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有氧耐力运动调控大鼠心肌细胞自噬的机制 被引量:1
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作者 刘吉焕 王鹏 +4 位作者 袁顺灵 简晔 黄少泽 姚思思 刘文锋 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第23期3714-3720,共7页
背景:近年来,衰老相关的慢性病研究在世界范围内受到广泛关注,心脏随着年龄增长可能会出现过早衰老,运动作为一种安全健康的干预措施可以延缓其衰老。目的:观察实施规律有氧运动对心肌细胞增龄性老化的影响并探讨其机制。方法:纳入SD大... 背景:近年来,衰老相关的慢性病研究在世界范围内受到广泛关注,心脏随着年龄增长可能会出现过早衰老,运动作为一种安全健康的干预措施可以延缓其衰老。目的:观察实施规律有氧运动对心肌细胞增龄性老化的影响并探讨其机制。方法:纳入SD大鼠68只,3月龄(青年)20只,13月龄(中年)和22月龄(老年)各24只,每个年龄组再随机均分为静息组及运动组。对3个运动组实施为期10周的递增负荷有氧跑台运动,其中早期递增负荷6周,晚期恒负荷4周;3个静息组不进行有氧运动干预。干预结束后采用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测心肌Beclin-1、Ca MKⅡα1、AMPKα1/p AMPKα1和PI3K/Akt/m TOR等通路相关蛋白与基因的表达。结果与结论:(1)实施规律有氧运动后,与青、中、老3个年龄的静息组相比,3个年龄的运动组大鼠心肌细胞自噬Beclin-1表达水平均下调;同时3个年龄的运动组大鼠心肌Ca MKⅡα1 m RNA表达水平也下调;(2)3个年龄静息组p AMPKα1和AMPKα1蛋白表达水平均呈现增龄性趋势;青年、中年和老年运动组的AMPKα1表达水平分别上调16.50%(Ρ<0.05)、63.09%(Ρ<0.01)和31.12%(Ρ<0.01);p AMPKα1表达水平也显著上调,其中青年运动组为131.29%(Ρ<0.01),中年运动组上调40.55%(Ρ<0.01),老年运动组上调16.77%(Ρ<0.05);(3)整体来看,与3个年龄静息组相比,3个年龄运动组大鼠心肌PI3K表达水平均上调,青年、中年运动组AKT1 m RNA表达水平均下调;关于m TOR m RNA表达水平,青年运动组稍下调,中年运动组变化不大,而老年运动组显著上调;(4)提示有氧运动可以显著上调老年组大鼠PI3K的表达,促进m TOR的活性,下调Ca MKⅡα1的表达,下调p AMPKα1/AMPKα1的比值,抑制Beclin-1的表达,调控心肌自噬水平,使其趋向于正常稳定状态,从而延缓心肌衰老。 展开更多
关键词 规律有氧运动 心肌 老化 细胞自噬 ampk/p ampk信号通路
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AMPK/p38 MAPK通路介导黄芪多糖抑制大鼠心肌肥厚的研究 被引量:13
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作者 陈广琴 何金龙 +3 位作者 曲楠 白法文 洪钰杰 蓝金 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第6期1018-1023,共6页
目的:探讨黄芪多糖(APS)对心肌肥厚大鼠心肌组织AMPK/p38 MAPK通路的影响。方法:健康SD大鼠60只,雌雄各30只,随机分为5组:模型组,APS低、中、高剂量(L-APS、M-APS、H-APS)组,假手术组。模型组及L-APS、M-APS、H-APS组通过开腹结扎腹主... 目的:探讨黄芪多糖(APS)对心肌肥厚大鼠心肌组织AMPK/p38 MAPK通路的影响。方法:健康SD大鼠60只,雌雄各30只,随机分为5组:模型组,APS低、中、高剂量(L-APS、M-APS、H-APS)组,假手术组。模型组及L-APS、M-APS、H-APS组通过开腹结扎腹主动脉的方法构造心肌肥厚大鼠模型。术后1周开始,给予相应药物干预:L-APS、M-APS、H-APS组分别灌胃给予APS 200 mg·kg/d^-1、400 mg·kg/d^-1、800 mg·kg/d^-1,假手术组及模型组则给予同等体积蒸馏水灌胃。8周后,测定大鼠心肌重量指数(HMI)、左室重量指数(LVMI);应用苏木精-伊红(HE)染色观察心肌细胞形态并测定心肌细胞直径和表面积;Western blotting分别检测心肌组织AMPK、p38 MAPK的蛋白表达量。结果:模型组大鼠HMI、LVMI、心肌细胞直径和表面积均较假手术组增加(P<0.01),心肌明显肥厚;与模型组相比,APS各剂量组HMI、LVMI、心肌细胞直径和表面积均有不同程度降低,以H-APS组最为显著(P<0.01);H-APS组心肌无明显肥厚;APS各剂量组AMPK、p38MAPK磷酸化表达水平较模型组上调,以H-APS组明显(P<0.01)。结论:APS能改善主动脉缩窄所致的大鼠心肌肥厚,AMPK/p38 MAPK通路可能介导了APS抑制心肌肥厚的保护作用。 展开更多
关键词 黄芪多糖 主动脉缩窄 心肌肥厚 ampk/p38 MApK信号通路
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二甲双胍对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响 被引量:1
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作者 李君茹 李会方 +4 位作者 周嘉 张丽芸 卢晓 左大明 陈政良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1315-1319,共5页
