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猪静脉血管内皮细胞cDNA文库构建及与猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因互作蛋白的筛选
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作者 姜光飞 何维琪 +3 位作者 余蕊 梁龙舟 孙永科 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期1-9,共9页
近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其... 近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其非典型化机制,利用酵母双杂交技术,构建了猪静脉血管内皮细胞(SVEC)cDNA文库,并进一步采用建立的SVEC cDNA文库与诱饵质粒pGBKT7-Mut共转Y2H Gold酵母菌,筛选与Mut蛋白相互作用的蛋白,对筛选出的蛋白进行测序和生物信息学分析。结果表明,构建的诱饵载体在酵母细胞中成功表达,且无毒无自激活;构建的SVEC cDNA文库容量大于1×106 CFU/mL,文库滴度6.2×106 CFU/mL,PCR显示文库插入片段大小在250~3000 bp,条带大小不一,符合文库大小要求;与SVEC cDNA文库筛选发现14种与Mut蛋白存在潜在互作的宿主蛋白,通过蛋白功能分析发现这些蛋白主要与病毒复制、细胞凋亡、钙离子结合、蛋白代谢和降解有关。研究结果有助于进一步探索14种潜在互作蛋白中到底哪些与Mut发生密切互作,且与病毒感染宿主密切相关,为研究APPV-YN Mut基因功能及其致非典型化作用机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 关键变异基因Mut 酵母双杂交 CDNA文库 蛋白互作
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广东地区1株猪非典型瘟病毒的鉴定及遗传演化分析
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作者 侯展鹏 陈文俊 +7 位作者 林佩仪 梁宇 刘文俊 曹楠 许丹宁 田允波 黄运茂 付新亮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2145-2151,2157,共8页
猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是引起仔猪先天性震颤(congenital tremor,CT)的主要病原,给养猪业带来严重的经济损失。为了解APPV在广东地区猪群的流行和变异情况,本研究于2018—2019年从广东地区采集12份疑似CT的... 猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是引起仔猪先天性震颤(congenital tremor,CT)的主要病原,给养猪业带来严重的经济损失。为了解APPV在广东地区猪群的流行和变异情况,本研究于2018—2019年从广东地区采集12份疑似CT的病料样品,通过RT-PCR对APPV进行检测,并对APPV阳性的病料样品通过PCR扩增其全长基因组序列并测序,同时对其ORF和E2基因的同源性、遗传进化关系及E2蛋白氨基酸分子特征进行分析。结果显示,有3份样品为APPV阳性,进一步对其中1份阳性样品通过全基因组PCR扩增得到1条长度为10989 bp的APPV全长序列,命名为APPV-China/GD-ZK/2018(GD-ZK)。GD-ZK与参考毒株ORF和E2基因的核苷酸同源性分别为80.7%~99.7%,80.8%~99.9%,其中与APPV/CNYJ/2018的同源性最高。分别对GD-ZK株的ORF和E2基因进行遗传演化分析,结果显示,根据遗传进化关系可将APPV划分为Genotype 1、Genotype 2和Genotype 3三种基因型,而本研究中鉴定到的GD-ZK株属于Genotype 2,与APPV/CNYJ/2018的进化关系最近。分子特征分析结果显示GD-ZK株E2蛋白发生了S^(54)T和S^(130)T 2个特征性的氨基酸位点突变,且该突变均存在于Genotype 2。因此这2个氨基酸位点突变可作为APPV基因分型潜在的分子标记。本研究初步揭示了APPV在广东地区猪群中的遗传变异情况,为掌握APPV在广东地区的流行本底奠定了基础。 展开更多
关键词 appv 仔猪先天性震颤 遗传演化 变异
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猪非典型瘟病毒(APPV)研究进展 被引量:1
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作者 张恒 左媛媛 +3 位作者 戈胜强 张会 宋桂才 吴晓东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第5期97-102,共6页
猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是2015年新发现的瘟病毒属病毒,国际病毒分类学委员会2017年将其确定为瘟病毒属K(Pestivirus K)的代表毒株。该病毒可导致仔猪先天性震颤(congenital tremor,CT),典型症状为仔猪轻微震... 猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是2015年新发现的瘟病毒属病毒,国际病毒分类学委员会2017年将其确定为瘟病毒属K(Pestivirus K)的代表毒株。该病毒可导致仔猪先天性震颤(congenital tremor,CT),典型症状为仔猪轻微震颤,头部和四肢明显。目前APPV已在全球广泛流行,我国也有相关报道,关于该病毒研究的报道越来越多,但研究进展的报道相对较少,目前已证实其与CT紧密相关。APPV不容易被分离,缺少最重要的病毒攻毒试验结果,疫苗研究也需要在前期基础研究深入的基础上才有可能获得成功。为此,本文从病原学、流行病学、诊断技术及疫苗研发等方面,对取得的最新研究进展进行概述,以期增强人们对APPV的认识,为我国防控与研究APPV提供参考。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 仔猪先天性震颤 抖抖病
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广东猪群新发非典型瘟病毒病的诊断和病毒鉴定 被引量:1
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作者 贺东生 殷三鸿 +4 位作者 石坚 李锦辉 苏丹萍 周霞 刘博闻 《猪业科学》 2018年第7期81-84,共4页
2018年4月,广东某猪场新生仔猪出现全身震颤发抖、消瘦和哺乳困难,并导致死亡。经实验室PCR诊断,排除猪瘟病毒(CSFV)等传染病后显示为猪非典型性猪瘟(Atypical Porcine Pestivirus,APPV)阳性。针对其编码的E2基因设计一对特异性引物扩... 2018年4月,广东某猪场新生仔猪出现全身震颤发抖、消瘦和哺乳困难,并导致死亡。经实验室PCR诊断,排除猪瘟病毒(CSFV)等传染病后显示为猪非典型性猪瘟(Atypical Porcine Pestivirus,APPV)阳性。针对其编码的E2基因设计一对特异性引物扩增该片段,使用DNA Star和MEGA 7.0软件进行同源性分析。结果:成功克隆了该病毒的E2段基因,序列长度为723 bp,并进行基因测序和遗传进化分析。序列同源性分析表明该毒株为APPV,命名APPV/CN/HUANAN/201801。 展开更多
关键词 PCR鉴定 appv E2基因 序列分析
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一种新型仔猪先天性震颤及其病原的初步研究 被引量:11
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作者 张文波 吴松松 +4 位作者 邓舜洲 周荷田 张志庆 杨丹凤 曹亮亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2147-2154,共8页
为了解国内猪群是否存在新型仔猪先天性震颤及其病原,本试验对临床疑似仔猪先天性震颤病例进行剖检,观察组织脏器的病理变化;根据GenBank上登录的瘟病毒基因组序列设计2对引物,以典型震颤仔猪的病料RNA为模板,进行RT-PCR,并对阳性产物... 为了解国内猪群是否存在新型仔猪先天性震颤及其病原,本试验对临床疑似仔猪先天性震颤病例进行剖检,观察组织脏器的病理变化;根据GenBank上登录的瘟病毒基因组序列设计2对引物,以典型震颤仔猪的病料RNA为模板,进行RT-PCR,并对阳性产物进行测序;用DNAStar和Mega 7.0软件对所测序列进行分析,绘制系统进化树。结果表明,疑似仔猪先天性震颤病猪的组织脏器病理变化与猪瘟的病理变化相似,但无明显的脾脏梗死和淋巴结周边出血;从采集的病料中均扩增到与预期大小基本一致的条带;所测序列经BLAST比对,均为仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的相应基因序列片段;系统进化树结果显示,哺乳动物瘟病毒可分为两大进化分支,APPV为单独一分支,其他瘟病毒为另一分支,两分支的同源性低于70%;所测的NS2-3和NS5B基因序列与GenBank上登录的APPV相应序列同源性在76.9%~98.8%之间,表明本研究所测定的序列是APPV的基因组序列;测定的7条NS2-3基因序列之间的同源性在89.7%~94.8%之间,12条NS5B基因序列的同源性在82.2%~100.0%之间。本试验首次证实国内猪群中存在新型仔猪先天性震颤病及其病原(APPV)。 展开更多
关键词 仔猪先天性震颤 瘟病毒 仔猪先天性震颤瘟病毒(appv) 序列分析
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补肾化痰益智方对APPV717I小鼠学习记忆能力和海马神经元Tau蛋白磷酸化的影响 被引量:10
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作者 孔明望 赵健邦 +2 位作者 石和元 刘萍 王平 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期96-102,共7页
