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AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡 被引量:15
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作者 路艳艳 杨锦蓉 王菁 《浙江预防医学》 2007年第6期11-14,共4页
目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可... 目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见:活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义(F=8.299,P<0.01),随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。 展开更多
关键词 DMF染毒 肝细胞 凋亡 ao/eb染色 流式细胞术
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DEHP致草鱼肝细胞凋亡的三种检测方法分析
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作者 王淑悦 王海彬 +2 位作者 孙宗仪 刘运枫 周晓玲 《畜牧兽医科技信息》 2024年第10期49-51,共3页
为了验证邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)所致细胞凋亡的最佳检测方法,本文以对数生长期的草鱼肝细胞为实验对象,通过3种不同检测方法,即AO/EB染色、Hoechst 33342染色以及Rhodamine123染色来对比研究DEHP对草鱼肝细胞凋亡的影响并比... 为了验证邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)所致细胞凋亡的最佳检测方法,本文以对数生长期的草鱼肝细胞为实验对象,通过3种不同检测方法,即AO/EB染色、Hoechst 33342染色以及Rhodamine123染色来对比研究DEHP对草鱼肝细胞凋亡的影响并比较检测方法之间的优缺点。结果显示,在三种染色方法中均可见到草鱼肝细胞凋亡现象。AO/EO染色可区分四种细胞形态,但仅可在细胞悬液状态下使用且EB染料对人体有一定毒害作用。Hoechst 33342染色易区分正常细胞与凋亡细胞,但少数细胞的染色结果会与实际凋亡情况相反,因此该染色方法不应单独使用。Rhodamine123染色对细胞无任何毒性作用可在第一时间提示细胞凋亡的发生,但染色可能与线粒体能量状态无关,染色剂在细胞内保留性差,膜电位的变化也可能由其他因素导致,使测量结果没有指向性。综上所述,三种检测方法均表明DEHP可以诱导草鱼肝细胞凋亡,将对水生生物造成严重威胁。若要真正有效的反映细胞发生凋亡的情况,需结合多种染色方法综合分析。 展开更多
关键词 DEHP 细胞凋亡检测 ao/eb染色 Hoechst 33342染色 Rhodamine染色
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姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响 被引量:10
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作者 许建华 赵蓉 +2 位作者 柯丹如 黄自强 陈元仲 《中药药理与临床》 CAS CSCD 1998年第6期19-22,共4页
K562细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性,本文以AO/EB染色法、细胞分光光度术、DNA凝胶电泳及电镜观察等方法,发现姜黄素可显著诱导K562细胞凋亡,提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。
关键词 姜黄素 人白血病K562细胞 细胞凋亡 白血病 DNA凝胶电泳 电镜观察 ao/eb染色 细胞分光光度术
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氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究 被引量:4
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作者 梁蓉 王哲 +5 位作者 黄高 乔岩 王爱勤 董宝侠 郭英 王娟红 《实用癌症杂志》 2005年第1期20-23,27,共5页
目的 探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后... 目的 探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果 0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论 GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。 展开更多
关键词 K562细胞凋亡 氨基葡萄糖硫酸盐 实验研究 CASPASE-3 CASPASE-3 BCL-2蛋白表达 ao/eb染色 慢性髓系白血病 Western bcl-2基因 Annexin 流式细胞仪 凋亡诱导作用 生长抑制作用 细胞生长曲线 台盼蓝拒染法 BLOT检测 对数生长期
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植物甾醇抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导DNA损伤的研究 被引量:2
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作者 曲刚 李天文 +1 位作者 崔洪斌 赵永焕 《黑龙江八一农垦大学学报》 2008年第1期66-70,共5页
为确定和评价植物甾醇对胃癌细胞SGC-7901生长的影响,采用MTT法检测植物甾醇对SGC-7901细胞生长的抑制作用,AO/EB和DAPI染色观察细胞形态的变化,单细胞凝胶电泳检测植物甾醇对SGC-7901细胞DNA的损伤。试验结果表明,植物甾醇对SGC-7901... 为确定和评价植物甾醇对胃癌细胞SGC-7901生长的影响,采用MTT法检测植物甾醇对SGC-7901细胞生长的抑制作用,AO/EB和DAPI染色观察细胞形态的变化,单细胞凝胶电泳检测植物甾醇对SGC-7901细胞DNA的损伤。试验结果表明,植物甾醇对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,并呈现时间-效应关系,不呈现剂量-效应关系;植物甾醇处理5d后,细胞出现皱缩、密度变小等变化;AO/EB荧光染色后,细胞核成固缩状,出现凋亡小体等凋亡细胞形态;DAPI染色后,可见细胞核边缘不整等凋亡细胞形态;单细胞凝胶电泳实验结果表明,植物甾醇混合物处理5d的细胞出现了彗星现象。植物甾醇对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,诱导SGC-7901细胞DNA的损伤。 展开更多
关键词 植物甾醇 MTT实验ao/eb染色 DAPI染色 单细胞凝胶电泳
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中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响 被引量:2
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作者 李劲 邓志芳 +6 位作者 高雯琪 胡文娟 刘莹 姚品芳 李广灿 陈焕朝 梅之南 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第1期46-49,共4页
通过MTT(四甲基偶氮唑盐)法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定"龙泉复方"有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明:对抑制HepG-2细胞... 通过MTT(四甲基偶氮唑盐)法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定"龙泉复方"有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明:对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度:七味单方(马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀)浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度:三味药物混合浸膏(马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物)〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为:50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度:七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳. 展开更多
