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鸦胆子油乳联合siRNA-ERCC1对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转作用 被引量:16
1
作者 丁雨钦 曲杰 +1 位作者 张晶晶 吕喜英 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2012年第20期235-239,共5页
目的:探讨靶向切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)和鸦胆子油乳联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对ERCC1基因对应序列的siRNA,采用转染试剂Lipofectamine 2000... 目的:探讨靶向切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)和鸦胆子油乳联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对ERCC1基因对应序列的siRNA,采用转染试剂Lipofectamine 2000转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP;将实验组细胞分为:空白对照组、鸦胆子油处理组、siRNA处理组及鸦胆子油联合siRNA处理组,利用RT-PCR检测ERCC1 mRNA和Western blot检测ERCC1蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞对顺铂的耐药逆转效果。结果:siRNA、鸦胆子油、鸦胆子油和siRNA联合应用均能降低ERCC1 mRNA和蛋白质的表达,对顺铂的敏感性明显恢复,耐药倍数分别降至9.72,8.89,7.59,6.83,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显提高(P<0.05)。结论:siRNA、鸦胆子油能有效地逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显加强。 展开更多
关键词 鸦胆子油乳 A549/ddp细胞 ERCC1 耐药逆转
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黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制 被引量:13
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作者 柳叶 陈龙云 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1162-1168,I0004,共8页
目的:探讨黄芪多糖(APS)对人肺癌顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长期A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予25、50、100、200和400 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予2、4、8... 目的:探讨黄芪多糖(APS)对人肺癌顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长期A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予25、50、100、200和400 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP),药物处理A549/DDP细胞24 h,采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50)。将A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予100 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予11.46 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和11.46 mg·L^-1 DDP),药物处理细胞24 h,采用Transwell小室法检测各组A549/DDP细胞迁移情况,流式细胞术检测各组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位,Western blotting法检测各组A549/DDP细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P糖蛋白(P-gp)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,与DDP组比较,APS+DDP组的A549/DDP细胞IC50降低。Transwell小室法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞迁移能力无明显变化;与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞迁移数降低。流式细胞术检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位差异无统计学意义(P>0.05),DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与APS组比较,DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋� 展开更多
关键词 黄芪多糖 A549/ddp细胞 耐药性 磷脂酰肌醇3激酶 蛋白激酶B
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白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究 被引量:10
3
作者 陈春苗 田友清 +4 位作者 丁平 刘平平 张国哲 刘荣 于广华 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期523-529,共7页