目的:观察补肾化痰益智方(BSHT)对APPV717I转基因小鼠干预效果,揭示其可能作用机制。方法:将3月龄APPV717I转基因小鼠120只分为2批,每批60只,每批又随机分为5组,分别为多奈哌齐(0.000 92 g·kg^(-1)·d^(-1))组,补肾化痰益智方... 目的:观察补肾化痰益智方(BSHT)对APPV717I转基因小鼠干预效果,揭示其可能作用机制。方法:将3月龄APPV717I转基因小鼠120只分为2批,每批60只,每批又随机分为5组,分别为多奈哌齐(0.000 92 g·kg^(-1)·d^(-1))组,补肾化痰益智方低、中、高剂量组(5.2,10.4,20.8 g·kg^(-1)·d^(-1)),模型组(APP),每组12只(雌雄各半);同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠24只作为正常组,灌胃给药,模型组及正常组予等容积双蒸水灌胃,每日1次。第1批小鼠给药8个月,第2批给药4个月,最后同时以Morris水迷宫进行行为学检测,分别以酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹法测定(Western blot)海马神经元Tau蛋白磷酸化(p-Ser 199/202,Tau-1)的表达水平。结果:行为学实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠的潜伏期有所延长(P<0.05,P<0.01);各治疗组与模型组比潜伏期明显缩短(P<0.05)。ELISA和Western blot实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠海马神经元的Ser199/202磷酸化位点磷酸化程度显著升高(P<0.01);各治疗组Ser199/202磷酸化位点磷酸化水平较模型组比明显缩短(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾化痰益智方可以改善Ser199/202磷酸化位点磷酸化程度,防止神经原纤维缠结(NFT)的形成,从而改善APPV717I转基因小鼠早期的学习记忆能力。 展开更多
关键词 补肾化痰益智方 老年性痴呆 appv717I转基因小鼠 MORRIS水迷宫 学习记忆能力 神经原纤维缠结 TAU蛋白磷酸化
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金思维提取物对APPV717I转基因小鼠早期学习记忆和突触结构与功能的影响 被引量:7
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作者 张雷明 田金洲 +7 位作者 尹军祥 时晶 王蓬文 王蓉 胡泉 赵志炜 姬志娟 任映 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期428-432,共5页
目的:研究金思维提取物(GEPT)对APPV717I转基因小鼠痴呆早期学习记忆的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法:将3月龄的APPV717I转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐治疗组(0.92mg·kg-1·d-1)、GEPT低、中、高(0.075,0.15,0.3g... 目的:研究金思维提取物(GEPT)对APPV717I转基因小鼠痴呆早期学习记忆的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法:将3月龄的APPV717I转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐治疗组(0.92mg·kg-1·d-1)、GEPT低、中、高(0.075,0.15,0.3g·kg-1·d-1)剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常组,每组6只,每天灌胃给药1次。给药4个月后(7月龄)用Morris水迷宫进行行为学测试,用免疫组化方法测定海马CA1区突触相关蛋白Shank1的表达变化,同时用透射电镜观察海马CA1区突触的超微结构变化。结果:行为学检测,GEPT治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验均有显著差异(P<0.05)。突触相关蛋白Shank1,模型组小鼠大脑海马CA1区中Shank1阳性细胞总面积以及阳性细胞积分吸光度与正常组相比明显减少,而GEPT治疗组与模型组相比能显著提高Shank1阳性细胞总面积以及阳性细胞积分吸光度(P<0.05)。电镜结果显示,模型组小鼠可见突触数量减少,突触间隙增宽,突触界面曲率下降,突触后致密区厚度减小,GEPT治疗组能剂量依赖性的对突触损害起到修复作用。结论:GEPT能通过修复突触损伤以及提高Shank1蛋白的表达进而改善APPV717I转基因小鼠痴呆早期的学习记忆能力。 展开更多
关键词 金思维提取物 appv717I转基因小鼠 MORRIS水迷宫 Shank1 突触
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中药复方金思维对APPV717Ⅰ转基因小鼠海马神经损伤的保护作用 被引量:4
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作者 张雷明 田金洲 +5 位作者 尹军祥 时晶 王蓬文 王蓉 胡泉 任映 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期410-415,共6页
