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Inhibition of Dual Specific Oncolytic Adenovirus on Esophageal Cancer via Activation of Caspases by a Mitochondrial-dependent Pathway 被引量:38
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作者 SU Jia-qiang CHI Bao-rong +5 位作者 LI Xiao LIU Lei LIU Li-ming QI Yan-xin WANG Zhuo-yue JIN Ning-yi 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2012年第3期465-471,共7页
We investigated the anti-tumor effects of dual cancer specific-oncolytic adenovirus Ad-VP on esophageal cancer(EC). The anti-tumor activity of Ad-VP was compared with that of the control recombinant adenoviruses (A... We investigated the anti-tumor effects of dual cancer specific-oncolytic adenovirus Ad-VP on esophageal cancer(EC). The anti-tumor activity of Ad-VP was compared with that of the control recombinant adenoviruses (Ad-GP, Ad-Apoptin, Ad-EGFP) in human esophageal cancer cell EC-109 and human normal liver cell L02 in vitro. In 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assays, the growth of EC-109 cells was slightly inhibited by Ad-GP, Ad-Apoptin and Ad-EGFE However, Ad-VP induced a significant cytotoxic effect. Infection of EC-109 cells with Ad-VP resulted in a significant induction of apoptosis of them in vitro, detected by 4',6-diamidino-2-phenylindole(DAPI) or acridine orange and ethidium bromide staining. The results of Western blot and flow cytometric assay indicate the loss of mitochondrial membrane potential(Aψm), the release of eytochrome c and the activation of caspase-3, 6 and 7 in Ad-VP infected EC-109 cells. In contrast, all these assays show almost no effects of the recombinant adenoviruses on L02 cells. These results demonstrate that the treatment of tumors with Ad-VP selectively inhibits tumor growth and induces apoptosis of esophageal cancer cells. Ad-VP may provide a novel and powerful strategy for cancer gene therapy. 展开更多
关键词 apoptin Apoptosis ANTI-TUMOR Esophageal cancer Recombinant adenovirus
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TAT-凋亡素融合蛋白的表达及其抗肿瘤活性 被引量:11
2
作者 陶站华 刘兴汉 +4 位作者 张宇雯 马洪星 刘远莉 栗亚 李丹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期535-541,共7页
凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有毒性.为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-... 凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有毒性.为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-apoptin的原核表达载体pET-28a-TAT-apoptin.在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用IDA-Ni2+亲和柱纯化,葡聚糖凝胶G25除去尿素后得到可溶的变性蛋白.纯化后的TAT-apoptin加入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺癌Anip973细胞,对照组加入TAT-麦芽糖结合蛋白(TAT-MBP).经免疫组化检测,转导1h后TAT-MBP分布于以上两种细胞的胞浆和胞核,TAT-apoptin则主要分布于2种细胞的胞浆内,转导24h后TAT-MBP的亚细胞定位没有变化,TAT-apoptin分别定位于HUVECs的胞浆和Anip973的胞核中.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)显示转导48h后,TAT-MBP处理过的HUVECs和Anip973细胞、TAT-apoptin处理过的HUVECs没有明显改变,而TAT-apoptin处理过的Anip973细胞大量凋亡.以上结果表明TAT-apoptin融合蛋白在肿瘤治疗上有潜在的应用价值. 展开更多