目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobolog... 目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P<0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P<0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P<0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P<0.01),降低p62表达水平(P<0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P<0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 白藜芦醇 顺铂 A549/ddp细胞 联合用药 自噬 细胞凋亡 PI3K/AKT/mTOR信号通路
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榄香烯对人肺癌A549细胞系耐顺铂细胞株多药耐药的改善作用及机制研究 被引量:10
4
作者 李全志 刘志强 +1 位作者 赵玉霞 孙太振 《浙江中医药大学学报》 CAS 2021年第1期16-22,共7页
[目的]探究榄香烯(elemene,ELE)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药人肺癌A549/DDP细胞系多药耐药的改善作用及其作用机制。[方法]将A549/DDP细胞分为A549/DDP组和ELE组,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测24、48、72h时... [目的]探究榄香烯(elemene,ELE)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药人肺癌A549/DDP细胞系多药耐药的改善作用及其作用机制。[方法]将A549/DDP细胞分为A549/DDP组和ELE组,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测24、48、72h时不同浓度ELE对A549/DDP细胞增殖能力的影响。采用DDP及20、40μg·mL^-1 ELE处理A549/DDP细胞,MTT法检测ELE对细胞化疗敏感性的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)mRNA表达水平,Western blot检测多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,MDR1)、肺耐药相关蛋白(lung resistancerelated protein,LRP)及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidy linositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白表达水平。[结果]MTT结果显示,ELE呈时间和剂量依赖性抑制A549/DDP细胞的增殖能力(均P<0.05)。与单独使用DDP比较,20和40μg·mL^-1 ELE提高A549/DDP细胞对DDP的敏感性,降低DDP对A549/DDP细胞的半数抑制浓度(50%inlibiting concentration,IC50),抑制细胞的增殖能力(均P<0.05)和侵袭能力(P<0.05,P<0.01),增加细胞Bax mRNA表达水平,减少Bcl-2 mRNA表达水平(均P<0.05),使A549/DDP细胞MDR1、LRP、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。[结论]ELE可增加A549/DDP细胞对DDP的敏感性,改善多药耐药现象,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的活化有关。 展开更多
关键词 榄香烯 肺癌 A549/ddp细胞 多药耐药 顺铂 侵袭 凋亡 PI3K/AKT信号通路
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姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响 被引量:8
5
作者 陈旭昕 张艰 +4 位作者 赵峰 宋立强 李艳 王洋 李焕章 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第24期2287-2290,共4页
目的:探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法:采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后,Hoechst... 目的:探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法:采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h后,流式细胞仪分析细胞周期.结果:亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P>0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57μmol/L和146.79μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P<0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P<0.05).20μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论:姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的. 展开更多
关键词 姜黄素 肺肿瘤 A549/ddp细胞 细胞凋亡 细胞周期
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补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549/DDP细胞Snail、E-cadherin表达的影响 被引量:5
6
作者 于丹 王莹 +1 位作者 高原 刘春英 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1636-1639,共4页
