ADP核糖基化因子的结构及其功能机制 被引量：11

1

作者 王磊 宿红艳 +1 位作者 王昌留 穆春华 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第5期675-681,共7页

ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)是Ras基因超家族的成员,它们是大小约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。ARF最初发现作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白α亚基,促使其ADP-核糖基化。近来人们发现ARF还参... ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)是Ras基因超家族的成员,它们是大小约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。ARF最初发现作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白α亚基,促使其ADP-核糖基化。近来人们发现ARF还参与囊泡运输、调节磷脂酶D的活性,在细胞内物质运输和信号转导过程中具有更加重要的生理功能。现就ARF的发现、分类、结构和功能、表达以及生理功能作一综述。 展开更多

关键词 adp核糖基化因子 结构 功能

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ART1基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞转移潜能的影响及作用机制的研究 被引量：2

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作者 宋光林 唐怡 +2 位作者 王娅兰 徐剑侠 熊薇 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期490-496,共7页

目的:通过沉默精氨酸特异性单-ADP-核糖基化作用转移酶-1(arginine-specic mono-ADP-ribosytransferase-1,ART1)基因的表达,探讨其对小鼠结肠癌CT26细胞转移潜能的影响及可能的作用机制。方法:采用慢病毒转染系统将特异性针对ART1基因的... 目的:通过沉默精氨酸特异性单-ADP-核糖基化作用转移酶-1(arginine-specic mono-ADP-ribosytransferase-1,ART1)基因的表达,探讨其对小鼠结肠癌CT26细胞转移潜能的影响及可能的作用机制。方法:采用慢病毒转染系统将特异性针对ART1基因的ART1-shRNA转入结肠癌CT26细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法鉴定ART1基因沉默的效果;采用Transwell小室侵袭实验和黏附实验观察ART1基因沉默对CT26细胞侵袭及黏附能力的影响;明胶酶谱法测定ART1基因沉默对CT26细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metall oproteinase-2,MMP-2)及MMP-9蛋白活性的影响;蛋白质印迹法检测对ART1、RhoA(Ras homolog gene family,member A)、ROCK1(Rho-associated coiled-coil contanining kinase 1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。结果:成功获得了ART1基因沉默的稳定细胞株;ART1-shRNA转染组CT26细胞的侵袭及黏附抑制率分别为39.63%和40.70%,与空白对照组相比,ART1基因沉默后CT26细胞侵袭和黏附能力降低(P<0.05);MMP-2和MMP-9蛋白的活性降低,RhoA、ROCK1、MMP-2及MMP-9蛋白的表达量均被下调(P<0.05)。结论:ART1基因沉默可降低CT26细胞的侵袭和黏附能力,可能与ART1基因沉默后下调RhoA、ROCK1、MMP-2和MMP-9的表达以及MMP-2和MMP-9蛋白的活性有关,提示ART1基因在结肠癌侵袭和转移中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 adp核糖基化因子 RNA 小分子干扰 RHO相关激酶类 基质金属蛋白酶类 CT26细胞

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麻疯树中ADP核糖基化因子基因的克隆和表达 被引量：2

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作者 林凡荣 秦小波 +4 位作者 朱勋路 叶生亮 高继海 徐莺 陈放 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期549-554,共6页

从麻疯树cDNA文库中筛选到包含完整编码序列的ADP核糖基化因子的cDNA序列,命名为Jc-arf。其长度为887bp,开放阅读框546bp,推测的编码蛋白含181个氨基酸残基,具有典型的GTP结合蛋白家族的特点:P框(GLDAAGKT)、G’框(DVGGQ)和G框(NKQDL)... 从麻疯树cDNA文库中筛选到包含完整编码序列的ADP核糖基化因子的cDNA序列,命名为Jc-arf。其长度为887bp,开放阅读框546bp,推测的编码蛋白含181个氨基酸残基,具有典型的GTP结合蛋白家族的特点:P框(GLDAAGKT)、G’框(DVGGQ)和G框(NKQDL)。序列分析显示,Jc-arf接近于人类ClassI型arf基因,其蛋白序列与多种植物ARF有很高的同源性。半定量RT-PCR结果显示,Jc-arf的表达具有一定的组织特异性,在花中最丰富。PEG、低温、NaCl胁迫下,Jc-arf的表达受PEG和低温的诱导,而对NaCl胁迫不敏感。 展开更多

