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伪狂犬病病毒Ea株gE基因主要抗原区在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量：5
1
作者 覃雅丽 陈焕春 +2 位作者 唐勇 何启盖 徐引弟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期543-549,共7页
伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝... 伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝的重组酵母 ,经甲醇诱导表达了截短的gE蛋白 ,并分泌到胞外。Westernblotting分析显示表达的蛋白大小为3 3kD。ELISA结果表明表达蛋白具有良好的抗原性 ,重组酵母的诱导培养上清不需纯化可直接作为抗原检测gE的抗体 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Ea株 GE基因 抗原区 巴斯德毕赤酵母 表达
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猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达 被引量：3
2
作者 张永国 刘湘涛 +2 位作者 韩雪清 张彦明 谢庆阁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期342-346,共5页
利用RT PCR和nestedPCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区 ,将其克隆到表达载体pProEX HTb中 ,获得重组质粒 ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL2 1 (DE3) ,经IPTG... 利用RT PCR和nestedPCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区 ,将其克隆到表达载体pProEX HTb中 ,获得重组质粒 ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL2 1 (DE3) ,经IPTG诱导表达后SDS PAGE检测表明 ,重组菌能表达猪水泡病病毒VP1抗原区蛋白 ;Westernblot检测表明 ,诱导表达的抗原区蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 猪 水泡病病毒 VPl基因 抗原区 原核表达
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猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因在酵母中的分泌表达与鉴定 被引量：2
3
作者 徐学清 张素芳 +3 位作者 郑其升 苏小运 任雪枫 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期598-601,共4页
基于猪瘟病毒主要保护性抗原 E2 囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位--B/C 抗原区和 A/D 抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒 E2 蛋白的 A/D 抗原区基因, 并将 PCR 产物克隆入含有强启动子 PAOX1和α-MF 信号肽序列的巴斯德... 基于猪瘟病毒主要保护性抗原 E2 囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位--B/C 抗原区和 A/D 抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒 E2 蛋白的 A/D 抗原区基因, 并将 PCR 产物克隆入含有强启动子 PAOX1和α-MF 信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体 pPICZαC 中,构建成重组质粒 pPICZα-AD,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母 X33菌中,经 ZeocinTM筛选得到 5 株高拷贝转化子,甲醇诱导表达。SDS-PAGE 和 Western blot试验表明酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的 E2 蛋白,蛋白表达量达 175.8μg/mL。N-糖基化分析显示该表达蛋白在分泌过程中发生糖基化。该研究为研制防治猪瘟的亚单位疫苗与诊断试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 A/D抗原区 毕赤酵母 表达
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牙鲆淋巴囊肿病毒中国株(LCDV-C)羟类固醇脱氢酶基因的特征分析 被引量：3
4
作者 曾首英 张奇亚 +1 位作者 严兴洪 蔡生力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期131-135,共5页
属于虹彩病毒科的淋巴囊肿病毒(Lymphoeystisdiseasevirus,LCDV)是一类能引起全球各地上百种淡、海水鱼产生囊肿的病原。在新分离到淋巴囊肿病毒中国株(LymphocystisdiseasevirusisolatefromChina,LCDV—C)并完成序列测定的基础上,用计... 属于虹彩病毒科的淋巴囊肿病毒(Lymphoeystisdiseasevirus,LCDV)是一类能引起全球各地上百种淡、海水鱼产生囊肿的病原。在新分离到淋巴囊肿病毒中国株(LymphocystisdiseasevirusisolatefromChina,LCDV—C)并完成序列测定的基础上,用计算机辅助分析了LCDV—C羟类固醇脱氢酶(hydroxysteroiddehydrogenase,HSD)基因结构特征,LCDV—CHSD读码框为1023bp,推导其编码含340个氨基酸、分子量约为39.3kD的蛋白质。对来自10个不同病毒株或物种的HSD蛋白序列进行的比较分析显示,LCDV-C与淋巴囊肿病毒代表株(LCDV-1)的HSD氨基酸同源性最高,为60.5%。对LCDV-CHSD的二级结构进行了预测,有亲水区5个,抗原区、α螺旋区和β折叠区各有6个。经密度排列界面(densealignmentsurface,DAS)的方法预测,表明LCDV-CHSD有一个跨膜结构域。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病毒 中国株 牙鲆 虹彩病毒 抗原区 海水鱼 病毒株 类固醇 醇脱氢酶 蛋白序列