目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 n... 目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 ng/L,48 h)、中药组(10%补中益气汤含药血清)、干扰组(Snail干扰)。采用siRNA技术,运用免疫细胞化学法、Western印迹法、实时荧光定量PCR法,检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞Snail、E-cadherin及mRNA水平的影响。结果与空白组比较,TGF-β1组E-cadherin及mRNA表达水平显著下调(P<0.05);与TGF-β1组比较,中药组及干扰组E-cadherin及mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。而Snail蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论Snail作为转录因子,可抑制E-cadherin基因的表达,诱导EMT发生,而补中益气汤含药血清可通过干预Snail蛋白及基因的表达,解除其对E-cadherin的抑制作用,从而逆转A549/DDP细胞EMT。 展开更多
关键词 补中益气汤 A549/ddp细胞 上皮-间充质转化(EMT)
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肝细胞生长因子对非小细胞肺癌侵袭和迁移的影响 被引量:6
7
作者 李思文 夏旭 +5 位作者 胡宁东 罗国庆 刘秋华 赵健 殷俊 傅文凡 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第2期173-177,共5页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制。方法以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制。方法以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白(vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadhe-rin)表达的变化。将细胞种植在细胞培养板,设置未外源性添加HGF的为对照组,外源性添加HGF进行细胞培养的为HGF诱导组,应用细胞划痕以及Transwell实验检测诱导前后两株细胞迁移侵袭能力的变化。结果 HGF在A549/DDP细胞的mRNA表达水平较A549细胞显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);提高A549/DDP及A549细胞微环境中HGF水平可诱导细胞vimentin增加、E-cadherin减少,差异均有统计学意义(基因水平P<0.01,蛋白水平P<0.05)。细胞划痕实验显示,A549/DDP细胞愈合较A549细胞快,差异有统计学意义(P<0.05),HGF诱导可使细胞侵袭能力增强;Transwell结果显示,HGF诱导组的A549/DDP、A549细胞相对未诱导前细胞的侵袭能力增强,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 HGF促进NSCLC细胞A549/DDP及A549的侵袭迁移,其机制可能与通过调控EMT相关基因的表达相关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 细胞生长因子 A549细胞 A549/ddp细胞 侵袭 迁移 上皮间质转化
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去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞耐药相关基因表达的影响 被引量:8
8
作者 蒋亦燕 尹丽慧 +1 位作者 费正华 陈素秀 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期37-40,共4页
目的:研究去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其对耐顺铂细胞耐药相关基因表达的影响。方法:采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度,并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的IC50;采用逆转录... 目的:研究去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其对耐顺铂细胞耐药相关基因表达的影响。方法:采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度,并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的IC50;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h、72h后耐药相关基因mdr1mRNA,MRP1mRNA,GST-PimRNA,ERCC1mRNA表达。结果:SNCTD对A549/DDP的无毒浓度为5μg/ml,与顺铂联合用药降低A549/DDP的耐药性,逆转倍数为1.97;1、2倍无毒浓度SNCTD处理耐药细胞后mdr1,MRP1mRNA表达明显减低(P(0.05),并具有浓度依赖性,而GST-Pi,ERCC1mRNA表达无明显浓度和时间依赖性(P>0.05)。结论:SNCTD对A549/DDP具有耐药逆转作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1,MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关。 展开更多
关键词 去甲斑蝥酸钠 A549/ddp细胞 逆转 耐药相关基因
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柴胡皂苷A通过Wnt/β-catenin通路改变A549/DDP细胞耐药性 被引量:7
9
作者 何艺韵 殷亦男 +1 位作者 曾海荣 祁丽丽 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期83-88,共6页
目的:探讨柴胡皂苷A(SSA)逆转人肺癌顺铂(DDP)耐药株A549/DDP的作用及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测A549和A549/DDP对DDP的耐药性及SSA对A549和A549/DDP细胞活力的影响;流式细胞术检测A549/DDP凋亡率和细胞中活性氧(ROS)... 目的:探讨柴胡皂苷A(SSA)逆转人肺癌顺铂(DDP)耐药株A549/DDP的作用及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测A549和A549/DDP对DDP的耐药性及SSA对A549和A549/DDP细胞活力的影响;流式细胞术检测A549/DDP凋亡率和细胞中活性氧(ROS)的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测C-myc,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)mRNA的表达情况;TopFish双荧光素酶报告基因检测β-连环蛋白(β-catenin)的转录活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的变化。