目的:探究二甲双胍(metformin)对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:以U937细胞为研究对象,予不同浓度的二甲双胍处理,分别在24、48和72 h收集细胞。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡及细胞周期,并使用Western blot方法检... 目的:探究二甲双胍(metformin)对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:以U937细胞为研究对象,予不同浓度的二甲双胍处理,分别在24、48和72 h收集细胞。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡及细胞周期,并使用Western blot方法检测促凋亡蛋白Bax、抑凋亡蛋白Bcl-2、p-AMPK、p53的表达情况。结果:CCK8结果显示二甲双胍抑制U937的增殖,且呈时间-剂量依赖性。流式结果显示二甲双胍处理后细胞周期停滞在G0/G1期,G0/G1期细胞比例的增加呈时间-剂量依赖性。二甲双胍可诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;二甲双胍浓度为20 mmol/L时,凋亡率呈时间依赖性。Western blot结果显示二甲双胍处理后,p-AMPK、p53、Bax的表达上调,而Bcl-2的表达下调。结论:二甲双胍能抑制U937细胞的增殖,阻滞细胞周期在G0/G1期,诱导细胞凋亡;其机制可能与其上调胞内促凋亡蛋白Bax的表达、下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达、激活AMPK/p53通路有关。 展开更多
关键词 二甲双胍 U937细胞 增殖 细胞周期 凋亡 ampk/p53
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四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响 被引量:8
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作者 于红红 陈茜 +6 位作者 李芳 罗瑞熙 王腊 赵立凤 俞琦 许滔 田维毅(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期270-274,共5页
目的:探究四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响,并探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:灌胃给予SD大鼠不同剂量四妙勇安水煎液制备含药血清。油红O染色观察泡沫化巨噬细胞脂滴变化;CCK-8法观察含药... 目的:探究四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响,并探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:灌胃给予SD大鼠不同剂量四妙勇安水煎液制备含药血清。油红O染色观察泡沫化巨噬细胞脂滴变化;CCK-8法观察含药血清对泡沫巨噬细胞活化的影响;ELISA检测炎症性细胞因子IL-6、IL-10和IFN-γ表达;透射电镜观察细胞自噬水平;免疫荧光标记法检测LC3Ⅱ表达;RT-PCR及Western blot检测细胞AMPK/mTOR/p70S6K通路相关因子表达变化。结果:油红O染色显示,ox-LDL干预后胞质内可见大量橘红色脂滴;CCK-8显示浓度30%以下的含药血清干预泡沫化巨噬细胞OD值无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,含药血清刺激后,IL-6、IFN-γ表达降低,IL-10表达升高(P<0.05),含药血清组及雷帕霉素组细胞自噬小体形成增加,LC3Ⅱ、AMPK表达提高,mTOR、p70S6K表达降低(P<0.05)。结论:四妙勇安汤含药血清可调节ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化以及AMPK/mTOR/p70S6K信号通路,抑制炎症反应,诱导细胞自噬,可能是其防治AS的作用机制之一。 展开更多
关键词 四妙勇安汤 泡沫化巨噬细胞 ampk/mTOR/p70S6K信号通路 动脉粥样硬化 氧化低密度脂蛋白
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扶脾柔肝颗粒对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制研究 被引量:7
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作者 安祯祥 何远利 +3 位作者 唐东昕 黄丹 王敏 王芳 《中国药房》 CAS 北大核心 2021年第21期2587-2592,共6页
目的:研究扶脾柔肝颗粒(FRG)对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱片组(化学药阳性对照,0.2mg/kg)、扶正化瘀胶囊组(中药阳性对照,0.415g/kg)和FRG低、中、高剂量组(20、40、80g/kg),除空白... 目的:研究扶脾柔肝颗粒(FRG)对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱片组(化学药阳性对照,0.2mg/kg)、扶正化瘀胶囊组(中药阳性对照,0.415g/kg)和FRG低、中、高剂量组(20、40、80g/kg),除空白组和模型组各11只大鼠外(各取1只用于判断是否造模成功),其余每组10只。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液并灌胃30%乙醇以复制肝纤维化模型。