目的研究中药复方金思维对APPV717Ⅰ转基因小鼠海马神经损伤的保护作用。方法将3月龄的APPV717Ⅰ转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐治疗组(0.92 mg/kg),金思维小、中、大剂量(0.075、0.15、0.3g/kg)治疗组,并以同月龄遗传背景相同的C57... 目的研究中药复方金思维对APPV717Ⅰ转基因小鼠海马神经损伤的保护作用。方法将3月龄的APPV717Ⅰ转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐治疗组(0.92 mg/kg),金思维小、中、大剂量(0.075、0.15、0.3g/kg)治疗组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每组6只,每天ig给药1次。给药8个月后(11月龄)用Morris水迷宫进行行为学测试,用电镜观察海马CA1区超微结构变化,同时用免疫组化方法观察海马CA1区Shank1蛋白的表达变化。结果行为学检测显示,金思维治疗组与模型组相比逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),目标象限游泳时间明显延长(P<0.05、0.01),并且与对照组比较无显著差异。海马超微结构显示,模型组小鼠海马CA1神经元出现明显变性及坏死,突触结构不完整,数量明显减少。而金思维各剂量组与模型组相比,剂量依赖性的减轻神经元变性、坏死,增加突触的数目。突触相关蛋白Shank1,模型组小鼠海马CA1区Shank1阳性细胞总数、总面积以及阳性细胞积分吸光度与对照组相比明显减少(P<0.05、0.01),而金思维治疗组与模型组相比能显著提高Shank1阳性细胞总数、总面积以及阳性细胞积分吸光度(P<0.05、0.01)。结论金思维能明显改善APPV717Ⅰ转基因小鼠海马神经损伤,增加突触相关蛋白Shank1的表达,进而改善了APPV717Ⅰ转基因小鼠的学习记忆能力。 展开更多
关键词 复方金思维 appv717 Ⅰ转基因小鼠 突触 Shank1
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Effect of GAPT Extract on Expression of Tau Protein and Its Phosphorylation Related Enzymes in Hippocampal Neurons of APPV717I Transgenic Mice 被引量:3
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作者 NI Jing-nian SHI Jing +7 位作者 ZHANG Xue-kai YANG Yi-chang LIU Xiao-meng WEI Ming-qing LI Ting WANG Peng-wen TIAN Jin-zhou WANG Yong-yan 《Chinese Journal of Integrative Medicine》 SCIE CAS CSCD 2017年第8期605-610,共6页
Objective:To investigate the effect of GAPT,an extract mixture from Radix Ginseng,Rhizoma Acor tatarinowii,Radix Polygalae and Radix Curcuma(containing ingredient of turmeric),etc.on expression of tau protein and i... Objective:To investigate the effect of GAPT,an extract mixture from Radix Ginseng,Rhizoma Acor tatarinowii,Radix Polygalae and Radix Curcuma(containing ingredient of turmeric),etc.on expression of tau protein and its phosphorylation related enzyme in hippocampal neurons of APPV717I transgenic mice.Methods:Sixty three-month-old APPV717I transgenic mice were randomly divided into model group,donepezil group[0.92 mg/(kg·d)],the low,medium and high dosage of GAPT groups[0.075,0.15,0.30 g/(kg·d),12 in each group],and 12 three-month-old C57BL/6J mice were set as a normal control group,treatments were administered orally once a day respectively,and both the normal group and model group were given 0.5%sodium carboxymethyl cellulose solution.Immunohistochemistry(IHC)and Western blot analysis were used to detect the expression of total tau protein(Tau-5),cyclin-dependent kinase 5(CDK5)and protein phosphatase 2A(PP2A)in hippocampal neurons of experimental mice after 8-month drug administration(11 months old).Results:In the model group,the expression of Tau-5 and CDK5 were increased,whereas the