结果:CCK-8检测结果显示,A549/DDP的耐药性是A549的12.82倍,差异具有统计学意义(P<0.05),SSA能够抑制A549的细胞活力,其半数抑制浓度(IC50)为34.9μmol·L^(-1)。SSA抑制A549/DDP细胞的活力并具有浓度依赖性,在20μmol·L^(-1)浓度时,对A549/DDP的抑制率<10%,选择20μmol·L^(-1)作为逆转浓度;流式结果显示,与空白组比较,DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高,细胞内活性氧的累积明显增加(P<0.05),与DDP组比较,SSA+DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高,细胞内活性氧的累积明显增加;与空白组比较,DDP组A549/DDP细胞中C-myc,Bcl-2 mRNA表达明显降低,Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05),与DDP组比较,SSA+DDP组C-myc,Bcl-2 mRNA表达明显降低,Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05);与空白组比较,DDP组β-catenin的转录活性明显降低(P<0.05),与DDP组比较,SSA+DDP组β-catenin的转录活性明显降低(P<0.05);与空白组和DDP组比较,SSA+DDP组β-catenin蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷A可以提高A549/DDP细胞对DDP的敏感性,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。 展开更多
关键词 柴胡皂苷A A549/ddp细胞 Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)
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补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞Nrf2、PRX1、SOD、GPX4的影响
10
作者 李贺 于丹 +2 位作者 牟琪瑞 刘玥彤 高原 《国际中医中药杂志》 2024年第5期607-613,共7页
目的探讨补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞中核因子红系2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化蛋白的影响。方法将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组15只。低、中、高剂量组分别灌胃3.29... 目的探讨补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞中核因子红系2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化蛋白的影响。方法将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组15只。低、中、高剂量组分别灌胃3.29、6.57、13.13 g/kg补中益气汤,1次/d,持续7 d。末次给药后1 h,腹主动脉取血,制备补中益气汤含药血清。将A549/DDP细胞按随机数字表法分为空白组(空白组大鼠血清)、模型组(空白组大鼠血清+顺铂)、低剂量组(低剂量含药血清+顺铂)、中剂量组(中剂量含药血清+顺铂)、高剂量组(高剂量含药血清+顺铂),相应药物干预24 h后,采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);共聚焦荧光定位法检测p-Nrf2荧光表达强度;RT-qPCR法检测Nrf2 mRNA水平;Western blot法检测各组A549/DDP细胞中Nrf2、p-Nrf2、过氧化物还原酶1(PRX1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、SOD蛋白相对表达。结果与模型组比较,低、中、高剂量组A549/DDP细胞对顺铂的IC50降低(P<0.01);p-Nrf2荧光强度降低(P<0.01);Nrf2 mRNA水平降低(P<0.01);Nrf2、p-Nrf2、SOD、PRX1、GPX4蛋白表达下调(P<0.01),尤以中、高剂量组效果更显著(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清通过抑制A549/DDP细胞中Nrf2活性表达及下调其靶基因SOD、PRX1、GPX4蛋白表达,改善肺腺癌顺铂耐药。 展开更多
关键词 补中益气汤 肺腺癌 核因子红系2相关因子2 A549/ddp细胞 顺铂耐药
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肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响
11
作者 谭小宁 梁子成 +1 位作者 柳卓 邱云 《中国中医急症》 2024年第6期963-967,共5页
目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化... 目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 肺癌 肺复方 A549/ddp细胞 PI3K/Akt/Nrf2信号通路 耐药性
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靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性 被引量:6
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作者 邵淑丽 崔婷婷 +6 位作者 贾红双 谢振丽 张伟伟 刘迁 陈薇薇 李爽 陈丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2265-2269,共5页