造模成功后,各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续4周。末次灌胃后,观察大鼠肝组织病理形态学变化;检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平;检测大鼠肝组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平;检测大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肝小叶结构紊乱,纤维组织增生明显,部分有假小叶形成;血清中HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平和肝组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平以及Akt、AMPK、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,FRG各剂量组大鼠肝组织损伤明显减轻,血清和肝组织中上述指标(FRG低剂量组LN、PCⅢ除外)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FRG可改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与下调肝组织中自噬相关蛋白和Akt/AMPK/mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 扶脾柔肝颗粒 肝纤维化 自噬 Akt/ampk/mTOR/p70S6K信号通路 大鼠
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连翘苷对感染性休克小鼠急性肺损伤的作用与机制
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作者 张凡 韦焕杰 +4 位作者 李龙 欧阳涛 蔡娟 梁秋玲 曾育辉 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期186-190,195,共6页
目的 探讨连翘苷通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(p70 S6 kinase,p70S6K)信号通路介导的自噬对感... 目的 探讨连翘苷通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(p70 S6 kinase,p70S6K)信号通路介导的自噬对感染性休克小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的影响。方法 随机选择12只小鼠作为对照组,其余小鼠通过腹腔注射20 mg·kg^(-1)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)构建感染性休克小鼠模型,将感染性休克小鼠随机平分为模型组、低、中、高剂量实验组(5 mg·kg^(-1)、10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)连翘苷)、高剂量+抑制剂组(20 mg·kg^(-1)连翘苷+20 mg·kg^(-1)AMPK抑制剂compound C),每组均12只小鼠。称量肺干重及湿重,计算W/D比值;ELISA法检测BALF中炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平、血清内毒素(endotoxin,ET)含量、肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;HE染色检测肺组织病理变化;Western blot检测自噬蛋白微管相关蛋白-轻链3(microtubule-associated protein-light chain 3,LC3)-II/I、Beclin 1、Ras相关GTP结合蛋白7(Rasassociated GTP binding protein 7,Rab7)、溶酶体关联膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)、AMPK/m TOR/p70S6K信号通路蛋白表达。结果对照组、模型组、低、中、高剂量实验组和高剂量+抑制剂组小鼠肺组织LC3-II/I比值分别为1.43±0.14、0.73±0.07、0.81±0.07、1.12±0.10、1.39±0.13、0.76±0.08,Beclin1蛋白水平分别为1.05±0.11、0.43±0.05、0.50±0.05、0.76±0.08、0.98±0.10、0.46±0.05,Rab7蛋白水平分别为1.53±0.17、0.67±0.06、0.70±0.07、1.04±0.10、1.41±0.14、0.69±0.06,LAMP2蛋白水平分别为1.47±0.15、0.72±0.07、0.81±0.08、1.09±0.11、1.35±0.13、0.74±0.07,p-AMPK/AMPK蛋白水平分别为0.95±0.05、0.33±0.03、0.39±0.04、0.68±0.07、0.91±0.09、0.36±0.04,p-m TOR/m TOR蛋白水平分别 展开更多
关键词 连翘苷 ampk/mTOR/p70S6K信号通路 自噬 感染性休克 急性肺损伤
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大麻素Ⅱ型受体通过AMPK-mTOR-p70S6K通路抑制泡沫细胞形成 被引量:1
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作者 张宗祥 方迪龙 《医学研究杂志》 2022年第6期45-51,共7页