关键词 凋亡 凋亡素 蛋白质转导 肿瘤治疗
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Apoptin特异性诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 被引量:5
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作者 王清明 贺福初 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期509-512,共4页
Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,能特异性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,而对正常细胞无凋亡诱导作用。Apoptin的肿瘤细胞特异性与其在细胞中的亚细胞定位有关,在转化或肿瘤细胞中,Apoptin定位于细胞核,而在正常细胞中定位于细胞... Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,能特异性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,而对正常细胞无凋亡诱导作用。Apoptin的肿瘤细胞特异性与其在细胞中的亚细胞定位有关,在转化或肿瘤细胞中,Apoptin定位于细胞核,而在正常细胞中定位于细胞质。Apoptin的磷酸化决定其核定位,在肿瘤细胞中,Apoptin被磷酸化,磷酸化的Apoptin进入细胞核,并诱导细胞凋亡。Apoptin诱导的细胞凋亡不依赖p53,不为bcl鄄2、bcl鄄xL的过表达所抑制,但Apoptin诱导的快速凋亡效应需要caspase鄄3的活化。Apoptin具有很强的形成聚合体的倾向,在细胞内表达的Apoptin以多聚体形式存在,但多聚体的形成和解聚并不是其诱导凋亡所必需的。Apoptin诱导细胞凋亡的功能可能与其DNA结合能力密切相关。 展开更多
关键词 apoptin 凋亡 核定位 肿瘤
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pIRVP3/pIRHNVP3核酸表达质粒的构建及对肿瘤细胞的影响 被引量:3
4
作者 龚伟 薛立娟 +5 位作者 孙大辉 王宏伟 葛涛 罗琴芳 李萍 金宁一 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期30-32,共3页
目的 研究应用凋亡素基因 (VP3)和NDVHN基因联合抗肿瘤的可能性。方法 以pIRES1neo为表达载体构建了含鸡贫血病毒VP3基因和长春株HN基因的pIRVP3/pIRHNVP32个核酸重组质粒。将 2个重组质粒在体外转染HeLa和OS 732细胞 ,用荧光显微镜、... 目的 研究应用凋亡素基因 (VP3)和NDVHN基因联合抗肿瘤的可能性。方法 以pIRES1neo为表达载体构建了含鸡贫血病毒VP3基因和长春株HN基因的pIRVP3/pIRHNVP32个核酸重组质粒。将 2个重组质粒在体外转染HeLa和OS 732细胞 ,用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法 ,检测凋亡素基因和HN基因导致细胞死亡的类型。结果pIRVP3和pIRHNVP3转染HeLa和OS 732细胞 4 8h后 ,pIRVP3和pIRHNVP3均具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,且pIRVP3的抗肿瘤作用强于pIRHNVP3。结论 在体外 。 展开更多
关键词 凋亡素 NDV HN 抗肿瘤作用 pIRVP3/pIRHNVP3 免疫治疗 核酸 生物制剂
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凋亡素(apoptin)诱导人白血病细胞的凋亡 被引量:4
5
作者 谭芳 张玉静 +3 位作者 徐彦波 刘万臣 张艳宇 柳凤琴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期571-572,共2页
为了观察凋亡素 (apoptin)能否诱导白血病细胞发生凋亡 ,利用脂质体介导将凋亡素基因真核表达质粒转染白血病细胞系。通过琼脂糖凝胶电泳分析、电子显微镜观察 ,结果表明 。
关键词 凋亡素 白血病细胞 细胞凋亡
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Apoptin引起肿瘤细胞G_2-M阻滞 被引量:4
6
作者 何湘君 尚世彤 +2 位作者 刘玉京 张旗 王申五 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期263-267,共5页
目的 :研究凋亡素 (apoptin)特异诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,探讨其用于肿瘤治疗的可能性。方法 :用PCR技术克隆了apoptin基因 ,将其插入预先装有FLAG标签的真核表达质粒pcDNA3.1中 ,并构建了带有apoptin基因的腺病毒载体 ,观察转染pcDNA3... 目的 :研究凋亡素 (apoptin)特异诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,探讨其用于肿瘤治疗的可能性。方法 :用PCR技术克隆了apoptin基因 ,将其插入预先装有FLAG标签的真核表达质粒pcDNA3.1中 ,并构建了带有apoptin基因的腺病毒载体 ,观察转染pcDNA3.1/FLAG/apoptin和 /或Ad/apoptin重组腺病毒感染后apoptin在几种细胞中的表达及细胞形态的改变 ,用流式细胞术分析PI染色后Ad/apoptin感染细胞的DNA含量变化。结果 :apoptin在Hela、Bcap37、A5 4 9、HepG2、SKOV3等肿瘤细胞核中表达 ,apoptin重组腺病毒感染后细胞核染色质呈颗粒状 ,最后凝聚成不规则大块并出现核固缩。正向和反向插入apoptin的重组腺病毒均引起G2 M细胞增多 ,但前者引起G2 M阻滞更为显著 ,需要的感染复数 (MOI)也较低。结论 :apoptin可引起肿瘤细胞周期G2 M阻滞和染色质凝聚。 展开更多