目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免... 目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况。MTT法检测细胞活力。结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定转染sh-MRP1-2.1-1和sh-MRP1-2.1-2后,A549/DDP细胞MRP1 mRNA和蛋白表达均显著降低,细胞内Rho123相对荧光强度由16.93%±0.58%分别升高至89.02%±0.59%和82.56%±1.37%;A549/DDP亲本细胞顺铂的IC50分别由(101.45±0.64)μmol/L降至(38.06±0.05)μmol/L和(53.72±0.36)μmol/L,5-氟尿嘧啶的IC50分别由(263.20±2.00)μmol/L降至(98.82±1.16)μmol/L和(141.81±0.49)μmol/L。结论:shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因,有效地逆转了A549/DDP细胞的多药耐药性。 展开更多
关键词 短发夹RNA 多药耐药 多药耐药相关蛋白1 RNA干扰 A549/ddp细胞
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芪玉三龙方通过CBS/GPX4调控铁死亡促进肺癌移植瘤小鼠对顺铂的敏感性
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作者 刘桐 张波克 +3 位作者 张星星 高雅婷 童佳兵 李泽庚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2343-2348,共6页
目的:基于生物信息技术和动物实验,探究芪玉三龙方提高肺癌顺铂敏感性的潜在作用机制。方法:分析转录组数据得到肺癌和顺铂耐药的差异基因,采用人工智能策略预测芪玉三龙方的靶蛋白,对取交集获得的潜在作用靶点进行GO生物过程及KEGG通... 目的:基于生物信息技术和动物实验,探究芪玉三龙方提高肺癌顺铂敏感性的潜在作用机制。方法:分析转录组数据得到肺癌和顺铂耐药的差异基因,采用人工智能策略预测芪玉三龙方的靶蛋白,对取交集获得的潜在作用靶点进行GO生物过程及KEGG通路富集分析,随后进行基因依赖分析和分子对接,确定关键标志物,最后构建肺癌A549/DDP皮下瘤模型进行验证。结果:获得芪玉三龙方与肺癌顺铂耐药相关的潜在有效靶点186个,富集的生物学过程有细胞对过氧化氢的反应、细胞氧化解毒;功能通路有谷胱甘肽代谢、铂类药物的耐药性等。基因依赖分析鉴定出与铁死亡相关的基因CBS为核心的靶点,分子对接显示CBS与芪玉三龙方的核心活性成分有良好的亲和力,与贝母辛的结合亲和力最高。动物实验结果显示芪玉三龙方联合顺铂组肿瘤组织可见大片状坏死的细胞。与顺铂组比较,联合组能够上调4HNE和TFR蛋白的表达,下调CBS和GPX4蛋白的表达。结论:芪玉三龙方能够提高肺癌的顺铂耐药肿瘤组织对于顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制铁死亡关键分子CBS、GPX4表达有关。 展开更多
关键词 芪玉三龙方 肺癌 A549/ddp细胞 铁死亡 CBS
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RNA干扰抑制ERCC1/ERCC2表达对非小细胞肺癌化疗敏感性影响观察 被引量:4
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作者 彭睿 周航 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期256-262,共7页
目的探讨利用RNA干扰技术沉默非小细胞肺癌A549和A549/顺铂(DDP)细胞株ERCC1和ERCC2的表达对DDP化疗敏感性的影响。方法设计并合成靶向基因siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2,并构建载体,通过前期转染A549/DDP细胞,筛选出沉默ERCC1和ERCC2基因... 目的探讨利用RNA干扰技术沉默非小细胞肺癌A549和A549/顺铂(DDP)细胞株ERCC1和ERCC2的表达对DDP化疗敏感性的影响。方法设计并合成靶向基因siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2,并构建载体,通过前期转染A549/DDP细胞,筛选出沉默ERCC1和ERCC2基因表达最优的小分子RNA片段及最佳的作用时间,再将筛选出来的最优片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染入A549细胞,观察其转染效率,使用RT-PCR及细胞免疫组化分别检测转染后基因及蛋白的表达变化;利用MTT法检测转染后细胞IC50,观察其对DDP耐药性的变化;再根据实验结果,从A549和A549/DDP细胞株中选定一株能够被逆转耐药的细胞接种于12只裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤时间,并加用DDP局部化疗4次,记录肿瘤体积变化情况。结果通过siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染A549细胞株后,其ERCC1mRNA相对表达量为104.097 8±8.551 3,未转染组为128.465 6±12.360 4;ERCC2 mRNA相对表达量为90.415 7±7.882 1,未转染siRNA-ERCC2组为123.310 0±10.999 2。转染组的mRNA相对表达量均小于未转染组,P<0.05。转染A549细胞后,转染组ERCC1和ERCC2蛋白表达量分别为1.982 1±0.518 7和2.087 1±0.655 2,明显低于未转染组ERCC1(4.576 4±1.271 1)和ERCC2(5.680 0±1.416 7),P<0.01;MTT结果提示,siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染细胞A549后的IC50分别为(20.322 7±0.452 1)和(20.394 7±0.479 4)μg/mL,与未转染组(21.062 4±0.766 4)μg/mL差异无统计学意义,P>0.05;转染A549细胞后未发现逆转DDP耐药的效果,故筛选出A549/DDP细胞株。siRNA-ERCC1转染组的肿瘤体积为(144.63±7.67)mm3,siRNA-ERCC2转染组为(130.65±8.45)mm3,均明显小于未转染组的(252.35±12.36)mm3,P<0.01。结论高效的特异性siRNA能抑制非小细胞肺癌细胞中ERCC1和ERCC2基因和蛋白的表达,并能使A549/DDP细胞株对DDP的耐药性降低,但不能改变A549细胞株对DDP的耐药性。 展开更多
关键词 RNA干扰 ERCC1/ ERCC2基因 非小细胞肺癌 A549/ddp细胞 A549细胞 顺铂耐药
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补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期作用的影响 被引量:5
