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不同载体微球在p300与RORγt Co-IP实验效率的比较
1
作者 王秀男 滕霄 +4 位作者 刘彪 殷浩程 任翠平 刘淼 沈际佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1722-1725,共4页
目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A... 目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白进行Co-IP;再通过分离人脐血单个核细胞诱导分化人辅助性T细胞17(Th17)进行Co-IP比较分析;通过CCK8实验排除转染试剂等对细胞活性毒性。结果过表达的HEK293T细胞和诱导分化的Th17细胞中均显示腺病毒E1A结合蛋白(p300)与维甲酸相关孤儿核受体(RORγt)在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子的p300蛋白效果好于中分子的RORγt蛋白,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子的RORγt蛋白效果好于大分子的p300蛋白。结论在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子蛋白效果较好,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子蛋白效果较好。 展开更多
关键词 P300 维甲酸相关孤儿核受体 Co-IP PROTEIN A/g-琼脂糖珠 PROTEIN A/g-磁珠
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外泌体中新城疫病毒F、W及V蛋白对病毒增殖的影响 被引量：3
2
作者 王玮琦 徐小洪 +6 位作者 钱晶 李金斗 丁佳欣 钦琪 张頔 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1653-1659,共7页
以外泌体跨膜蛋白CD63为靶点,利用protein A/G磁珠吸附抗体Fc端的特点,联合禽CD63抗体,建立了禽源外泌体分离方法。结果显示该方法可有效分离不含NDV粒子的外泌体(NDV Ex)。进一步检测发现,NDV Ex中含有NDV F、W和V蛋白。这些NDV Ex中... 以外泌体跨膜蛋白CD63为靶点,利用protein A/G磁珠吸附抗体Fc端的特点,联合禽CD63抗体,建立了禽源外泌体分离方法。结果显示该方法可有效分离不含NDV粒子的外泌体(NDV Ex)。进一步检测发现,NDV Ex中含有NDV F、W和V蛋白。这些NDV Ex中包含的病毒蛋白能够通过降低干扰素的mRNA水平促进NDV复制,补充了外泌体在NDV感染中发挥作用的知识,为阐明新城疫病毒致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 NDV 外泌体 PROTEIN A/g磁珠 干扰素
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Protein A/G磁珠捕获结合LC-MS/MS法分析大鼠血浆中血管内皮生长因子-阿柏西普复合物 被引量：1
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作者 孔琳琳 余飞 +2 位作者 刘欢 沙春洁 刘万卉 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期2846-2851,共6页
目的:建立一种通用、简便的LC-MS/MS分析方法,测定给予阿柏西普后大鼠血浆中产生的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-阿柏西普复合物的浓度,研究该复合物在大鼠体内的药动学行为。方法:血浆样品前处理采用了P... 目的:建立一种通用、简便的LC-MS/MS分析方法,测定给予阿柏西普后大鼠血浆中产生的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-阿柏西普复合物的浓度,研究该复合物在大鼠体内的药动学行为。方法:血浆样品前处理采用了Protein A/G磁珠捕获,通过胰蛋白酶进行特异性酶切,选取了来自VEGF-A的特征肽的稳定、可靠离子对(m/z 451.2→531.3)进行定量分析。结果:建立的Protein A/G磁珠捕获结合LC-MS/MS法测定大鼠血浆中VEGF-阿柏西普复合物在0.05~5μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,最低定量限为0.05μg·mL^(-1),经验证符合生物样本分析的要求。大鼠尾静脉注射阿柏西普(10 mg·kg^(-1))后体内生成的VEGF-阿柏西普复合物的主要药动学参数:Tmax为(240±0)h,Cmax为(2.95±0.55)μg·mL^(-1),AUC0-∞为(788.33±134.13)h·μg·mL^(-1)。结论:本方法适用于给予阿柏西普后大鼠体内产生的VEGF-阿柏西普复合物的血药浓度检测和药动学评价研究。 展开更多
关键词 阿柏西普 VEgF-阿柏西普复合物 Protein A/g磁珠 液相色谱-串联质谱 药动学
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