关键词 apoptin 肿瘤细胞 G2-M阻滞 染色质 鸡贫血病毒 凋亡素
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凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究 被引量:3
7
作者 孙大辉 金宁一 +2 位作者 谷贵山 龚伟 段德生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第3期193-195,共3页
目的 :研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞OS 732多药耐药株R OS 732的作用。方法 :凋亡素基因VP3 经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法 pIRVP3转染R OS 732细胞 ,RT PCR检测凋亡素在细胞中的表达 ;光镜及电镜下观察瘤... 目的 :研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞OS 732多药耐药株R OS 732的作用。方法 :凋亡素基因VP3 经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法 pIRVP3转染R OS 732细胞 ,RT PCR检测凋亡素在细胞中的表达 ;光镜及电镜下观察瘤细胞 ;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ;流式细胞仪检测凋亡率。结果 :凋亡素基因已在转录水平表达 ;光镜及电镜下 2组细胞形态变化明显 ;电泳见转染组DNA呈梯状条带 ,对照组为单一条带 ;转染组凋亡率明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。结论 :凋亡素可有效诱导R OS 732细胞凋亡。 展开更多
关键词 凋亡素 成骨肉瘤 多药耐药性 凋亡细胞
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TAT-Apoptin融合蛋白分泌表达载体的构建及其活性检测 被引量:9
8
作者 刘雪梅 崔剑 +2 位作者 侯伟健 李其久 贲松彬 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期45-48,共4页
目的构建具有自主跨膜能力的Apoptin融合蛋白表达载体,使其分泌表达,避开包涵体复性,简化制备工艺。方法人工合成反式激活蛋白(TAT)序列,与Apoptin序列融合,连接到pET22b+载体上,构建原核分泌表达载体pET22b+-TAT-Apoptin,IPTG诱导目的... 目的构建具有自主跨膜能力的Apoptin融合蛋白表达载体,使其分泌表达,避开包涵体复性,简化制备工艺。方法人工合成反式激活蛋白(TAT)序列,与Apoptin序列融合,连接到pET22b+载体上,构建原核分泌表达载体pET22b+-TAT-Apoptin,IPTG诱导目的蛋白分泌表达到大肠杆菌周质空间,提取蛋白行SDS-PAGE分析,MTT法检测分泌表达的融合蛋白对胃癌823细胞的抑制作用。结果重组TAT-Apoptin蛋白可分泌至大肠杆菌周质空间中,以可溶状态存在,对胃癌823细胞的最大抑制率为83.95%。结论成功构建重组TAT-Apoptin蛋白表达载体,分泌表达的可溶性融合蛋白具有生物活性。 展开更多
关键词 反式激活蛋白 凋亡素 分泌表达 凋亡
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Apoptin的分子生物学基础及作用特点 被引量:9
9
作者 章应慧 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1998年第2期49-52,共4页
Apoptin是由鸡贫血病毒编码的一种小分子蛋白,它以非P53依赖性途径诱导不同类型人肿瘤细胞的凋亡,不受Bcl-2的抑制作用。令人感兴趣的是Apoptin不诱导人类正常细胞的凋亡,但当正常细胞被病毒转化后则易受Apoptin诱导的凋亡。这些特性使... Apoptin是由鸡贫血病毒编码的一种小分子蛋白,它以非P53依赖性途径诱导不同类型人肿瘤细胞的凋亡,不受Bcl-2的抑制作用。令人感兴趣的是Apoptin不诱导人类正常细胞的凋亡,但当正常细胞被病毒转化后则易受Apoptin诱导的凋亡。这些特性使得Apoptin很可能成为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂。 展开更多
关键词 apoptin 细胞凋亡 分子生物学 鸡贫血病毒 病毒
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凋亡素:一种诱导肿瘤特异性细胞凋亡的病毒蛋白 被引量:7
10
作者 章应慧 屈伸 Mathieu H.M.Noteborn 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期63-68,共6页
本文对肿瘤特异性细胞凋亡素(apoptin)的研究进展,包括Apoptin的肿瘤特异性细胞凋亡效应和肿瘤治疗应用研究、Apoptin的生物物理和生物化学特性、Apoptin的凋亡功能区域以及细胞核定位对Ap-optin肿瘤特异性凋亡效应的重要性、Apoptin相... 本文对肿瘤特异性细胞凋亡素(apoptin)的研究进展,包括Apoptin的肿瘤特异性细胞凋亡效应和肿瘤治疗应用研究、Apoptin的生物物理和生物化学特性、Apoptin的凋亡功能区域以及细胞核定位对Ap-optin肿瘤特异性凋亡效应的重要性、Apoptin相关蛋白质、肿瘤特异性磷酸激酶对Apoptin的激活作用及正常细胞对Apoptin的中和机制等进行了综述,讨论了Apoptin的激活与肿瘤发生过程的相关性及Apoptin作为一种特异性肿瘤杀手用于肿瘤治疗和作为一种肿瘤特异性感应蛋白用于肿瘤发生研究的前景。 展开更多