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作者 井欢 唐莹 +1 位作者 于丹 刘春英 《中国生化药物杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期48-50,共3页
目的评估补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期的影响效果。方法体外培养人肺腺癌A549/DDP细胞,实验分组为:空白对照组,补中益气汤组和脾细胞处理组。用不同浓度的补中益气汤含药血清和脾细胞刺激A549/DDP细胞,采用MTT法(Methylthi... 目的评估补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期的影响效果。方法体外培养人肺腺癌A549/DDP细胞,实验分组为:空白对照组,补中益气汤组和脾细胞处理组。用不同浓度的补中益气汤含药血清和脾细胞刺激A549/DDP细胞,采用MTT法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定2种方法对细胞的直接杀伤作用;流式细胞术检测2种方法对细胞凋亡的影响;荧光显微镜观察2种方法对凋亡小体产生的影响。结果MTT法显示同空白对照组相比,补中益气汤含药血清对细胞生长均有抑制作用(P<0.05),且该法同脾细胞作用后效果类似;2种方法处理后,流式细胞术均可见特征性的细胞凋亡峰;在荧光显微镜下可见凋亡细胞。结论补中益气汤含药血清在体外能阻滞A549/DDP细胞的生长增殖,诱导该细胞发生凋亡,且效果同脾细胞类似。 展开更多
关键词 补中益气汤 A 549/ddp细胞 细胞周期 细胞凋亡
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淫羊藿苷通过IL-6/STAT3通路逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用机制研究 被引量:1
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作者 宁丞君 王瑜 胡邵霖 《实用癌症杂志》 2023年第8期1233-1238,共6页
目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(IL-6)和信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路的调节。方法 第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率... 目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(IL-6)和信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路的调节。方法 第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率的影响。采用不同浓度DDP及50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,MTT法检测ICA对A549/DDP细胞化疗敏感性的影响。采用4μg/mL DDP和50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell试验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP) mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果 细胞增殖率随ICA浓度的增加而降低(P<0.05)。与单独使用不同浓度DDP处理A549/DDP细胞比较,50和100μmol/L ICA处理提高细胞对DDP的敏感性,降低DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)(P<0.05)。50和100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,细胞侵袭能力减弱、LRP和MRP mRNA相对表达量以及IL-6、STAT3和Bcl-2蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达量升高。结论 ICA可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转耐药性,其可能是通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 A549/ddp细胞 耐药 IL-6/STAT3 淫羊藿苷
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中药标准品对人肺癌耐药细胞A549/DDP的逆转效果研究 被引量:3
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作者 杨新阶 王婧筱 +5 位作者 王琳 迟笑怡 迟佳琦 周天 刘铜华 胡凯文 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2018年第4期521-526,共6页
目的:研究中药标准品对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的逆转效果。方法:通过细胞增殖实验研究耐药细胞株(A549/DDP)的耐药倍数和对所选中药标准品的耐受情况。回归分析计算中药标准品对A549/DDP的IC5作为其逆转耐药的工作浓度。研究中... 目的:研究中药标准品对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的逆转效果。方法:通过细胞增殖实验研究耐药细胞株(A549/DDP)的耐药倍数和对所选中药标准品的耐受情况。回归分析计算中药标准品对A549/DDP的IC5作为其逆转耐药的工作浓度。研究中药标准品在工作浓度下对A549/DDP耐顺铂的逆转效果。结果:A549/DDP的耐药指数为31.79。A549/DDP对川芎嗪、苦参碱耐受良好。盐酸小檗碱、北豆根碱(蝙蝠葛碱)和冬凌草甲素对A549/DDP细胞增殖均有一定的抑制作用,且存在明显的量效关系,工作浓度时,均能逆转A549/DDP对顺铂的耐受性(P<0.01)。结论:所选的中药标准品能有效逆转A549/DDP对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 中药标准品 TARIQUIDAR A549细胞 A549/ddp细胞 化疗耐药
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白杨素通过下调Annexin A3逆转人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性