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猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达 被引量：2
5
作者 胡慧 邱昌庆 张彦明 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第1期3-7,共5页
用RT PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株 (Shimen)、近期地方流行的属于第 1群毒株的新疆毒株 (XJ)和第 2群代表毒株甘肃临洮 (LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增 ,均得到约 5 6 1bp的基因片段 ;经克隆测序及序列分析 ,该基因编码 18... 用RT PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株 (Shimen)、近期地方流行的属于第 1群毒株的新疆毒株 (XJ)和第 2群代表毒株甘肃临洮 (LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增 ,均得到约 5 6 1bp的基因片段 ;经克隆测序及序列分析 ,该基因编码 187个氨基酸残基 ,预计蛋白分子质量为 2 1.7ku。将这 4个基因分别克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中 ,阅读框是正确的 ,从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL2 1(DE3)中 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG )进行诱导表达 ,对表达的蛋白用SDS PAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明 ,E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达 ,表达的蛋白多以包涵体形式存在 ,表达产物的分子质量约为 5 0 .0ku ,与理论推测的分子质量一致 ;薄层凝胶扫描分析表明 ,表达蛋白约占菌体蛋白总量的 2 0 .1% ;免疫印迹结果证明 ,表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 抗原区 原核表达 载体 基因片段 克隆测序 序列分析 氨基酸残基 重组质粒 包涵体 菌体蛋白
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猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原域在毕赤酵母中的表达
6
作者 徐学清 曹瑞兵 +3 位作者 蔡梅红 任雪枫 周斌 陈溥言 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第3期11-15,共5页
　对含猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因插入的重组酵母菌株进行诱导表达,通过对诱导时间、重组酵母菌株、菌体密度、培养液pH、甲醇剂量等培养条件与表达产量关系的分析,对重组蛋白的表达条件进行了优化。优化后的条件为:28～30℃,225r/mi... 　对含猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因插入的重组酵母菌株进行诱导表达,通过对诱导时间、重组酵母菌株、菌体密度、培养液pH、甲醇剂量等培养条件与表达产量关系的分析,对重组蛋白的表达条件进行了优化。优化后的条件为:28～30℃,225r/min振荡培养至BMGY中菌体OD600值为3.0～3.5时,将菌体转入相当于4倍体积BMGY,pH为6.0的BMMY培养基中培养72h,每24h加入甲醇至终浓度为总体积的0.5%～1.0%。在此优化条件下,重组蛋白的表达量可达275.38μg/mL,比较温度对重组蛋白降解率的影响后发现,培养物上清液应保存于-20℃。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 猪瘟病毒E2蛋白 A/D抗原区 表达条件 条件优化
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猪细小病毒GZ株NS1基因主要抗原区的克隆与序列分析 被引量：3
7
作者 刘建 汤德元 +7 位作者 李春燕 曾智勇 罗险峰 甘振磊 王凤 郝飞 姜德荣 王洪光 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第9期129-132,共4页
为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计... 为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计1对扩增PPVNS1基因主要抗原区的特异性引物，扩增、克隆和分析了分离毒株的NS1基因主要抗原区序列。结果表明：从送检的疑似猪细小病毒感染病料中成功分离出1株PPV贵州毒株，并将其命名为Gz株；扩增的NS1基因主要抗原区序列长度为1131bp；遗传进化分析表明，PPVGZ株与国内分离的GX株、N株、SR-1株、PPV2010株、s-1株和YL株的核苷酸序列同源性达到98．3％以上，推导的氨基酸序列的同源性为97．9％～100％，表明NS1基因序列比较保守，PPV的NS1基因主要抗原区基因克隆测序可以作为诊断猪细小病毒感染的依据。 展开更多
关键词 猪细小病毒GZ株 NS1基因 抗原区 克隆
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山西猪伪狂犬病毒gE基因主要抗原区的遗传变异分析 被引量：3
8
作者 孟帆 樊振华 +5 位作者 吴忻 姚敬明 王娟萍 米瑞娟 薛翼鹏 赵岳 《山西农业科学》 2017年第11期1844-1848,共5页