关键词 凋亡素 细胞凋亡 磷酸激酶 磷酸化 肿瘤发生
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凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡 被引量:4
11
作者 孙国敬 童新 孙志贤 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2001年第2期85-87,90,共4页
目的 :克隆凋亡素 (apoptin)的全长基因 ,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡。方法 :从CAV病毒基因组TK580 3中通过PCR技术扩增凋亡素基因 ,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo ,序列测定证实其正确性 ,并克隆至pCIneo真核表达载... 目的 :克隆凋亡素 (apoptin)的全长基因 ,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡。方法 :从CAV病毒基因组TK580 3中通过PCR技术扩增凋亡素基因 ,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo ,序列测定证实其正确性 ,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体。采用脂质体转染HeLa细胞 ,转染 3d后Honchest332 58染色并于荧光显微镜下观察细胞状态。结果与讨论 :核酸序列分析证实所克隆的凋亡素基因与文献报道的一致 ,将其成功克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo和pCIneo ,构建了真核重组质粒pCIneo apoptin和pCDNA3.1/His/Topo apoptin ,转染HeLa细胞 3d后可见明显的细胞凋亡 ,而只转染空质粒的对照组则较少。表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡。 展开更多
关键词 凋亡素 克隆 HELA细胞凋亡 聚合酶链反应 基因转染 肿瘤
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肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制 被引量:8
12
作者 贲松彬 赵洪礼 +1 位作者 聂晶 李红扬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期527-529,共3页
目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染... 目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 肿瘤特异性凋亡基因 细胞凋亡 c—Jun氨基末端激酶
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凋亡素基因的克隆 被引量:6
13
作者 谭芳 张玉静 +3 位作者 徐彦波 刘万臣 张永亮 欧阳红生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期421-423,共3页
为了探索应用凋亡素杀死肿瘤细胞的可能性,用PCR方法扩增了鸡贫血病毒(chickenanemiavirus,CAV)的VP3基因(凋亡素)片段,然后将该片段重组于pUC19载体,并进行了限制性内切酶鉴定与序列分析,证... 为了探索应用凋亡素杀死肿瘤细胞的可能性,用PCR方法扩增了鸡贫血病毒(chickenanemiavirus,CAV)的VP3基因(凋亡素)片段,然后将该片段重组于pUC19载体,并进行了限制性内切酶鉴定与序列分析,证实该片段与鸡贫血病毒Cux-1株的VP3DNA序列一致,该DNA全长363bp,编码121个氨基酸。 展开更多
关键词 凋亡素 VP3 鸡贫血病毒 聚合酶链反应 克隆
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青海黑果枸杞原花青素对小鼠光老化皮肤的保护作用 被引量:7
14
作者 陶丛敏 冶娟 +1 位作者 马文宇 罗文娟 《实用皮肤病学杂志》 2018年第2期74-77,共4页
目的研究黑果枸杞原花青素对紫外线照射(UV)引起的小鼠皮肤光老化的保护作用。方法 SPF级昆明小鼠50只随机分成5组:正常对照组、模型组、阳性对照组(维生素E组)、原花青素低剂量组、原花青素高剂量组。除了正常对照组,其余组每日颈背部... 目的研究黑果枸杞原花青素对紫外线照射(UV)引起的小鼠皮肤光老化的保护作用。方法 SPF级昆明小鼠50只随机分成5组:正常对照组、模型组、阳性对照组(维生素E组)、原花青素低剂量组、原花青素高剂量组。除了正常对照组,其余组每日颈背部皮下注射5%D-半乳糖(10 ml/kg),同时进行UV[长波紫外线(UVA)+中波紫外线(UVB)]照射。造模第11天开始,正常对照组、模型组每日给予生理盐水灌胃,原花青素低剂量组、原花青素高剂量组每日按剂量[50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)]灌胃黑果枸杞原花青素,阳性对照组每只给予维生素E滴剂0.5 ml,连续用药30 d。肉眼观察各组小鼠皮肤外观及皮下血管变化;以酶生化法测定皮肤组织活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定皮肤组织Bax、Bcl-2及血清中白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。结果与正常对照组相比,模型组皮肤组织中Bax、IL-1、IL-6、TNF-α含量显著上升,ROS、CAT活力,Bcl-2的含量下降(P<0.05);与模型组比较,黑果枸杞原花青素低、高剂量组皮肤组织中Bax、IL-1、IL-6、TNF-α含量的表达水平显著下降,ROS、CAT活力,Bcl-2含量上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组皮肤颜色变暗、粗糙肥厚,出现皱纹,并伴有脱屑;黑果枸杞原花青素组皮肤外观较模型组明显改善。结论黑果枸杞原花青素对UV引起的小鼠皮肤光老化具有保护作用,其机制可能与黑果枸杞原花青素抑制细胞内活性氧产生,降低线粒体通透性,抑制细胞色素C释放,抑制细胞凋亡,减轻炎症反应有关。 展开更多
