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补骨脂提取物对体外培养小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分化的影响 被引量：17
1
作者 宋芹 董小萍 郁小兵 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1264-1267,共4页
目的：研究补骨脂提取物对体外培养新生小鼠颅骨MC3T3-E1细胞分化的影响。方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型，将培养的MC3T3-E1小鼠成骨细胞分为4组：空白组，补骨脂提取物（含生药）0．02，0．2，2g·L^-1不... 目的：研究补骨脂提取物对体外培养新生小鼠颅骨MC3T3-E1细胞分化的影响。方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型，将培养的MC3T3-E1小鼠成骨细胞分为4组：空白组，补骨脂提取物（含生药）0．02，0．2，2g·L^-1不同剂量组。检测细胞ALP，I型胶原蛋白的含量，采用real—time PCR测定补骨脂提取物对MC3T3一E1细胞ALP，I型胶原蛋白及骨钙素mRNA表达的影响。结果：补骨脂提取物生药剂量0．2g·L^-1，能提高MC3T3-E1细胞ALP的活性，促进I型胶原蛋白分泌。同时分别在7～14d对MC3T3-E1细胞ALP，以及在14～21d I型胶原蛋白、骨钙素mRNA表达有明显的促进作用。结论：中药补骨脂提取物能有效促进成骨细胞的分化，为研究中药补骨脂的作用机制提供参考。 展开更多
关键词 补骨脂 alp I型胶原蛋白 骨钙素 基因表达
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绿色荧光蛋白体外转染与体内示踪成骨细胞的研究 被引量：10
2
作者 任高宏 刘晓静 +1 位作者 杨磊 裴国献 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期439-442,共4页
目的观察经腺病毒介导的绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)转染的成骨细胞的体外表达及体内示踪情况,探讨GFP作为组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法以腺病毒为载体,293A细胞为包装细胞,介导GFP转染成人骨髓源成骨细胞,与... 目的观察经腺病毒介导的绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)转染的成骨细胞的体外表达及体内示踪情况,探讨GFP作为组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法以腺病毒为载体,293A细胞为包装细胞,介导GFP转染成人骨髓源成骨细胞,与未转染的同期细胞作对照,在相差显微镜和荧光显微镜下观察,流式细胞术检测GFP表达效率;分别检测转染后两组细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性与骨钙素(OCN)的含量;并将GFP转染8d后的成骨细胞植入裸鼠股部肌袋内,术后4、8周取材进行荧光显微镜、HE染色组织学和免疫组织化学染色观察。结果GFP转染的骨髓源成骨细胞表达绿色荧光的阳性率达75%以上,转染8d后的成骨细胞表面抗原标志CD29、CD44高效表达,而CD34不表达;转染后4、8d细胞内ALP活性与OCN含量与未转染组比较差异无显著性意义(P>005)。GFP转染8d后的成骨细胞植入裸鼠体内4、8周均可表达明显的绿色荧光,并具有成骨细胞的形态特征,ALP免疫组化染色呈黄褐色。结论GFP能在体外转染、裸鼠体内示踪成骨细胞,是一种可用于组织工程研究的理想的活细胞示踪剂。 展开更多
关键词 成骨细胞 体外转染 体内 裸鼠 高效表达 植入 alp GFP 绿色荧光蛋白 活细胞
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胶原蛋白海绵对拔牙创愈合过程中基因ALP表达的影响 被引量：4
3
作者 李俊福 陈岱韻 +3 位作者 姜娟 吴长春 赵作勤 王旭霞 《泰山医学院学报》 CAS 2018年第10期1087-1089,共3页
目的探讨胶原蛋白海绵填入拔牙创后牙槽窝早期骨愈合过程中成骨相关基因ALP表达的变化。方法健康成年大鼠16只,建立大鼠拔牙模型,左侧拔牙创内填入胶原蛋白海绵为实验侧,右侧拔牙创为空白对照侧。拔牙术后1周、2周、4周、8周处死动物取... 目的探讨胶原蛋白海绵填入拔牙创后牙槽窝早期骨愈合过程中成骨相关基因ALP表达的变化。方法健康成年大鼠16只,建立大鼠拔牙模型,左侧拔牙创内填入胶原蛋白海绵为实验侧,右侧拔牙创为空白对照侧。拔牙术后1周、2周、4周、8周处死动物取材,利用实时定量PCR法检测实验侧与对照侧ALP表达变化。应用SPSS19.0软件对数据进行统计学分析。结果术后1周、2周、4周、8周,实验侧牙槽窝组织ALP基因表达相对定量均显著高于对照侧组织(P<0.05)。结论基因ALP在填入胶原蛋白海绵的拔牙创组织的表达上调。 展开更多
关键词 胶原蛋白海绵 基因表达 alp基因 实时定量PCR
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三江源高寒草甸土固氮基因(nifH)的多样性和系统发育研究 被引量：20
4
作者 张于光 王慧敏 +2 位作者 李迪强 肖启明 刘学端 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期166-171,共6页
