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水稻粉质胚乳突变体M37的基因定位及变异分析
被引量：
4
1
作者
张龙
赵玲珑
+3 位作者
任银会
张晶
徐阿慧
韦存虚
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
北大核心
2019年第4期10-17,共8页
在粳稻品种Kitaake的60Co辐射突变体库中筛选到1个稳定遗传的粉质胚乳突变体M37,其粒厚、千粒重、总淀粉和直链淀粉含量均显著降低。对成熟及发育中胚乳淀粉颗粒结构进行观察,发现突变体的胚乳中淀粉颗粒排列松散,产生大量小单粒淀粉颗...
在粳稻品种Kitaake的60Co辐射突变体库中筛选到1个稳定遗传的粉质胚乳突变体M37,其粒厚、千粒重、总淀粉和直链淀粉含量均显著降低。对成熟及发育中胚乳淀粉颗粒结构进行观察,发现突变体的胚乳中淀粉颗粒排列松散,产生大量小单粒淀粉颗粒。利用M37/Dular的F2群体中分离出的682个粉质极端个体将目标基因定位到水稻第1染色体长臂的51.6 kb,该区间含有7个开放阅读框(ORFs)。其中ORF6编码腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶大亚基2 (AGPL2)。对该基因测序分析发现突变体M37在AGPL2第4外显子上发生1个单碱基G到A的替换,导致该位点氨基酸由丙氨酸(Ala)变成苏氨酸(Thr)。氨基酸序列分析发现AGPL2的同源基因主要存在于单子叶中,突变位点在不同物种中均非常保守。该基因与已报道的水稻w24、gif2、eb6和eb7为等位基因。荧光定量PCR分析发现突变体中多个淀粉合成相关基因的表达水平发生显著变化。
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关键词
水稻
粉质胚乳突变体
agpl
2
基因定位
变异分析
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职称材料
玉米AGPL2蛋白多克隆抗体制备及时空表达分析
被引量：
1
2
作者
吕亚楠
余国武
黄玉碧
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018年第6期17-23,共7页
为探讨玉米AGPL2在籽粒发育时期淀粉积累过程中的功能机制,通过AGPL2基因克隆和构建带有GST标签的原核表达载体PGEX-6 T-1-AGPL2,并利用大肠杆菌诱导表达体系,用0. 5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在28℃条件下诱导表达6 h后,GS...
为探讨玉米AGPL2在籽粒发育时期淀粉积累过程中的功能机制,通过AGPL2基因克隆和构建带有GST标签的原核表达载体PGEX-6 T-1-AGPL2,并利用大肠杆菌诱导表达体系,用0. 5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在28℃条件下诱导表达6 h后,GST-AGPL2融合蛋白能够得到高水平表达,然后利用GST(Glutathione S-transferase)标签蛋白纯化介质进行亲和层析纯化,能够得到质量较高的GST-AGPL2融合蛋白;利用纯化所得的GST-AGPL2重组蛋白免疫新西兰大白兔制备了AGPL2多克隆抗体,分离并纯化抗血清,然后用rTEV Protease去除抗原GST-AGPL2融合蛋白的GST标签,并用纯化后的AGPL2多克隆抗体进行Western Blot检测,结果发现,AGPL2多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用于检测纳克级抗原蛋白;并利用Western Blot方法研究了AGPL2蛋白在玉米不同组织和不同授粉时期胚乳中的分布和表达模式,结果显示,AGL2蛋白在玉米不同组织中的表达具有组织特异性,且在胚乳中含量最高。AGPL2蛋白在玉米胚乳不同授粉时期表达量先增加后降低,且在授粉中期达到最大值。其结果与玉米籽粒发育过程中淀粉的积累规律一致,说明AGPL2主要存在于玉米胚乳中,且可能参与淀粉的合成,也说明AGPL2多克隆抗体具有很好的特异性,能够识别玉米体内的AGPL2抗原。
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关键词
agpl
2
蛋白
基因克隆
原核表达
WESTERN
BLOTTING
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职称材料
题名
水稻粉质胚乳突变体M37的基因定位及变异分析
被引量：
4
1
作者
张龙
赵玲珑
任银会
张晶
徐阿慧
韦存虚
机构
扬州大学生物科学与技术学院/江苏省作物遗传生理重点实验室/江苏省粮食作物现代产业技术协同创新中心
出处
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