关键词 麻疯树 adp核糖基化因子 表达 胁迫

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细胞内物质转运调节分子ARFGAP3的克隆表达及生化活性

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作者 刘晓勤 张成岗 +2 位作者 邢桂春 陈清棠 贺福初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期507-513,共7页

ADP核糖基化因子 GTP酶活化蛋白 (ARFGAP)是重要的细胞内物质转运调节分子 .在 2 2周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1GAP有 32 %同源性 .将这种新基因命名为“ARFGAP3” ,对其进行功能研究 ,利用逆... ADP核糖基化因子 GTP酶活化蛋白 (ARFGAP)是重要的细胞内物质转运调节分子 .在 2 2周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1GAP有 32 %同源性 .将这种新基因命名为“ARFGAP3” ,对其进行功能研究 ,利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR ) ,从人胎盘总RNA中扩增ARFGAP3全长cDNA序列 ,并将其亚克隆到 pGEM T载体 ;采用RNA印迹法和斑点杂交法 ,检测其组织表达谱 ,发现在多种腺体和睾丸中有很高水平ARFGAP3基因转录 ,并且只有一种约 2 7kb的转录本 .利用基因重组技术 ,构建表达质粒 pBAD/Thio ARFGAP3,在大肠杆菌中表达 ,采用亲和层析法纯化表达产物 ,利用肠激酶切除重组融合蛋白N端引导序列 .检测重组ARFGAP3的生化活性 ,证实ARFGAP3对ARF1具有GAP活性 ,促进ARF1结合的GTP水解为GDP ,磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2 )增强其GAP活性 ,而磷脂酰胆碱 (PC) 展开更多

关键词 ARFGAP3 细胞内物质转运 adp核糖基化因子 GTP酶活化蛋白 生化活性

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人ARF4慢病毒表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系SKOV3中的稳定表达

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作者 张逸敏 吴启惠 +8 位作者 任晓磊 曙光 王晶 程俊云 王莹 蔡馨梅 周姗 刘珍宝 殷刚 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2017年第6期410-415,420,共7页

目的 建立稳定表达人ADP核糖基化因子-4(ARF4)的卵巢癌SKVO3细胞系.方法 构建pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;经测序验证后转染SKOV3细胞,运用实时定量PCR验证ARF4 mRNA的表达量;再将验证后的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HE... 目的 建立稳定表达人ADP核糖基化因子-4(ARF4)的卵巢癌SKVO3细胞系.方法 构建pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;经测序验证后转染SKOV3细胞,运用实时定量PCR验证ARF4 mRNA的表达量;再将验证后的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞进行包装,收集重组慢病毒颗粒LV-ARF4,感染SKOV3细胞后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞系;最后用实时定量PCR与Western Blot测定稳定表达的细胞系内ARF4的表达情况.结果 成功构建出pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;该载体在SKOV3细胞中可明显上调ARF4 mRNA的表达,并在HEK-293T细胞中成功包装成重组慢病毒颗粒.与对照组相比,实验组SKOV3细胞感染ARF4慢病毒载体后ARF4 mRNA及蛋白的相对表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.001).结论 成功构建了重组质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4及慢病毒载体LV-ARF4,并建立了ARF4稳定转染的SKOV3细胞系,为进一步研究ARF4在卵巢癌中的生物学功能奠定了基础. 展开更多

关键词 基因克隆 慢病毒载体 adp核糖基化因子-4 SKOV3细胞

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ADP核糖基化因子与消化道肿瘤

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作者 逯艳艳 陈卫昌 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第15期2127-2129,共3页

二磷酸腺苷-核糖基化作用因子（ADP-ribosylation factor,ARF）是广泛存在于真核生物细胞膜上,属于小G蛋白Ras家族,是大小约20×10^3的GTP结合蛋白。1982年ARF首次被发现,并根据它能作为霍乱毒素催化Gs蛋白ADP核糖基化反应的辅助因... 二磷酸腺苷-核糖基化作用因子（ADP-ribosylation factor,ARF）是广泛存在于真核生物细胞膜上,属于小G蛋白Ras家族,是大小约20×10^3的GTP结合蛋白。1982年ARF首次被发现,并根据它能作为霍乱毒素催化Gs蛋白ADP核糖基化反应的辅助因子而命名[1]。 展开更多