关键词 原花青素 紫外线 D-半乳糖 抗氧化 凋亡蛋白 炎症
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抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析 被引量:6
15
作者 李霄 金宁一 +6 位作者 李昌 田明尧 陈漉 贾鹏 刘立明 刘妍 高鹏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期682-686,共5页
结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain F... 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂. 展开更多
关键词 癌胚抗原 二硫键稳定性单链抗体 凋亡素基因 原核表达
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体外拼装凋亡素基因 被引量:6
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作者 陈学清 王亚东 +2 位作者 孙勇 段佑才 马高峰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期195-197,共3页
目的以凋亡素基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法按已知的凋亡素基因序列(GeneBank登录号:AY171617),设计40bp的凋亡素基因寡核苷酸片段,并将其中的172位(BglII,agatct→agatcc)和306位碱基(HindIII,aagctt→aatcct)... 目的以凋亡素基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法按已知的凋亡素基因序列(GeneBank登录号:AY171617),设计40bp的凋亡素基因寡核苷酸片段,并将其中的172位(BglII,agatct→agatcc)和306位碱基(HindIII,aagctt→aatcct)进行同义突变,Taq消除这两个酶切位点。在pfu酶的PCR系统中,对寡核苷酸片段进行拼装和扩增。产物稀释后进一步纯化扩增,在Tag酶存在的条件下对产物两末端加T,然后TA克隆于pGEM-Teasy载体中。阳性克隆经测序鉴定。结果凋亡素基因寡核苷酸片段第1次PCR拼装后,产物呈拖尾状。但产物经进一步稀释,并用两未端引物进行2次扩增后,即可见明确的产物带及其他梯形带状产物。目的产物TA克隆后,筛选得到阳性克隆,其经测序鉴定,与设计的凋亡素基因序列完全一致。结论体外基因拼装法是一种非常有效的基因克隆方法,可用于基因或载体的合成,及一次性对基因进行广泛的突变。 展开更多
关键词 基因拼装 凋亡素 聚合酶链式反应
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鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用 被引量:5
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作者 连海 金宁一 +6 位作者 李霄 陈立刚 张静敏 管国芳 孙丽丽 李雪梅 郑洪玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期229-232,共4页
目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,... 目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 凋亡素 人白细胞介素18 肝癌细胞 凋亡
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96序列相似的家庭成员B在凋亡素特异性诱导HepG2细胞凋亡中的作用 被引量:7
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作者 蔡逊 马丹丹 +3 位作者 张智勇 金炜东 张建新 田俊 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2317-2319,共3页
目的 探讨96序列相似的家庭成员B(FAM96B)在凋亡素(Apoptin)特异性诱导人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B和含人Apoptin全长序列的pcDNA3-HA-Apoptin重组质粒共转染到人肝癌细胞株... 目的 探讨96序列相似的家庭成员B(FAM96B)在凋亡素(Apoptin)特异性诱导人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B和含人Apoptin全长序列的pcDNA3-HA-Apoptin重组质粒共转染到人肝癌细胞株HepG2细胞中,采用激光共聚焦显微镜观察共转染FAM96B与Apoptin对细胞定位的影响,流式细胞仪检测共转染FAM96B与Apoptin对细胞凋亡的影响.结果 激光共聚焦显微镜观察结果显示,Apoptin定位于HepG2细胞核,FAM96B定位于细胞质.过表达FAM96B通过与Apoptin相互作用可致部分Apoptin定位于细胞质.流式细胞仪检测结果显示:共转染Apoptin和FAM96B的HepG2细胞凋亡率显著低于单独转染Apoptin组[(31.76±1.88)% vs.(44.85±1.85)%,P<0.05],表明过表达FAM96B通过与Apoptin相互作用降低Apoptin特异性诱导HepG2细胞的凋亡.结论 共转染FAM96B与Apoptin于HepG2细胞中,过表达FAM96B通过与Apoptin相互作用可致部分Apoptin定位于细胞质,从而抑制Apoptin特异性诱导HepG2细胞的凋亡效应. 展开更多