expression of PP2A was decreased in hippocampal neurons,which were significantly different compared with that in the normal group(all P〈0.01).IHC test indicated the number and area of either Tau-5 or CDK5 positive cells were decreased with a dose-depended way in GAPT groups,and an increase of PP2A.Compared with the model group,the changes were significant in GAPT groups(P〈0.05 or P〈0.01).Similar results were shown by Western blot.Conclusion:GAPT could attenuate abnormal hyperphosphorylation of tau protein in hippocampal neurons of APPV717I transgenic mice via inhibiting the expression of CDK5 and activating the expression of PP2A. 展开更多
关键词 Alzheimer's disease TAU appv7171 transgenic mice Chinese medicine
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中药金思维对APPV717I转基因小鼠早期学习记忆能力和CaMK Ⅱ表达水平的影响 被引量:3
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作者 尹龙 田金洲 +4 位作者 时晶 王蓬文 孔明望 曾垂友 任映 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1822-1825,共4页
目的:通过观察金思维对APPV717I转基因小鼠早期空间学习记忆能力及突触蛋白表达水平的影响,揭示其可能的作用机制。方法:将3月龄APPV717I转基因小鼠60只随机分为模型组、多奈哌齐组(0.00092g.kg-1.d-1)、金思维小(0.075g.kg-1.d-1)、中(... 目的:通过观察金思维对APPV717I转基因小鼠早期空间学习记忆能力及突触蛋白表达水平的影响,揭示其可能的作用机制。方法:将3月龄APPV717I转基因小鼠60只随机分为模型组、多奈哌齐组(0.00092g.kg-1.d-1)、金思维小(0.075g.kg-1.d-1)、中(0.15g.kg-1.d-1)和大剂量组(0.3g.kg-1.d-1),每组12只;同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠12只作为正常组,灌胃给药(0.01mL/g体质量),每日1次。在给药4个月后(7月龄)以Morris水迷宫进行行为学检测,以免疫组化的方法测定海马CA1区突触蛋白CaMKⅡ的表达水平。结果:行为学实验结果表明,与模型组比较,GEPT各剂量组能不同程度改善APPV717I转基因小鼠的空间学习记忆能力(P<0.05),免疫组化结果显示GEPT小剂量组CaMKⅡ平均光密度与模型组比较明显增加(P<0.05)。结论:GEPT可能通过提高突触相关蛋白CaMKⅡ在海马CA1区的表达从而改善APPV717I转基因小鼠早期的学习记忆能力。 展开更多
关键词 金思维 appv717I转基因小鼠 MORRIS水迷宫 钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ
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非典型性猪的瘟病毒研究进展 被引量:1
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作者 李雨濛 杨晓宇 朱玲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期542-548,共7页
非典型性猪的瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)是导致仔猪发生先天性震颤(Congenital tremor,CT)A-Ⅱ型的主要病原,主要感染猪,仔猪感染后主要出现全身肌肉震颤。目前,该病主要流行于美国、巴西和德国等国家,我国广东某猪场于2... 非典型性猪的瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)是导致仔猪发生先天性震颤(Congenital tremor,CT)A-Ⅱ型的主要病原,主要感染猪,仔猪感染后主要出现全身肌肉震颤。目前,该病主要流行于美国、巴西和德国等国家,我国广东某猪场于2016年在猪只中首次检测出APPV。为提高人们对APPV的认识和重视,及早做好相关防控和检测技术储备,本文从APPV的病原学、流行病学、临床症状与病理变化、检疫与诊断等方面对取得的最新研究进展进行了概述。 展开更多
关键词 非典型性猪的瘟病毒(appv) 病原学 流行 诊断
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基于E^rns蛋白的猪非典型瘟病毒间接ELISA检测方法的建立 被引量:3
12