关键词 adp核糖基化因子 消化道肿瘤 综述

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ADP核糖基化因子6在病原体感染中的作用

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作者 鲍诗骏 陈彦直 朱勇喆 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第10期122-129,共8页

ADP核糖基化因子6(ADP ribosylation factor 6,Arf6)是Ras超家族中的一个小分子GTP结合蛋白,属于Arf亚家族成员,在哺乳动物细胞中广泛表达,是一种广泛参与分泌、内吞、吞噬、囊泡运输、细胞黏附、胞质分裂以及癌细胞侵袭等基本生物学过... ADP核糖基化因子6(ADP ribosylation factor 6,Arf6)是Ras超家族中的一个小分子GTP结合蛋白,属于Arf亚家族成员,在哺乳动物细胞中广泛表达,是一种广泛参与分泌、内吞、吞噬、囊泡运输、细胞黏附、胞质分裂以及癌细胞侵袭等基本生物学过程的胞内调节因子。近年来发现Arf6参与了多种病原体的感染过程,因此,深入研究Arf6在细菌、病毒和胞内寄生虫感染中的功能和调控机制,对于揭示病原体与宿主相互作用的机制以及发现新的病原体治疗干预靶点具有重要意义。本文介绍了Arf6的结构和功能,并对Arf6在病原体感染中所发挥的功能与调控机制作一综述。 展开更多

关键词 adp核糖基化因子6 病原体感染 调控 免疫逃逸

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ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1、肌动蛋白束蛋白1在胃癌组织中的表达及与患者预后的关系

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作者 潘菊花 刘炳辉 +2 位作者 陈灵斌 黄合 付承林 《中国卫生检验杂志》 CAS 2023年第8期967-971,975,共6页

目的探讨ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1(ASAP1)、肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)在胃癌中的表达、预后相关性。方法运用UALCAN、Kaplan-Meier数据库分析ASAP1、FSCN1在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达与患者预后的关系,并采用qRT-PCR、免... 目的探讨ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1(ASAP1)、肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)在胃癌中的表达、预后相关性。方法运用UALCAN、Kaplan-Meier数据库分析ASAP1、FSCN1在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达与患者预后的关系,并采用qRT-PCR、免疫组化验证ASAP1、FSCN1在胃癌与癌旁的表达差异。结果与正常胃黏膜组织相比,ASAP1、FSCN1在胃癌组织中表达升高(P<0.01),且ASAP1、FSCN1高表达组患者的总生存率下降(P<0.05)。qRT-PCR显示胃癌中ASAP1、FSCN1 mRNA的表达水平高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,胃癌ASAP1、FSCN1阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。ASAP1 mRNA和FSCN1 mRNA的表达成正相关(r=0.558,P=0.000)。ASAP1、FSCN1的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,ASAP1、FSCN1阴性表达总体生存率高于阳性表达(P<0.05)。结论ASAP1、FSCN1在胃癌组织中均高表达,2者可能协同促进胃癌的发生和发展,且在胃癌的浸润、转移中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 胃癌 adp核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1 肌动蛋白束蛋白1 免疫组化

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Arf6调控线粒体分布及异位子宫内膜上皮细胞的EMT与子宫内膜异位症发病的关系 被引量：1

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作者 陈轶尘 汪期明 +2 位作者 陈良 朱淼华 张晶 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期442-448,共7页