根据Gen Bank中收录的PRV Becker株的gE基因序列,设计了合成1对引物,对山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE部分基因进行了PCR扩增,并进行克隆与序列分析。经测序,山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE部分基因核苷酸序列长度为997 bp... 根据Gen Bank中收录的PRV Becker株的gE基因序列,设计了合成1对引物,对山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE部分基因进行了PCR扩增,并进行克隆与序列分析。经测序,山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE部分基因核苷酸序列长度为997 bp,编码322个氨基酸。测序后对山西流行株包含主要抗原表位区的gE基因核苷酸序列和推导出的氨基酸序列与18株PRV参考株进行了遗传变异分析,结果显示,山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE基因核苷酸序列与18株PRV参考株之间同源性为97.8%~100%,其中与YY株(湖南)、SC-1-2015株(四川)、HNXX2012株(湖北)、HN-DZ株(广东)及DL14-08株(长春)同源性最高,均为100%,与75V19株(比利时)同源性最低,为97.8%。山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE基因核苷酸序列推导的氨基酸序列与18株PRV参考株之间同源性为96.1%~100%,其中与YY株(湖南)、SC-1-2015株(四川)、HNXX2012株(湖北)、HN-DZ株(广东)及DL14-08株(长春)同源性最高,均为100%,与Rice(美国)同源性最低,为96.1%。山西PRV流行株包含主要抗原表位区的gE基因序列的遗传进化分析表明,山西PRV流行株属于2012年以来分离的PRV变异株群,与YY株和HNXX2012株亲缘关系较近,与欧洲和美洲分离株亲缘关系较远。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 GE基因 抗原区 遗传变异
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自身抗体检测与质量控制 被引量：2
9
作者 王兰兰 《医学检验与临床》 2004年第6期1-2,6,共3页
关键词 自身抗体检测 质量控制 自身免疫性肝炎 自身免疫病 特异性 实验室 阳性检出率 硝酸纤维膜 抗原区 性疾病
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猪瘟病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：12
10
作者 蔺辉星 周红 +1 位作者 童泽鑫 范红结 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期9-15,共7页
为建立快速、准确的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,根据Gen Bank上猪瘟兔化弱毒全基因序列,设计1对引物,扩增E2蛋白主要抗原区基因片段;然后,将其克隆入载体p ET-28a(+),采用大肠杆菌Rosetta(DE3)表达出含E2蛋白主要抗原区的重组蛋白... 为建立快速、准确的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,根据Gen Bank上猪瘟兔化弱毒全基因序列,设计1对引物,扩增E2蛋白主要抗原区基因片段;然后,将其克隆入载体p ET-28a(+),采用大肠杆菌Rosetta(DE3)表达出含E2蛋白主要抗原区的重组蛋白。以纯化的截短E2蛋白为包被抗原,优化间接ELISA反应条件,建立了检测CSFV血清抗体的间接ELISA。经过优化,确定最佳抗原包被浓度为8 g/m L,待检血清稀释倍数为1∶160,酶标二抗稀释倍数为1∶2000。该方法的阳性临界值为0.37,阴性临界值为0.32。批内变异系数在1.58%~3.33%之间,批间变异系数在2.67%~5.35%之间,说明该方法重复性良好。特异性检验中,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、传染性胃肠炎病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清均没有交叉反应。用该方法与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒对1 101份临床猪血清样品进行符合性检测,结果,该方法的敏感性、特异性、符合率分别为89.07%(603/677)、77.59%(329/424)和84.65%(932/1101)。上述结果表明,该方法可用于临床CSFV血清抗体的检测,为CSFV血清抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白主要抗原区 间接ELISA
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猪瘟病毒E_2基因主要抗原区的克隆及原核表达 被引量：5
11
作者 张永国 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 刘希成 张彦明 谢庆阁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期605-608,共4页
利用反转录PCR(RT PCR)和套式PCR(nestPolymeraseChainReaction ,nPCR)技术扩增出当前猪瘟流行毒(广西玉林株 ,GXYL)与中国猪瘟兔化弱毒 (C 株 )兔脾组织毒E2 基因的主要抗原区 ,将其克隆到表达载体pPROEX HTb中 ,获得重组质粒pPROEX G... 利用反转录PCR(RT PCR)和套式PCR(nestPolymeraseChainReaction ,nPCR)技术扩增出当前猪瘟流行毒(广西玉林株 ,GXYL)与中国猪瘟兔化弱毒 (C 株 )兔脾组织毒E2 基因的主要抗原区 ,将其克隆到表达载体pPROEX HTb中 ,获得重组质粒pPROEX GXYL和pPROEX C ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS PAGE检测表明 ,经重组质粒pPROEX GXYL和pPROEX C转化、诱导的受体菌能表达E2 基因主要抗原区蛋白 ,Western blot检测表明 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 主要抗原区 克隆 原核表达
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猪瘟病毒C株截短E2基因在大肠杆菌中表达及免疫原性初步检测 被引量：4