作者 黎振标 任旭皎 +4 位作者 刘健新 鲁荣 李慧子 张彭涛 宁章勇 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第3期35-41,共7页
猪非典型瘟病毒(APPV)是新近发现的仔猪先天震颤的病原体,其血清学检测方法亟待建立.E^rns蛋白是APPV诱导机体产生中和抗体的重要保守性抗原,是血清学检测的特异性靶标之一.本研究制备了猪非典型瘟病毒原核表达的Erns蛋白,以其作为包被... 猪非典型瘟病毒(APPV)是新近发现的仔猪先天震颤的病原体,其血清学检测方法亟待建立.E^rns蛋白是APPV诱导机体产生中和抗体的重要保守性抗原,是血清学检测的特异性靶标之一.本研究制备了猪非典型瘟病毒原核表达的Erns蛋白,以其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法.结果表明,最佳抗原包被浓度为8μg/mL,最佳血清稀释度为1:10,阴阳性临界值D450=0.318,灵敏度达到1:64,特异性好,与猪瘟、猪伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪流感及圆环病毒病的阳性血清均不发生交叉反应.该检测方法重复性好,批内变异系数最大值为7.84%,批间变异系数最大值为8.57%.利用建立的间接ELISA方法对50份猪临床血清样本进行了检测,其阳性率为10%.基于Erns蛋白间接ELISA检测方法的建立为APPV的流行病学调查和临床诊断提供了有效的工具. 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 E^rns蛋白 原核表达 间接ELISA
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猪非典型瘟病毒和盖塔病毒双重RT-PCR方法的建立与应用 被引量:2
13
作者 关铜 岳健国 +5 位作者 聂民财 李风琴 杜佩珊 杨姝 徐志文 朱玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期153-160,共8页
为快速准确地检测出猪非典型瘟病毒(APPV)与盖塔病毒(GETV),根据GenBank中公布的APPV NS3基因和GETV NSP3基因序列,选择APPV NS3基因和GETV NSP3基因的保守序列,各设计并合成了1对特异性引物。通过优化反应体系和反应条件,最终建立可以... 为快速准确地检测出猪非典型瘟病毒(APPV)与盖塔病毒(GETV),根据GenBank中公布的APPV NS3基因和GETV NSP3基因序列,选择APPV NS3基因和GETV NSP3基因的保守序列,各设计并合成了1对特异性引物。通过优化反应体系和反应条件,最终建立可以同时扩增出500和810 bp特异性片段的双重RT-PCR。该方法对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪流行性腹泻病毒的扩增结果均为阴性。对APPV和GETV重组质粒的最低检出量分别为187和126 copies/μL并具有高重复性。应用本方法检测从四川自贡市、泸州市等地采集的38份仔猪肌肉震颤样本,结果显示,APPV、GETV的阳性率分别为13.16%和7.89%,与单一RT-PCR方法对APPV和GETV的检出率完全一致。本研究中成功建立的APPV、GETV双重RT-PCR方法为APPV和GETV的快速检测提供了技术手段,有助于仔猪先天性震颤的临床诊断和流行病学调查,对于公共卫生也有一定意义。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 盖塔病毒 双重RT-PCR
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猪非典型性瘟病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:2
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作者 郭佳琪 杨晓宇 +3 位作者 冯宇 杨钒 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期357-362,共6页
为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPV NS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500 bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(... 为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPV NS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500 bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,该方法对APPV的最低检出量为1μl 4.95×10~4拷贝,重复性试验中组间、组内试验结果均与预期相符。应用该方法对68份疑似患病的仔猪样品进行检测,阳性病料检出率为7.35%。利用Mega7.0绘制APPV系统进化树,对APPV进行遗传进化分析,结果显示本试验检出的APPV(SC株)与中国报道的APPV的亲缘关系较近。建立的APPV RT-PCR检测方法可用于APPV的临床诊断及流行病学检测。 展开更多
关键词 猪非典型性瘟病毒 RT-PCR 检测
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