目的研究二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)在子宫内膜异位症(内异症)发病中的作用。方法收集从2020年11月至2021年5月在宁波大学医学院附属医院和宁波市妇女儿童医院住院手术并经病理确诊为卵巢型内异症患者(n=44,内异症组)的异位子宫内... 目的研究二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)在子宫内膜异位症(内异症)发病中的作用。方法收集从2020年11月至2021年5月在宁波大学医学院附属医院和宁波市妇女儿童医院住院手术并经病理确诊为卵巢型内异症患者(n=44,内异症组)的异位子宫内膜组织,同期收集因子宫肌瘤行子宫全切除术患者(n=17,对照组)的子宫内膜组织,采用蛋白印迹法检测子宫内膜组织中Arf6蛋白的表达;分离两组的子宫内膜上皮细胞进行原代培养,应用免疫荧光方法检测上皮细胞的线粒体分布;采用RNA干扰技术下调Arf6蛋白的表达,观察Arf6蛋白表达下调后细胞的线粒体分布情况,并用蛋白印迹法检测Arf6基因抑制前后线粒体相关蛋白发育分化增强因子1(DDEF1,又称AMAP1)、活性氧簇1(ROS1)表达的变化、用免疫荧光方法检测上皮-间质细胞转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vim)的表达变化,细胞迁移实验检测细胞迁移能力的变化。结果与对照组子宫内膜组织(0.174±0.019)相比,异位子宫内膜组织Arf6蛋白呈现高表达(0.423±0.033;t=29.630,P<0.01);线粒体在异位子宫内膜上皮细胞中靠近细胞膜边缘分布。当RNA干扰技术使Arf6基因抑制后,在异位上皮细胞中线粒体分布在细胞膜边缘明显减少,接近对照组的上皮细胞(贴近细胞核分布);当Arf6蛋白表达下调后,转染后的异位上皮细胞中AMAP1和ROS1蛋白的表达减少。细胞迁移实验结果显示,Arf6蛋白表达下调后,异位上皮细胞的迁移能力降低,迁移细胞数量为(34.3±7.5)个。异位上皮细胞中低表达E-cad而高表达Vim,但Arf6蛋白表达下调后,转染后的异位上皮细胞中E-cad表达增加,Vim表达下降。结论异位子宫内膜上皮细胞高表达Arf6蛋白可导致线粒体分布趋向细胞膜边缘化,诱导EMT,参与内异症的发病机制。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 上皮-间质转化 adp核糖基化因子6 线粒体

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ASAP1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义 被引量：2

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作者 张婷 刘文俊 《医学综述》 2015年第11期2057-2059,共3页

目的检测乳腺癌组织中ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白1(ASAP1)蛋白的表达,探讨ASAP1与乳腺癌发生的相关性,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。方法采用单纯随机抽样选取2008年6月至2012年6月武汉市汉口医院就诊乳腺癌患者41例,进行免疫组织化... 目的检测乳腺癌组织中ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白1(ASAP1)蛋白的表达,探讨ASAP1与乳腺癌发生的相关性,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。方法采用单纯随机抽样选取2008年6月至2012年6月武汉市汉口医院就诊乳腺癌患者41例,进行免疫组织化学检测并分析乳腺癌组织中增殖细胞相关核抗原Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和人表皮生长因子受体2(HER2)的表达与ASAP1的相关性;比较不同转移能力乳腺癌细胞株中ASAP1与HER2水平;检测RNA干扰抑制ASAP1对MDA-MB-231细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,对照组MDA-MB-231细胞培养体系中加入阴性对照干扰小RNA。结果免疫组织化学显示乳腺癌组织中HER-2的表达与ASAP1无相关性(P=0.803),Ki67和MMP-2的表达与ASAP1有显著相关性(P=0.035;P=0.013);免疫印迹显示高侵袭力乳腺癌细胞中ASAP1高表达,低侵袭力乳腺癌细胞ASAPI呈弱表达(P<0.01),HER-2的表达与ASAP1无相关性(P>0.05);RNA干扰抑制MDA-MB-231细胞中ASAP1的表达,VEGF水平显著低于对照组(P<0.01)。结论乳腺癌组织中ASAP1的表达与肿瘤细胞的增殖和转移存在相关性,ASAP1有望成为乳腺癌的治疗靶点。 展开更多

关键词 乳腺癌 adp核糖基化因子GTP酶活化蛋白1 增殖细胞相关核抗原Ki67 基质金属蛋白酶2 人表皮生长因子受体2

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小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达 被引量：2

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作者 许峰 闫素辉 +3 位作者 张从宇 时侠清 李文阳 张子学 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1631-1638,共8页

为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121b... 为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121bp。生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。 展开更多

关键词 小麦 adp核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白 半定量RT-PCR 融合蛋白

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环状RNA ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移机制 被引量：1

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作者 欧阳峰松 向忠军 +3 位作者 熊瑛 王少林 丁乐 曹彪 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第11期2105-2108,共4页