目的探究大麻素Ⅱ型受体(cannabinoid receptor 2,CB2R)在抗动脉粥样硬化中的作用和机制。方法利用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导THP-1细胞分化为THP-1巨噬细胞。通过氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipopro... 目的探究大麻素Ⅱ型受体(cannabinoid receptor 2,CB2R)在抗动脉粥样硬化中的作用和机制。方法利用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导THP-1细胞分化为THP-1巨噬细胞。通过氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞。采用油红O染色检测THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞的情况。通过Western blot法检测THP-1巨噬细胞中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、p-P70S6K和P70S6K的表达。利用酶联免疫吸附(ELISA)检测THP-1巨噬细胞IL-1β和IL-18表达变化。结果油红O染色检测显示,oxLDL成功诱导THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞。通过Western blot法检测发现,CB2R对oxLDL诱导THP-1巨噬细胞中NLPR3炎性小体具有抑制作用;同时,ELISA检测显示CB2R通过下调THP-1巨噬细胞IL-1β和IL-18的表达来抑制NLPR3炎性小体的产生。Western blot法检测发现,CB2R降低AMPK-mTOR-p70S6K通路的p-AMPK、p-mTOR和p-P70S6K蛋白表达来调控THP-1巨噬细胞产生NLPR3炎性小体。结论CB2R发挥抗动脉粥样硬化作用,其分子机制是通过AMPK-mTOR-p70S6K通路调节NLPR3炎性小体,进而抑制THP-1巨噬细胞形成泡沫细胞。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 THp-1巨噬细胞 大麻素Ⅱ型受体 NLpR3炎性小体 ampk-mTOR-p70S6K通路
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miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬发挥抗脓毒症作用的研究
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作者 王艳鹏 黄世恩 陈志明 《浙江中西医结合杂志》 2022年第2期110-115,共6页
目的探讨miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬,进而发挥抗脓毒症的作用机制研究。方法利用脂多糖(LPS)刺激大鼠心肌细胞H9C2构建脓毒症体外细胞模型。将大鼠心肌细胞H9C2分为对照组、LPS组、LPS+miR-100激动剂组和... 目的探讨miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬,进而发挥抗脓毒症的作用机制研究。方法利用脂多糖(LPS)刺激大鼠心肌细胞H9C2构建脓毒症体外细胞模型。将大鼠心肌细胞H9C2分为对照组、LPS组、LPS+miR-100激动剂组和LPS+miR-100拮抗剂组。细胞通过转染miR-100的激动剂或抑制剂使miR-100在细胞内过表达或敲低,并用qRTPCR检测细胞内miR-100的表达水平的改变;ELISA检测不同细胞处理组上清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的释放;细胞免疫荧光检测LC3蛋白在细胞中的表达;Western blot检测自噬相关蛋白(p62、LC3和beclin-1)和AMPK-mTOR-p70S6K通路相关蛋白(AMPK、p-AMPK、mTOR、pm TOR、p70S6K和p-p70S6K)的表达。结果与对照组比较,在LPS处理心肌细胞H9C2的脓毒症细胞模型中,血清炎症因子分泌显著增加[TNF-α:(145.05±0.15)pg/mL比(50.35±0.05)pg/mL;IL-6:(35.47±0.08)pg/mL比(12.15±0.11)pg/mL;IL-1β:(141.38±0.11)pg/mL比(72.46±0.09)pg/mL,P<0.05];与LPS组比较,LPS+miR-100激动剂组上调miR-100表达能够诱导增强细胞自噬,并且减弱炎症反应[TNF-α:(71.22±0.06)pg/mL比(145.05±0.15)pg/mL;IL-6:(12.36±0.09)pg/mL比(35.47±0.08)pg/mL;IL-1β:(78.48±0.13)pg/mL比(141.38±0.11)pg/mL,P<0.05];相反,LPS+miR-100拮抗剂组下调miR-100表达减弱了自噬,并且增强了炎症反应[TNF-α:(241.33±0.19)pg/mL比(145.05±0.15)pg/mL;IL-6:(49.78±0.12)pg/mL比(35.47±0.08)pg/mL;IL-1β:(205.69±0.08)pg/mL比(141.38±0.11)pg/mL,P<0.05];进一步研究发现,miR-100能够引起自噬相关信号通路AMPKmTOR-p70S6K中相关蛋白表达变化。结论 miR-100过表达可能通过上调AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬水平,发挥抗炎作用,进而在脓毒症中发挥保护作用。 展开更多
关键词 脓毒症 miR-100 自噬 ampk-mTOR-p70S6K通路
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