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作者 刘晖杰 彭荣 许华 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第7期800-806,共7页
目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞... 目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞生存率;将A549/DDP细胞分为A549/DDP组、白杨素组(50 mol/L)、Annexin A3过表达组(Annexin A3mimic组)、Annexin A3阴性对照组(Annexin A3 NC)、白杨素+Annexin A3mimic组,另取A549细胞正常培养作为空白对照组;CCK-8法检测细胞对DDP的半数生存浓度(IC50)及耐药指数;qRT-PCR和Western blot法检测Annexin A3基因和蛋白表达水平,流式细胞义监测细胞凋亡率,小鼠荷瘤实验检测移植瘤体积。结果不同浓度的白杨素均能时效依赖性和剂量依赖性降低A549、A549/DDP细胞生存率(P<0.05),选取50 mol/L为实验浓度作用细胞48 h;与A549细胞比较,A549/DDP细胞Annexin A mRNA及蛋白表达、对DDP的IC50、耐药指数均升高,凋亡率降低(P<0.05);与A549/DDP组比较,白杨素组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),Annexin A3 mimic组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);Annexin A3基因高表达可减弱A549/DDP细胞对白杨素的敏感性,降低细胞凋亡率(P<0.05);小鼠荷瘤实验证实,与单独的DDP治疗组比较,白杨素与DDP联合治疗可显著降低小鼠A549/DDP移植瘤瘤体体积(P<0.05),Annexin A3基因高表达的小鼠逆转白杨素与DDP联合治疗效果(P<0.05)。结论白杨素可能通过下调Annexin A3表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性。 展开更多
关键词 肺腺肿瘤 白杨素 膜联蛋白A3 顺铂耐药 A549/ddp细胞
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补中益气汤中的有效成分槲皮素通过GSTP1-JAK-STAT途径增强肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性
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作者 邹长鹏 郭燕 +2 位作者 张长旺 高思铭 李娜 《广州中医药大学学报》 CAS 2023年第10期2606-2614,共9页
【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于... 【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系。(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况。细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系。【结果】补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合。通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展。此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达。在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性。【结论】槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 补中益气汤 槲皮素 肺腺癌 GSTP1 JAK-STAT途径 顺铂敏感性 A549/ddp细胞
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芦丁对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用及其机制 被引量:4
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作者 孔祥虎 李志欣 +1 位作者 房丽君 焦建峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期2332-2336,共5页
目的:本研究旨在观察芦丁(RT)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外常规培养A549细胞和A549/DDP细胞,给予不同剂量RT和/或DDP处理48 h后,采用CCK-8法、Chou-Talalay中效分析法、流式细胞术、... 目的:本研究旨在观察芦丁(RT)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外常规培养A549细胞和A549/DDP细胞,给予不同剂量RT和/或DDP处理48 h后,采用CCK-8法、Chou-Talalay中效分析法、流式细胞术、免疫印迹法和实时定量PCR反应分别检测了细胞活力、药物联合效应、细胞凋亡、IKKα和p65蛋白磷酸化水平以及MRP1和GST-π蛋白和mRNA表达水平。结果:DDP可剂量依赖性地抑制A549细胞和A549/DDP细胞活力(P<0.05),A549/DDP细胞耐药倍数为7.49;RT可协同增强DDP对A549/DDP细胞的抑制作用,逆转倍数为2.33;与对照组相比,DDP组A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而低毒剂量的RT可协同增强DDP引起的A549/DDP细胞凋亡(P<0.05);同时,RT和IKK16均可抑制A549/DDP细胞中IKKα和p65蛋白磷酸化(P<0.05),下调MRP1和GST-π的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),且两者联用时抑制作用增强(P<0.05)。结论:RT可通过抑制IKKα/p65通路,进而下调MRP1和GST-π表达,以逆转A549/DDP细胞顺铂耐药性。 展开更多
关键词 芦丁 A549/ddp细胞 IκB激酶α P65 耐药
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