目的探讨环状RNA(circRNA)ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白(ASAP1)调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖及迁移机制。方法提取RA及关节外伤患者SFs行后续实验。分别用Lipofectamine 3000将si-NC、si-circASAP1、miR-NC、miR-144-3... 目的探讨环状RNA(circRNA)ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白(ASAP1)调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖及迁移机制。方法提取RA及关节外伤患者SFs行后续实验。分别用Lipofectamine 3000将si-NC、si-circASAP1、miR-NC、miR-144-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-circASAP1、抗miR-NC与si-circASAP1、抗miR-144-3p与si-circASAP1分别转染RA-SFs(记为si-NC组、si-circASAP1组、miR-NC组、miR-144-3p组、pcDNA-NC组、pcDNA-circASAP1组、抗miR-NC+si-circASAP1组、抗miR-144-3p+si-circASAP1组)。未转染RA-SFs记为对照组(NC组)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circASAP1和微小核糖核酸144-3p(miR-144-3p)表达;蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;Transwell检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circASAP1靶向调控miR-144-3p表达。两组间比较采用t检验;多组间比较用单因素方差分析(两组间比较用SNK-q检验)。结果RA患者滑膜组织及SFs中circASAP1表达高于关节外伤患者滑膜组织及SFs(滑膜组织2.46±0.28比1.00±0.12,SFs中3.16±0.15比1.00±0.11),miR-144-3p低于关节外伤患者滑膜组织及SFs(滑膜组织0.43±0.11比1.00±0.15,SFs中0.38±0.03比1.00±0.08),差异有统计学意义(t=40.949、26.182,P<0.05)。si-circASAP1组RA-SFs的circASAP1、MMP-2、MMP-9表达、细胞活力和细胞迁移数均低于NC组和si-NC组(0.47±0.03比1.00±0.07、1.02±0.10,0.41±0.03比0.83±0.07、0.81±0.06,0.35±0.03比0.77±0.06、0.75±0.06,0.57±0.05比1.12±0.07、1.11±0.09,97.00±7.23比194.00±13.25、203.00±11.54),差异有统计学意义(F=166.272、161.234、187.111、194.126、258.352,P<0.05)。miR-144-3p组RA-SFs的miR-144-3p表达高于miR-NC组(2.09±0.15比1.00±0.09),MMP-2、MMP-9表达、细胞活力和细胞迁移数均低于miR-NC组(0.37±0.02比0.83±0.07、0.31±0.02比0.74±0.06、0.62±0.05比1.21±0.07、115.00±7.36比197.00±12.51),差异 展开更多

关键词 类风湿关节炎 环状RNA adp核糖基化因子GTP酶激活蛋白 微小RNA-144-3p 细胞增殖 细胞迁移

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siRNA特异性沉默ADP核糖基化因子6对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响（英文） 被引量：1

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作者 单雄威 吕世栋 +4 位作者 于小明 胡正飞 张嘉杰 王广发 魏强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期735-743,共9页

目的研究ADP核糖基化因子6(Arf6)对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子作用机制。方法设计合成3条针对不同靶向区域的Arf6特异性si RNA序列,转染细胞后通过real-time PCR和蛋白质印迹... 目的研究ADP核糖基化因子6(Arf6)对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子作用机制。方法设计合成3条针对不同靶向区域的Arf6特异性si RNA序列,转染细胞后通过real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对Arf6的干扰效果,筛选出干扰效果最佳的si RNA序列;通过噻唑盐(MTT)实验、划痕实验、及transwell细胞迁移和侵袭实验观察si RNA干扰Arf6表达对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2和Rac1蛋白表达水平的变化。结果与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PC-3细胞内源性Arf6的m RNA和蛋白表达水平无明显影响,3条si RNA序列均能抑制Arf6的表达,其中si RNA-3对PC-3细胞Arf6表达干扰效果最好,Arf6m RNA和蛋白抑制率分别为(91.88±3.13)%和(86.37±0.57)%。si RNA-3干扰Arf6表达抑制PC-3细胞的增殖,且PC-3细胞体外迁移距离和侵袭细胞数较空白和阴性对照组明显减少(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现转染si RNA-3的PC-3细胞p-ERK1/2和Rac1表达水平明显降低,而AKT、p-AKT和ERK1/2表达水平较对照组差异无统计学意义。结论 si RNA干扰Arf6表达可显著抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其分子作用机制可能与p-ERK1/2和Rac1表达下调相关。 展开更多

