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Aβ3-10s基因疫苗免疫AD小鼠诱导Th2型免疫反应的研究 被引量：3
1
作者 郭蓉 姜童子 +3 位作者 黄葵 李昱 陈晓虹 曹云鹏 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期388-391,共4页
目的探讨新型AD疫苗AdCpG-(Aβ3-10)10诱导转基因小鼠产生的免疫反应类型。方法将人工合成的Aβ3-10的基因片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1+,以CpG为基因佐剂,使用E1/E3缺陷的腺病毒载体pAxCAwtit作为基因载体,获得基因重组缺陷腺病毒Ad... 目的探讨新型AD疫苗AdCpG-(Aβ3-10)10诱导转基因小鼠产生的免疫反应类型。方法将人工合成的Aβ3-10的基因片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1+,以CpG为基因佐剂,使用E1/E3缺陷的腺病毒载体pAxCAwtit作为基因载体,获得基因重组缺陷腺病毒AdCpG-(Aβ3-10)10。以3月龄的转基因小鼠18只为研究对象,实验分为3组,每组各6只小鼠:免疫含有目的基因的AdCpG-(Aβ3-10)10组、不含目的基因的AdCpG组及Aβ1-42全肽链组。各组均经鼻粘膜分别免疫AdCpG-(Aβ3-10)10、不含目的基因的AdCpG及Aβ1-42全肽链,每组均免疫8次,每3个月1次。用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体含量及抗体分型,用MTT方法观察脾细胞增值反应;用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10及γ-干扰素等细胞因子含量。结果小鼠经过6次免疫后,AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组抗Aβ42 IgG抗体浓度分别为21.17±1.59ng/ml、23.93±1.66ng/ml,较AdCpG组(1.08±0.16)明显升高(P<0.05),但AdCpG-(Aβ3-10)10组的IgG1/IgG2a(12.94±3.79)较Aβ1-42组的IgG1/IgG2a(6.13±2.21)明显增高(P<0.01);AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组的脾细胞在体外培养,经Con A刺激后细胞增殖明显,OD值分别为0.37±0.059,0.3237±0.048与AdCpG(0.1692±0.072)比较有明显差异(P<0.05)。经AdCpG-(Aβ3-10)10免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-4和IL-10含量分别为342.34±45.68μg/ml、329.46±112.99μg/ml,经Aβ1-42免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-2、INF-γ、IL-4和IL-10含量分别为284.81±22.55μg/ml、361.96±26.47μg/ml、223.19±22.45μg/ml、258.68±102.42μg/ml,与AdCpG(149.03±27.34μg/ml、291.92±45.92μg/ml、169.52±25.68μg/ml、134.85±21.67μg/ml)比较有明显差异(P<0.05)。结论 AdCpG-(Aβ3-10)10主动免疫幼龄双转基因小鼠主要产生Th2型体液免疫应答反应,可以减少细胞免疫应答反应引起的炎性反应。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Aβ疫苗 免疫反应
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Aβ1-15疫苗预防Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的研究 被引量：3
2
作者 胡金家 李国营 +2 位作者 汪华侨 林贤 姚志彬 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2008年第6期500-506,共7页
探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用．32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组：对照组（只接种佐剂），Aβ42组（接种Aβ42疫苗），Aβ1-15小组（接种Aβ1-15疫苗）和Aβ36-42组（接种Aβ36-42疫苗），每组8... 探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用．32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组：对照组（只接种佐剂），Aβ42组（接种Aβ42疫苗），Aβ1-15小组（接种Aβ1-15疫苗）和Aβ36-42组（接种Aβ36-42疫苗），每组8只,3组接种疫苗小鼠的血清抗Aβ42抗体滴度比对照组显著增高；脑组织匀浆内也可检测到少量抗体．Morris水迷宫实验结果显示Aβ42组、Aβ1-15小组和Aβ36-42组与对照组小鼠的行为学有明显改善．取各组2只小鼠的脾细胞培养，经Con A或各自抗原刺激后，3组疫苗免疫后小鼠脾细胞增殖显著高于对照组；Aβ42组，IL-4和IL-10相对较高，而IL-2和INF-γ相对较低；Aβ1-15小组中IL-4和IL-10较高；Aβ36-42组IL-2和INF-γ较高．免疫组织化学法显示对照组小鼠脑皮质与海马部位有大量老年斑，而Aβ42组和Aβ1-15组脑内无老年斑出现，Aβ36-42组小鼠脑内有少量老年斑．实验证明Aβ1-15亚单位疫苗可防止Tg2576小鼠认知行为的退化，阻止Tg2576小鼠脑内Aβ沉积和老年斑的形成． 展开更多
关键词 阿尔茨海默病(AD) β-淀粉样肽 Tg2576小鼠 Aβ疫苗 老年斑
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Aβ_(15)老年性痴呆疫苗接种小鼠的剂量优化研究 被引量：2
3
作者 邹俊涛 袁茂运 +4 位作者 杨俊华 李少阳 夏宇岑 袁群芳 姚志彬 《解剖学研究》 CAS 2010年第3期161-164,F0003,共5页