北大核心
2019年第4期10-17,共8页
基金
江苏省自然科学基金资助项目(BK2016D461)
国家博士后特别资助项目(2018T110561)
江苏省高校生物技术品牌专业建设工程项目(PPZY2015C212)
文摘
在粳稻品种Kitaake的60Co辐射突变体库中筛选到1个稳定遗传的粉质胚乳突变体M37,其粒厚、千粒重、总淀粉和直链淀粉含量均显著降低。对成熟及发育中胚乳淀粉颗粒结构进行观察,发现突变体的胚乳中淀粉颗粒排列松散,产生大量小单粒淀粉颗粒。利用M37/Dular的F2群体中分离出的682个粉质极端个体将目标基因定位到水稻第1染色体长臂的51.6 kb,该区间含有7个开放阅读框(ORFs)。其中ORF6编码腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶大亚基2 (AGPL2)。对该基因测序分析发现突变体M37在AGPL2第4外显子上发生1个单碱基G到A的替换,导致该位点氨基酸由丙氨酸(Ala)变成苏氨酸(Thr)。氨基酸序列分析发现AGPL2的同源基因主要存在于单子叶中,突变位点在不同物种中均非常保守。该基因与已报道的水稻w24、gif2、eb6和eb7为等位基因。荧光定量PCR分析发现突变体中多个淀粉合成相关基因的表达水平发生显著变化。
关键词
水稻
粉质胚乳突变体
agpl
2
基因定位
变异分析
Keywords
rice
floury endosperm mutant
agpl
2
gene mapping
mutation analysis
分类号
S511 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
玉米AGPL2蛋白多克隆抗体制备及时空表达分析
被引量：
1
2
作者
吕亚楠
余国武
黄玉碧
机构
四川农业大学农学院
四川农业大学农学院作物科学实验教学中心
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018年第6期17-23,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31501322)
留学回国人员科技活动择优资助项目(00124300)
四川省博士后特别资助项目(03130104)
文摘
为探讨玉米AGPL2在籽粒发育时期淀粉积累过程中的功能机制,通过AGPL2基因克隆和构建带有GST标签的原核表达载体PGEX-6 T-1-AGPL2,并利用大肠杆菌诱导表达体系,用0. 5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在28℃条件下诱导表达6 h后,GST-AGPL2融合蛋白能够得到高水平表达,然后利用GST(Glutathione S-transferase)标签蛋白纯化介质进行亲和层析纯化,能够得到质量较高的GST-AGPL2融合蛋白;利用纯化所得的GST-AGPL2重组蛋白免疫新西兰大白兔制备了AGPL2多克隆抗体,分离并纯化抗血清,然后用rTEV Protease去除抗原GST-AGPL2融合蛋白的GST标签,并用纯化后的AGPL2多克隆抗体进行Western Blot检测,结果发现,AGPL2多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用于检测纳克级抗原蛋白;并利用Western Blot方法研究了AGPL2蛋白在玉米不同组织和不同授粉时期胚乳中的分布和表达模式,结果显示,AGL2蛋白在玉米不同组织中的表达具有组织特异性,且在胚乳中含量最高。AGPL2蛋白在玉米胚乳不同授粉时期表达量先增加后降低,且在授粉中期达到最大值。其结果与玉米籽粒发育过程中淀粉的积累规律一致,说明AGPL2主要存在于玉米胚乳中,且可能参与淀粉的合成,也说明AGPL2多克隆抗体具有很好的特异性,能够识别玉米体内的AGPL2抗原。
关键词
agpl
2
蛋白
基因克隆
原核表达
WESTERN
BLOTTING
Keywords
agpl
2
protein
Gene cloning
Prokaryotic expression
Western Blotting
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S513.03 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
水稻粉质胚乳突变体M37的基因定位及变异分析
张龙
赵玲珑
任银会
张晶
徐阿慧
韦存虚
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
北大核心
2019
4
下载PDF
职称材料
2
玉米AGPL2蛋白多克隆抗体制备及时空表达分析
吕亚楠
余国武
黄玉碧
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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