关键词 adp核糖基化因子6 前列腺癌 侵袭 迁移 RNA干扰

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海马神经元初级纤毛染色技术探索 被引量：1

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作者 周晓春 王珊珊 安云鹤 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期107-109,129,共4页

为了建立体外原代培养的大鼠海马神经元初级纤毛的染色标记方法,以体外原代培养的18 d胎鼠的海马神经元为研究材料,应用荧光免疫细胞化学实验技术,分别在不同的时间点,应用不同的初级纤毛蛋白标记物的抗体[抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13... 为了建立体外原代培养的大鼠海马神经元初级纤毛的染色标记方法,以体外原代培养的18 d胎鼠的海马神经元为研究材料,应用荧光免疫细胞化学实验技术,分别在不同的时间点,应用不同的初级纤毛蛋白标记物的抗体[抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13B(ARL13B)抗体,抗III型腺苷酸环化酶(ACIII)抗体]对海马神经元初级纤毛进行染色,然后应用倒置荧光显微镜观察记录染色结果。从免疫荧光图像中看出,anti-ARL13B抗体和anti-ACIII抗体都能较好地标记海马神经元初级纤毛,但anti-ARL13B抗体的染色效果更佳。随着体外原代培养天数的增加,初级纤毛长度逐步增加(anti-ACIII抗体标记组:纤毛生长从第1天的3.3μm到第14天的8.5μm逐渐增加;antiARL13B抗体标记组:纤毛生长从第1天的4.4μm到第14天的9.1μm逐渐增加)。对星型胶质细胞的ACIII和ARL13B进行免疫荧光染色,也能较好地标记其初级纤毛。ARL13B和ACIII都能作为大鼠海马神经元初级纤毛的标记物,但ARL13B体现出更好的特异性。初级纤毛会伴随着海马神经元的发育成熟而生长,提示初级纤毛在海马神经元的发育过程中可能发挥着重要作用。ARL13B和ACIII也可以作为星型胶质细胞初级纤毛的染色标志。 展开更多

关键词 初级纤毛 海马神经元 免疫荧光 adp核糖基化因子相似蛋白-13B III型腺苷酸环化酶

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松墨天牛ADP核糖基化因子1基因的序列及表达特性分析

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作者 陈敬祥 程杰 林同 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第7期57-63,共7页

为了探讨Ras基因超家族中ADP核糖基化因子1基因(ARF1)在昆虫生长发育进程中以及在温度胁迫下的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛ARF1基因,命名为MaARF1(Gen Bank:KY368168),对其进行序列分析以及不同... 为了探讨Ras基因超家族中ADP核糖基化因子1基因(ARF1)在昆虫生长发育进程中以及在温度胁迫下的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛ARF1基因,命名为MaARF1(Gen Bank:KY368168),对其进行序列分析以及不同虫态和不同温度胁迫下的表达特性分析。结果显示,MaARF1基因编码区序列长为549 bp,编码182个氨基酸。预测蛋白质二级结构主要由α螺旋与β片层组成,其次是无规则卷曲和β转角。通过DNAMAN软件比对发现,MaARF1与赤拟谷盗ARF1蛋白氨基酸序列完全一致,二者同源性为100%,且存在1个十四酰基化位点(G^2)和5个保守域(G_1 box—G_5 box)。通过RT-qPCR分析表明,MaARF1的表达量与松墨天牛的完全变态发育相关,各虫态不间断表达,幼虫期在2龄幼虫(L2)、5龄幼虫(L5)中表达量较高,蛹化期间(L5—P0)表达量表现为上升趋势,并在第2天蛹(P2)中达到最大值,羽化期间(P10—A0)表达量表现为下降趋势;MaARF1在不同温度胁迫下均有表达,低温与高温都会导致表达量下调,温度越高或越低,表达量下调越显著。因此,MaARF1可能主要影响松墨天牛蛹化和羽化这2个变态发育关键点,从而影响整个变态发育历程,同时其也可能参与了松墨天牛体内依赖温度的Ca^(2+)信号途径。 展开更多

