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腺相关病毒AAV2/Anc80L65对原代培养的螺旋神经元形态标记效能的探究
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作者 刘耀谦 张振 +1 位作者 张博雅 陈正侬 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2023年第3期1-6,20,共7页
目的探究含有神经元特异性启动子(human synapsin promoter,hSyn)及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)标记的AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒对体外培养的螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)形态的标记效果。方... 目的探究含有神经元特异性启动子(human synapsin promoter,hSyn)及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)标记的AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒对体外培养的螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)形态的标记效果。方法向体外培养的SGNs中加入一定量的AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒,通过荧光显微镜在低倍镜下计数荧光神经元的比例以评估其对螺旋神经元细胞的转染的特异性和效率,在高倍镜下观察荧光神经元胞体及神经突的精细形态。并通过膜片钳实验验证该病毒在活体SGNs中的实际应用。结果AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒对体外培养的SGNs具有很高的特异性和转染率,且不会产生明显的细胞毒性。同时,该病毒可以快速清晰地标记螺旋神经元胞体和神经突的形态且对神经元形态没有明显损伤。相比Tuj1荧光染色还可以标记更加精细的神经突结构,如丝状伪足。当应用于膜片钳实验中时,AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒有助于神经元识别和定位,可极大提高SGNs膜片钳实验的效率和成功率。结论AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP适合作为标记体外培养的活体SGNs形态的理想工具。 展开更多
关键词 aav2/anc80l65-hsyn-egfp病毒 螺旋神经元形态 原代培养 标记效果
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