目的探讨Aβ15老年性痴呆疫苗接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠的最优化剂量。方法将本室前期制备的重组Aβ15疫苗分别以25.0、12.5及6.25μg三种剂量接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠,比较其诱导小鼠产生的抗体滴度大小;Western检测抗体与A... 目的探讨Aβ15老年性痴呆疫苗接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠的最优化剂量。方法将本室前期制备的重组Aβ15疫苗分别以25.0、12.5及6.25μg三种剂量接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠,比较其诱导小鼠产生的抗体滴度大小;Western检测抗体与Aβ42结合的特异性;免疫组化检测小鼠产生的抗体是否能特异性结合老年斑。结果 25、12.5μg两种剂量均能诱导机体产生高滴度的抗体,6.25μg剂量未能诱导小鼠产生特性抗体;相同的接种次数下,C57小鼠产生的抗体滴度较Tg2576转基因小鼠高;接种小鼠产生的特异性抗体均能和Aβ42及老年斑结合。结论 Aβ15疫苗接种小鼠的最优化剂量为12.5μg,Tg2576转基因小鼠对Aβ疫苗有轻度免疫耐受。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Aβ疫苗 免疫治疗 接种剂量
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hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达 被引量：11
4
作者 王明雁 李磊 +2 位作者 李大金 孟毅 朱影 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期445-450,共6页
目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的... 目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。 展开更多
关键词 真核细胞 hCGβ疫苗 COS-7细胞株 免疫避孕 分子佐剂C3d 免疫原性 聚合酶链反应 pBS-hCGβ-C3d3质粒
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Alzheimer病的Aβ免疫疗法
5
作者 矢吹千織 徐万鹏 《日本医学介绍》 2007年第11期514-517,共4页
关于Alzheimer病(AD)的发病,"淀粉样蛋白假说"得到广泛支持。该假说认为AD的主要原因是脑内产生的淀粉样蛋白β多肽(Aβ)的不溶化和沉积。现在Aβ免疫疗法被认为是AD根本性的治疗,疫苗疗法、抗Aβ抗体被动免疫疗法等相关研究... 关于Alzheimer病(AD)的发病,"淀粉样蛋白假说"得到广泛支持。该假说认为AD的主要原因是脑内产生的淀粉样蛋白β多肽(Aβ)的不溶化和沉积。现在Aβ免疫疗法被认为是AD根本性的治疗,疫苗疗法、抗Aβ抗体被动免疫疗法等相关研究和临床应用得到了快速发展。以人AD患者为对象的Aβ疫苗二期临床试验,虽然由于部分患者出现重症脑膜脑炎副作用而被中止,但出现抗体效价上升的患者还是表现出受损部分认知功能的明显改善,依然支持免疫疗法的概念。目前焦点是开发不诱发脑炎等副作用的主动、被动免疫疗法,并阐明其作用机制。 展开更多
关键词 Aβ疫苗疗法 被动免疫疗法 sink假说
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分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗免疫原性及其抗血清中和hCG生物学活性的作用 被引量：3
6
作者 王秀丽 李大金 +3 位作者 袁敏敏 王明雁 朱影 孟毅 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期255-261,共7页
本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO 细胞中获得重组蛋白的稳定... 本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO 细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ+弗氏佐剂和单用hCGβ免疫生育期雌性BALB/c 小鼠,共免疫两次,间隔4周。ELISA 测定血清中抗hCGβ抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清中和hCG 生物学活性的能力进行比较。结果表明hCGβ单独免疫组在加强免疫后才见抗体生成,其抗体滴度比hCGβ-C3d3融合蛋白免疫组低1995倍,C3d3的佐剂能力是弗氏佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫),并且hCGβ-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的中和hCG 生物学活性的作用。实验证明通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGβ的体液免疫应答能力。 展开更多
关键词 免疫避孕 分子佐剂 C3D3 hCGβ蛋白疫苗 避孕疫苗 抗血清
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转化生长因子-β1疫苗对大鼠肝纤维化组织中胰岛素样生长因子结合蛋白的影响 被引量：4
7
作者 徐叶进 陈凌 +4 位作者 陈海君 付跃娟 郭玉香 盛棋跃 陈永平 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期385-390,共6页
目的：观察 TGF-β1疫苗干预对大鼠肝纤维化程度的影响，探讨其对肝纤维化组织中胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP ）3、7的影响。方法20只大鼠用二甲基亚硝胺（DMN ）建立大鼠肝纤维化模型，其中10只 TGF-β1疫苗干预，另设10只作为正... 目的：观察 TGF-β1疫苗干预对大鼠肝纤维化程度的影响，探讨其对肝纤维化组织中胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP ）3、7的影响。方法20只大鼠用二甲基亚硝胺（DMN ）建立大鼠肝纤维化模型，其中10只 TGF-β1疫苗干预，另设10只作为正常对照组。6周末观察大鼠肝组织病理学变化，采用反转录-PCR 、免疫组织化学和 Western 印迹检测各组大鼠肝组织中 IGFBP3、IGFBP7的表达。数据行正态性检验和方差齐性分析，方差齐者采用 LSD 检验，计数资料采用 Fisher 确切概率法。结果肝组织病理学和血清 HA 、LN 均表明，TGF-β1疫苗干预可减轻大鼠肝纤维化程度。 