关键词 松墨天牛 adp核糖基化因子1 温度胁迫 变态发育 表达特性 RT-QPCR

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COPI相关蛋白在病毒复制中作用的研究进展

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作者 杨广博 张磊亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期185-189,共5页

COPI主要负责从高尔基体到内质网的蛋白囊泡运输。许多病毒包括RNA病毒和DNA病毒以及反转录病毒会劫持或借助COPI通路和(或)COPI相关蛋白如coatomer,ARF1和GBF1以利于其自身生命活动。本文就COPI相关蛋白在病毒复制中的作用的最新进展... COPI主要负责从高尔基体到内质网的蛋白囊泡运输。许多病毒包括RNA病毒和DNA病毒以及反转录病毒会劫持或借助COPI通路和(或)COPI相关蛋白如coatomer,ARF1和GBF1以利于其自身生命活动。本文就COPI相关蛋白在病毒复制中的作用的最新进展进行综述。 展开更多

关键词 外被体 adp核糖基化因子1 高尔基特异抗布雷菲德菌素鸟嘌呤核苷酸交换因子1 病毒

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ADP-核糖基化因子1的功能及其与肿瘤相关性的研究进展 被引量：5

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作者 马文敏 姜泊 《医学研究生学报》 CAS 2005年第6期554-558,共5页

ADP核糖基化因子(ADPribosylationfactor,ARF)家族作为霍乱毒素催化GS蛋白ADP核糖基化反应的辅助因子,目前其病理生理作用仅对从功能角度定义的这一蛋白家族有价值,而进一步研究发现,ARF与高尔基复合体息息相关,在细胞内物质运输和信号... ADP核糖基化因子(ADPribosylationfactor,ARF)家族作为霍乱毒素催化GS蛋白ADP核糖基化反应的辅助因子,目前其病理生理作用仅对从功能角度定义的这一蛋白家族有价值,而进一步研究发现,ARF与高尔基复合体息息相关,在细胞内物质运输和信号转导过程中具有更加重要的生理功能。在这一蛋白家族中发现最早、研究最深入的是ADP核糖基化因子1。作者就此蛋白的调控分子和效应分子、功能及其与肿瘤的相互关系作一综述。 展开更多

关键词 adp-核糖基化因子 功能 肿瘤

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大肠侧向发育型肿瘤细胞株ADP-核糖基化因子1的表达及其意义 被引量：6

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作者 马文敏 姜泊 +3 位作者 赖卓胜 王新颖 耿焱 韩宇晶 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期690-694,共5页

背景与目的:侧向发育型肿瘤(Laterally Spreading Tumor,LST)有高恶变倾向。本研究目的是为了发现与大肠侧向发育型肿瘤(ColorectalLST,CLST)生长、发育方式密切相关的基因和功能蛋白,揭示LST侧向生长方式和高恶变潜质的分子肿瘤学机制... 背景与目的:侧向发育型肿瘤(Laterally Spreading Tumor,LST)有高恶变倾向。本研究目的是为了发现与大肠侧向发育型肿瘤(ColorectalLST,CLST)生长、发育方式密切相关的基因和功能蛋白,揭示LST侧向生长方式和高恶变潜质的分子肿瘤学机制。方法:应用全人类表达谱基因芯片筛选CLST、LoVo、SW480三株结肠癌细胞株差异表达的基因。从中选取差异比较显著的基因,应用半定量RT鄄PCR和蛋白免疫印迹从mRNA和蛋白表达两水平验证差异表达。结果:基因芯片筛查出LST相对于LoVo和SW480表达上调基因58条,下调基因39条。根据文献选取ADP鄄核糖基化因子1(ADP-ribosylationfactor1,ARF1)通过RT-PCR验证表达确实存在差异,而蛋白免疫印迹则显示CLST和LoVo的差异显著,和SW480的差别不显著。结论:CLST在基因表达上存在特殊性,其中ARF1在CLST表达水平较高,提示其可能介导与CLST特性有关的生物学功能,二者的相互关系值得进一步研究。 展开更多

关键词 adp-核糖基化因子1 侧向发育型肿瘤 大肠肿瘤 基因芯片 逆转录PCR 免疫印迹

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黄芪甲苷通过抑制氯化物细胞内通道蛋白4/ADP核糖基化因子6信号通路改善血管紧张素Ⅱ诱导的高血压大鼠模型的心肌损伤 被引量：1