关键词 龙泉复方 配伍 药物浓度 肿瘤细胞 MTT(四甲基偶氮唑盐)法 ao/eb染色
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不同粒径纳米氧化铝对体外培养神经细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 葛翠翠 李伟庆 +1 位作者 张勤丽 牛侨 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2012年第2期72-76,共5页
[目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测... [目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测细胞活力,用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法观察细胞死亡的形态学,采用Rhodamine123染色方法检测线粒体膜电位变化情况,间接反映早期凋亡变化,应用流式细胞仪测定各染毒组细胞凋亡。[结果]纳米粒子超声后,静置前后相比,电镜下可见纳米粒子均匀分布,且粒径小于100nm符合实验要求;AO/EB染色后,细胞形态学发生明显改变;罗丹明测线粒体膜电位,随着纳米氧化铝粒径的减小,膜电位逐渐降低;应用流式细胞术检测凋亡,随着纳米氧化铝粒径的减小,凋亡率逐渐增加。[结论]氧化铝颗粒能够引起原代培养的神经细胞凋亡,且粒径能够影响细胞凋亡率。 展开更多
关键词 不同粒径纳米氧化铝 细胞凋亡 ao/eb双重染色 线粒体膜电位 流式细胞术
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AO/EB双重染色法检测人骨肉瘤细胞凋亡 被引量:15
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作者 吴兴 陈峥嵘 张光健 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期88-89,共2页
关键词 ao/eb双重染色 检测 骨肉瘤 细胞凋亡 肿瘤细胞
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南蛇藤提取物体外抑瘤作用研究 被引量:16
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作者 张舰 许运明 刘延庆 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期99-101,共3页
目的:探讨南蛇藤提取物体外抗肿瘤作用及诱导细胞凋亡作用。方法:MTT法对南蛇藤提取物的分离成分进行初步筛选,在此基础上用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双重荧光染色法观察南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导SGC-7901细胞凋亡作用。结果:南蛇藤乙酸... 目的:探讨南蛇藤提取物体外抗肿瘤作用及诱导细胞凋亡作用。方法:MTT法对南蛇藤提取物的分离成分进行初步筛选,在此基础上用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双重荧光染色法观察南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导SGC-7901细胞凋亡作用。结果:南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物有较强的抗肿瘤作用。南蛇藤乙酸乙酯提取物40 mg/L对SGC-7901细胞有明显诱导凋亡作用。 展开更多
关键词 南蛇藤 MTT ao/eb双重荧光染色 凋亡
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牛黄天龙胶囊(含药血清)诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡及其机制 被引量:4
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作者 田彦玲 王玉花 +1 位作者 程建新 刘京生 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期417-421,475,共6页
目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖... 目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法及电镜(TEM)下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,测定凋亡抑制蛋白survivin和凋亡效应蛋白Caspase-3的表达。结果MTT法:人子宫内膜癌HEC-B细胞经含药血清作用后细胞生长受到明显抑制且以低剂量组抑制率最高。细胞排染法:同一时间段内以低剂量组效果最好,不同时间段内(24、48h)细胞抑制率显著提高(P<0.01)。AO/EB和TEM:实验组均可见到典型细胞凋亡的形态学变化。FCM:实验组各组细胞凋亡率与空白组相比差异有显著性(P<0.01)且以低剂量组最高,细胞周期分析显示实验组G0/G1期细胞明显增多而S期细胞明显减少与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Survivin蛋白表达在空白组最高,在实验组表达降低与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Caspase-3表达则相反,在实验组表达最高与空白组相比差异有显著性(P<0.01)。结论复方中药“牛黄天龙胶囊”(含药血清)能够使人子宫内膜癌HEC-B细胞生长阻滞在G0/G1期并可诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡;并可降低凋亡抑制蛋白survivin表达同时可提高凋亡效应蛋白Caspase-3表达,这可能是其诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡的机制之一;对人子宫内膜癌HEC-B细胞的抗肿瘤作用并非浓度越大效果越好而有一最适剂量。 展开更多
关键词 血清药理学 细胞凋亡 ao/eb双荧光染色 TEM FCM
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连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用的观察 被引量:1
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作者 文翔昊 李冲 +2 位作者 郭露 鲁启明 郭玉 《海峡药学》 2014年第12期235-238,共4页
目的:研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的抑制程度,AO/EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态,DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200~2667μg· mL -1内... 目的:研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的抑制程度,AO/EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态,DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200~2667μg· mL -1内,连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用,其抑制作用随药物浓度的增加而增强,对MCF-7细胞增殖抑制率由10.50%增加到43.83%,与对照组比较呈显著差异性(P<0.05vs正常组)。连花清瘟胶囊明显影响乳腺癌MCF-7细胞的染色质,发生固缩等凋亡形态的变化及细胞凋亡的 DNA梯带形状。结论连花清瘟胶囊具有抑制乳腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗肿瘤的药理作用。 展开更多
关键词 连花清瘟胶囊 乳腺癌MCF-7细胞 MTT法 ao/eb双荧光染色 DNA琼脂糖凝胶电泳
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