关键词 96序列相似的家庭成员B 凋亡素 HEPG2 脱噬作用
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凋亡素诱导的肿瘤细胞凋亡 被引量:3
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作者 陈莲 高洪 肖啸 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期16-18,共3页
细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制 ,并贯穿于整个生命活动。细胞凋亡异常可导致一些疾病的发生 ,如肿瘤的发生。同时 ,细胞凋亡的可诱导性也为肿瘤治疗提供了新的思路。凋亡素是来源于鸡贫血病毒的一个小分子蛋白。它能够... 细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制 ,并贯穿于整个生命活动。细胞凋亡异常可导致一些疾病的发生 ,如肿瘤的发生。同时 ,细胞凋亡的可诱导性也为肿瘤治疗提供了新的思路。凋亡素是来源于鸡贫血病毒的一个小分子蛋白。它能够选择性地诱导肿瘤细胞的凋亡 ,而对正常二倍体的细胞无任何毒副作用 ,并且正常细胞对凋亡素具有耐受性。凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡既不需要依赖 p53 ,也不会被bcl-2的过表达所抑制。凋亡素还能诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株 R-OS-73 2的细胞凋亡。这些特点使凋亡素成为一种新型的候选抗肿瘤制剂。 展开更多
关键词 凋亡素诱导 肿瘤细胞 细胞凋亡 生理机制 贫血病毒 小分子蛋白
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Anti-tumor Effects of a Recombinant Fowlpox Virus Expressing Apoptin on Human Cervical Carcinoma in Vivo and in Vitro 被引量:3
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作者 ZHU Ji-hong LI Xiao +7 位作者 SUN Li-li ZHANG Mu-chun KAN Shi-fu LIU Lei HUANG Hai-yan YANG Guo-hua PIAO Bing-guo JIN Ning-yi 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期646-650,共5页
Apoptin is a chicken anemia virus-derived,p53-independent,bcl-2-insensitive apoptotic protein with the ability to specifically induce apoptosis of various human tumor cells,but not of normal diploid cells.To explore t... Apoptin is a chicken anemia virus-derived,p53-independent,bcl-2-insensitive apoptotic protein with the ability to specifically induce apoptosis of various human tumor cells,but not of normal diploid cells.To explore the application of apoptin in tumor gene therapy,we used a recombinant fowlpox virus expressing apoptin protein (vFV-Apoptin) to investigate the anti-tumor effectes of vFV-Apoptin on human cervical carcinoma(HeLa) cells in vivo and in vitro through 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay,acridine orage/ethidium bromide(AO/EB) and annexin V staining test,respectively.The results show that vFV-Apoptin inhibites the proliferation of HeLa cells in vitro through inducing the apoptosis of HeLa cells,and the inhibition effect of vFV-Apoptin has a dose-effect and time-effect relationship.The results of animal models show that vFV-Apoptin significantly inhibits tumor growth,extends the lifespan of animals and improves the mean survival.Experimental results indicate that vFV-Apoptin has a potential application in the tumor gene therapy. 展开更多
关键词 apoptin gene Chicken anemia virus Human cervical carcinoma Anti-tumor effect
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