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作者 巩莎 可海霞 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期43-50,共8页

目的探究黄芪甲苷在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠模型中的心肌保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠分随机分为6组,每组10只:对照组,模型组,黄芪甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)组和ADP核糖基化因子6(Arf6)特... 目的探究黄芪甲苷在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠模型中的心肌保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠分随机分为6组,每组10只:对照组,模型组,黄芪甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)组和ADP核糖基化因子6(Arf6)特异性抑制剂(NAV-2729)组。建立AngⅡ诱导高血压心肌损伤大鼠模型后给予不同药物或剂量处理2周后,观察各组大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡以及相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达情况。另选30只SD大鼠随机分为3组,每组10只:氯化物细胞内通道蛋白4(CLIC4)过表达联合黄芪甲苷组、腺病毒阴性对照联合黄芪甲苷组及腺病毒阴性对照组。先通过尾静脉注射相应腺病毒,再用AngⅡ诱导高血压模型。2周后观察大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡情况。结果与模型组大鼠比较,中剂量和高剂量的黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压心肌损伤模型大鼠的心脏功能及心肌结构,促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(0.36±0.01比0.22±0.02,0.78±0.01比0.22±0.02;均P<0.05),抑制Bax表达(1.51±0.02比2.13±0.03,1.22±0.01比2.13±0.03;均P<0.05)。黄芪甲苷通过抑制CLIC4/Arf6蛋白表达发挥心肌保护作用,过表达CLIC4则减弱这种保护作用。结论黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压大鼠模型中的心肌损伤,可能通过抑制CLIC4/Arf6信号通路实现。 展开更多

关键词 黄芪甲苷 氯化物细胞内通道蛋白4/adp核糖基化因子6 血管紧张素Ⅱ 高血压 心肌损伤

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BTG2、ARL2在非小细胞肺癌中的表达及其病理分型的相关性

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作者 孙涛 刘仁龙 +3 位作者 段美丽 吕天琳 姜彩丽 杨铁波 《齐齐哈尔医学院学报》 2024年第11期1030-1033,共4页

目的探讨ADP核糖基化样因子2(ARL2)、B细胞异位基因2(BTG2)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达水平及其病理分型相关性分析。方法选择2021年5月—2022年5月本院收治的60例非小细胞肺癌患者作为研究对象,共收集非小细胞肺癌的癌组织和癌旁正... 目的探讨ADP核糖基化样因子2(ARL2)、B细胞异位基因2(BTG2)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达水平及其病理分型相关性分析。方法选择2021年5月—2022年5月本院收治的60例非小细胞肺癌患者作为研究对象,共收集非小细胞肺癌的癌组织和癌旁正常组织标本60对,其中非小细胞肺癌的癌组织作为实验组,癌旁正常组织作为对照组。应用免疫组化方法分别检测非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织中ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平。分析ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平与非小细胞肺癌的临床病理分型相关性。结果实验组中ARL2蛋白表达阳性率为66.7%,,明显高于对照组的25.4%(P<0.05);实验组中BTG2蛋白表达阳性率为20.6%,明显低于对照组的71.4%(P<0.05)。ARL2、BTG2蛋白表达与患者年龄、性别无相关性,差异无统计学意义(P>0.05);而与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大直径、复发率、病理学分级、复发相关性密切,差异具有统计学意义(P<0.05)。统计患者的1年生存率为47.6%(29/60),其中ARL2阳性生存率为31.0%(6/20),ARL2阴性生存率为81.0%(30/40);BTG2阳性生存率为96.1%(25/26),BTG2阴性生存率为35.0%(11/34);ARL2阴性、BTG2阳性非小细胞肺癌患者生存率显著增高(P<0.001)。结论非小细胞肺癌患者的ARL2蛋白表达明显升高,BTG2蛋白表达水平明显降低,证实了ARL2水平的高表达和BTG2的低表达,对非小细胞肺癌患者的ARL2阳性蛋白、BTG2阴性表达与病理分型有着十分密切的相关性,值得未来在预后方面进一步研究探讨。 展开更多

关键词 adp核糖基化样因子2 B细胞异位基因2 非小细胞肺癌 临床预后

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