IGFBP3 mRNA 在正常对照组、肝纤维化模型组、TGF-β1疫苗干预组大鼠肝组织分别为1．735±0．097、1．165±0．096和1．491±0．046（两两比较，t 值分别为4．575、6．285、8．489，均 P＜0．05）；IGFBP7 mRNA 分别为0．497±0．021、1．250±0．064和0．885±0．149（两两比较，t 值分别为5．161、30．101、7．250，均 P＜0．05）。免疫组织化学证实，IGFBP3在肝纤维化模型组、TGF-β1疫苗干预组较正常对照组大鼠肝组织中表达减少，IGFBP7的表达与 IGFBP3相反。 IGFBP3蛋白在正常对照组、肝纤维化模型组、TGF-β1疫苗干预组大鼠肝组织分别为7．508±0．357、5．200±0．210和5．751±0．178（两两比较，t 值分别为7．622、6．180、29．156，均 P＜0．05）；IGFBP7分别为1．176±0．051、1．735±0．115和1．428±0．056（两两比较， t值分别为7．188、4．827、8．649，均 P＜0．05）。结论 TGF-β1疫苗通过影响 IGFBP3、IGFBP7的表达，在肝纤维化的发生、发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 肝硬化 胰岛素样生长因子结合蛋白质3 胰岛素样生长因子结合蛋白质7 转化生长因子β1疫苗 二甲基亚硝胺 大鼠
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分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答 被引量：1
8
作者 余敏 赵欣荣 +3 位作者 李大金 王秀丽 袁敏敏 姚晓英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期513-517,共5页
目的:提高hCGβ在真核细胞中的表达效率,观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法:构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4hCGβC3d3、pCMV4hCGβ和pCMV4C3d3。分别用pCMV4DP... 目的:提高hCGβ在真核细胞中的表达效率,观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法:构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4hCGβC3d3、pCMV4hCGβ和pCMV4C3d3。分别用pCMV4DPPISShCGβC3d3、pCMV4DPPISShCGβ和pCMV4DPPISShCGβ联合pCMV4DPPISSC3d3免疫BALBc小鼠,各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500pmol,间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果:含有DPPISS的pCMV4hCGβC3d3较无DPPISS的pCMV4hCGβC3d3在COS7细胞中的表达效率明显提高。50pmol是BALBc小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALBc小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβC3d3免疫组IgG1IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论:分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。 展开更多
关键词 分子佐剂C3d3 hCGβ基因疫苗 体液免疫
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hCGβ-C3d3融合蛋白免疫BALB/c小鼠及其抗血清对hCG诱导鼠子宫增重的抑制效应 被引量：2
9
作者 王秀丽 李大金 +2 位作者 袁敏敏 余敏 姚晓英 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期257-261,i001,共6页
目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGb避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGb-C3d3和phCMV1-6His-hCGb,在CHO细胞中获得稳定、高效表达的重组蛋白... 目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGb避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGb-C3d3和phCMV1-6His-hCGb,在CHO细胞中获得稳定、高效表达的重组蛋白,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGb-C3d3融合蛋白和单用hCGb间隔4周两次免疫生育期雌性BALB/c小鼠,ELISA测定血清中抗hCGb抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清拮抗hCG诱导的小鼠子宫增重效应进行比较。结果:C3d3使hCGb蛋白疫苗的免疫原性增强1 995倍,hCGb-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的抑制小鼠子宫增重作用。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGb的体液免疫应答能力,hCGb-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清对hCG的生物学作用具有更强的抑制效应。 展开更多
关键词 C3d3分子佐剂 hCGβ避孕疫苗 HCG 拮抗作用
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hCGβ避孕疫苗研究进展
10
作者 王秀丽 李大金 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期108-113,共6页
h CGβ避孕疫苗的研究已从结合疫苗进入到了基因工程及 DNA疫苗阶段 ,载体、佐剂和免疫途径是进一步增强 h
关键词 hCGβ避孕疫苗 载体 佐剂 粘膜免疫
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