、GSH和CDP胆碱中的应用,提出了构建ATP再生系统的必要条件并分析了该系统目前存在的问题,以期为国内同行开展类似研究提供参考。 展开更多
关键词 atp再生系统 自耦合反应系统 生物合成酶
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大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶的表达·纯化及鉴定
16
作者 赵龙 周贤轩 《安徽农业科学》 CAS 2017年第25期142-144,174,共4页
[目的]获得大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶。[方法]首先用MEGA7软件对不同生物丙酮酸激酶的编码基因进行聚类分析;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增了大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶基因pykA,将其克隆到pET_28a载体中,构建了重组质粒载体pET_28a-pyk ... [目的]获得大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶。[方法]首先用MEGA7软件对不同生物丙酮酸激酶的编码基因进行聚类分析;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增了大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶基因pykA,将其克隆到pET_28a载体中,构建了重组质粒载体pET_28a-pyk A并在大肠杆菌BL21中实现了Ⅱ型丙酮酸激酶(PykA)的高效表达;利用镍柱亲和层析系统纯化了PykA蛋白,并进行了高效液相色谱(HPLC)检测。[结果]聚类分析结果表明,大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶与其他原核生物的丙酮酸激酶氨基酸序列具有高度同源性。HPLC检测发现Ⅱ型丙酮酸激酶Pyk A在体外可以高效地将ADP转化为ATP。[结论]该研究获得了Ⅱ型丙酮酸激酶,为ATP的合成以及Ⅱ型丙酮酸激酶为基础的ATP再生系统的研究提供了参考。 展开更多
关键词 Ⅱ型丙酮酸激酶 蛋白表达 高效液相色谱 大肠杆菌 atp再生系统
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新生儿缺氧缺血性脑病CK及CK-BB动态变化观察
17
作者 陈炳才 《中国乡村医药》 2009年第8期32-32,共1页
新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是由于围生期窒息缺氧所致的新生儿脑损伤,存活者多留有不同程度的后遗症,临床出现一系列的脑病表现。CK是一个与细胞能量转运、肌收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。CK-BB是磷酸肌酸激酶脑型同工酶,... 新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是由于围生期窒息缺氧所致的新生儿脑损伤,存活者多留有不同程度的后遗症,临床出现一系列的脑病表现。CK是一个与细胞能量转运、肌收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。CK-BB是磷酸肌酸激酶脑型同工酶,是神经元损伤的重要标记,且有高度特异性,其升高的程度与脑损伤的程度及预后密切相关。为探讨新生儿缺氧缺血性脑病时血清CK及CK—BB的动态变化,我们进行了以下临床观察。 展开更多
关键词 新生儿缺氧缺血性脑病 CK-BB 动态变化 磷酸肌酸激酶脑型同工酶 新生儿脑损伤 临床观察 atp再生 神经元损伤
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肌酸激酶和血尿酸检测
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《健康必读(乡村医生)》 2011年第4期9-9,共1页
肌酸激酶(CK)原称肌酸磷酸激酶。主要存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶,它可逆性地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。在临床上主要用于诊断... 肌酸激酶(CK)原称肌酸磷酸激酶。主要存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶,它可逆性地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。在临床上主要用于诊断心肌梗死。心肌梗死患者发病后2~4小时,血液中此酶活动即开始升高,比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 展开更多
关键词 肌酸激酶 血尿酸 肌酸磷酸激酶 心肌梗死患者 atp再生 检测 肌肉收缩 乳酸脱氢酶
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