首次利用PCR_RFLP和测序分析对位于青藏高原腹地的青海三江源保护区高寒草甸土壤微生物固氮基因(nifH)的多样性和系统发育进行了探讨。在 2个样地中 ,共得到 14 3个阳性克隆 ,用限制性内切酶MspⅠ和RsaⅠ进行RFLP分析后得到 35个不同的R... 首次利用PCR_RFLP和测序分析对位于青藏高原腹地的青海三江源保护区高寒草甸土壤微生物固氮基因(nifH)的多样性和系统发育进行了探讨。在 2个样地中 ,共得到 14 3个阳性克隆 ,用限制性内切酶MspⅠ和RsaⅠ进行RFLP分析后得到 35个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 2 4 . 5 % ,其中ZD样品中获得 82个阳性克隆和 2 1个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 2 5 6 % ,而YS样品中获得 6 1个阳性克隆和 19个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 31 1% ,2个样地中有 5个相同的RFLP谱带型。在各样地都发现一个明显的优势种群 ,ZD样地的明显优势种群占克隆数的2 9 3% ,YS的优势种群占克隆数的 32 .8%。对 2 1个克隆进行了部分序列的测定 ,序列的相似性在 71%～ 98%之间 ,在GenBank数据库中没有发现完全匹配的序列 ,因此这些序列可能代表着新的固氮生物株系。最后利用ClustalW与Mega软件和已有序列构建了系统发育树 ,结果发现 ,2 1个序列分为 4个不同的簇 ,大部分的克隆与Proteobac teria的 3个系统发育亚簇 (α、β和γ)具有较高的相似性 ,其中主要的序列都落在第一和第二簇内。YS样地中的优势种群与α_Proteobacteria中的Rhodobactersphaeroides具有较高的相似性 ,而ZD样地中的优势种群则与 β_Proteobac 展开更多
关键词 高寒草甸 固氮基因 多样性 系统发育
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HearNPV侵染对棉铃虫中肠碱性磷酸酶活性及表达水平的影响 被引量：6
5
作者 于欢 吕婷婷 +1 位作者 李晓峰 王敦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第12期127-130,共4页
【目的】通过研究棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)感染宿主昆虫后对宿主中肠碱性磷酸酶(ALP)活性与基因表达水平的影响,明确病毒在侵染宿主过程中对宿主昆虫中肠ALP的调控机理。【方法】采用不同剂量的HearNPV感染3龄棉铃虫,测定感染后... 【目的】通过研究棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)感染宿主昆虫后对宿主中肠碱性磷酸酶(ALP)活性与基因表达水平的影响,明确病毒在侵染宿主过程中对宿主昆虫中肠ALP的调控机理。【方法】采用不同剂量的HearNPV感染3龄棉铃虫,测定感染后不同时间昆虫中肠ALP酶活性及其编码基因表达水平,分析病毒感染试虫与未感染健康试虫的ALP活性和编码基因表达水平上的差异。【结果】HearNPV感染后,能够显著抑制ALP的活性,且抑制作用与感染病毒的剂量和感染后时间的增加呈正相关。ALP活性的下降与病毒下调其编码基因ALP的表达水平有关。【结论】HearNPV感染其宿主昆虫的过程中导致宿主ALP活性显著下降,该过程可能协助病毒粒子侵染宿主。病毒对ALP活性的抑制作用机理之一是下调了ALP编码基因的表达水平。 展开更多
关键词 棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV) 中肠 碱性磷酸酶 基因表达水平
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喉癌和喉乳头状瘤与HPV感染和P16蛋白的关系
6
作者 李建忠 杨劲松 易自翔 《福州总医院学报》 2001年第2期78-81,共4页
目的:探讨人类乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染和抑癌基因P16的失活与喉癌(Laryneal carcinoma,LC)和喉乳头状瘤(Laryngeal papilloma,LP)发生的相关性,以进一步阐明LC和LP的病因和发病机理。方法:收集LP 46例[其中成人型... 目的:探讨人类乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染和抑癌基因P16的失活与喉癌(Laryneal carcinoma,LC)和喉乳头状瘤(Laryngeal papilloma,LP)发生的相关性,以进一步阐明LC和LP的病因和发病机理。方法:收集LP 46例[其中成人型喉乳头状瘤(ALP)21例,青少年型喉乳头状瘤(JLP)25例]、LC 26例、癌旁正常组织6例、声带小结15例,用标记的HPV_(1,6,8,11,13,16,18,30,31,32,33,45,51)通用引物直接法原位PCR方法和免疫组化(SP法)方法分别检测HPV-DNA和P16蛋白。结果:1、HPV阳性率JLP组(84%,21/25)显著高于ALP组(38.1%,8/21)、LC组(19.2%,5/26)、声带小结组(0%,0/15)和癌旁组织组(0%,0/6)(卡方检验,P<0.05);而ALP组、LC组、声带小结组和癌旁组织组之间HPV阳性率无显著差别(卡方检验或Fisher’s精确概率法,P>0.05)。2、P16蛋白的阳性率ALP组(57.1%,12/21)和LC组(38.5%,10/26)均显著低于JLP组(88%,22/25)、癌旁组织组(100%,6/6)和声带小结组(93.3%,14/15)(卡方检验,P<0.05);ALP组和LC组之间及JLP组和声带小结组之间P16蛋白阳性率无显著差别(卡方检验,P>0.05)。3、LP中P16蛋白的阳性率在HPV阳性和阴性组中有显著差别(x^2检验,P<0.05);喉癌中P16蛋白的阳性率在HPV阳性组和阴性组中无显著差别(Fisher’s精确概率法,P>0.05)。结论:青少年型喉乳头状瘤的发生与HPV感染密切相关而与抑癌基因P16的失活无明显相关。成人型喉乳头状瘤和喉癌的发和与HPV感染可能无明显关系,而与抑癌基因P16的失活密切相关。HPV感染和P16基因失活在致瘤过程中无明显协同作用。 展开更多
关键词 P16蛋白 喉乳头状瘤 LC HPV感染 喉癌 阳性率 声带小结 抑癌基因P16 alp 癌旁组织
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