12
作者 郑仲华 李东升 +6 位作者 姚俊庸 常艳 勾红潮 刘文俊 赵明秋 毛晶丹 陈金顶 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期12-16,共5页
本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB... 本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Western blotting检测,可见在39ku处有单一条带,表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础,方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。 展开更多
关键词 猪瘟病毒C株 A D主要抗原区 截短表达
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狂犬病病毒N蛋白主要抗原区的表达及SPA-ELISA抗体检测方法的建立 被引量：4
13
作者 曾妮 宫苗苗 +2 位作者 郭李平 邱文英 李刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1149-1157,共9页
为有效监测免疫狂犬病疫苗后的抗体水平,以狂犬病病毒N蛋白的主要抗原表位所在区域N1蛋白为包被抗原,建立了SPA-ELISA抗体检测方法。用RT-PCR方法分别扩增出狂犬病病毒Flury LEP株N基因及其N1区域（1 000~1 353 bp）,将二者分别克隆至... 为有效监测免疫狂犬病疫苗后的抗体水平,以狂犬病病毒N蛋白的主要抗原表位所在区域N1蛋白为包被抗原,建立了SPA-ELISA抗体检测方法。用RT-PCR方法分别扩增出狂犬病病毒Flury LEP株N基因及其N1区域（1 000~1 353 bp）,将二者分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,并将重组的表达载体分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经1 mmol/L IPTG诱导后进行免疫印迹分析。结果表明,重组的RV N和RV N1均以包涵体形式表达。与表达全长RV N相比,RV N1的表达量显著高于前者,且该重组蛋白同样具有良好的反应原性。用纯化的重组RV N1作为诊断抗原建立了检测犬RV抗体的间接ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量是2 mg/L,血清的最佳稀释度为1∶100,Protein A-HRP的稀释度为1∶4 000。用建立的ELISA方法对102份临床血清样品进行检测,与商品化试剂盒相比,二者的符合率为94.1%。试验结果表明基于主要抗原表位所在区域N1蛋白的SPA-ELISA方法可有效用于犬RV抗体水平的检测,为检测RV免疫抗体的ELISA试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 主要抗原区 ProeteinA ELISA 抗体检测
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猪细小病毒NS1非结构蛋白和VP2结构蛋白主要抗原区间接ELISA方法的建立与联合应用 被引量：3
14
作者 刘建 汤德元 +6 位作者 李春燕 曾智勇 罗险峰 郝飞 姜德荣 王洪光 李达 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期41-45,共5页
为了建立猪细小病毒野毒抗体的NS1-i ELISA和猪群PPV免疫抗体水平的VP2-i ELISA方法,试验采用猪细小病毒NS1和VP2基因主要抗原区纯化后的原核表达重组蛋白作为包被抗原。结果表明:检测灵敏度为1∶12 800;批内、批间重复性试验变异系数... 为了建立猪细小病毒野毒抗体的NS1-i ELISA和猪群PPV免疫抗体水平的VP2-i ELISA方法,试验采用猪细小病毒NS1和VP2基因主要抗原区纯化后的原核表达重组蛋白作为包被抗原。结果表明:检测灵敏度为1∶12 800;批内、批间重复性试验变异系数均小于10%,NS1-i ELISA方法与HI试验的符合率为100%;VP2-i ELISA方法与HI试验的符合率为94.7%,且比HI试验具有更高的敏感性。用这两种方法同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪O型口蹄疫病毒(FMDV)6种常见猪病病毒的阳性血清结果均为阴性。说明所建立的NS1-i ELISA和VP2-i ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性。这两种方法可联合应于PPV野毒感染的快速诊断、流行病学调查、猪群免疫疫苗后PPV抗体水平的检测以及猪群PPV的净化。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1非结构蛋白 VP2结构蛋白 主要抗原区 间接ELISA
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猪瘟病毒囊膜糖蛋白E^(rns)的表位分析及其单克隆抗体轻链可变区cDNA的测序 被引量：1
15
作者 张富强 李志华 张念祖 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第8期8-16,共9页
应用抗CSFVAlfortT櫣ｂｉｎｇｅｎ毒株Ｅｒｎｓ结构蛋白的ｂ4 2 2、2 4 / 16单克隆抗体 ,筛选了噬菌体展示的 12肽随机肽库 ,进行了Erns结构蛋白表位分析。研究发现 ,b4 2 2、2 4 / 16单克隆抗体识别的表 (拟 )位基序分别为DKNR(Q)G、... 应用抗CSFVAlfortT櫣ｂｉｎｇｅｎ毒株Ｅｒｎｓ结构蛋白的ｂ4 2 2、2 4 / 16单克隆抗体 ,筛选了噬菌体展示的 12肽随机肽库 ,进行了Erns结构蛋白表位分析。研究发现 ,b4 2 2、2 4 / 16单克隆抗体识别的表 (拟 )位基序分别为DKNR(Q)G、A(T)CxYxKN ,定位于Erns结构蛋白的 384～ 386及 32 2～32 3位、380～ 386位氨基酸区域。二者识别的表 (拟 )位基序存在共有序列KN ,针对的是Erns蛋白中的相似抗原区 ,但其拟位的侧翼序列及ELISA、免疫印迹分析结果均存在差异。自杂交瘤细胞中提取总RNA ,对单克隆抗体轻链可变区cDNA进行了测序。结果证实 ,b4 2 2、2 4 / 16单克隆抗体虽然来源于同一批次融合的杂交瘤细胞系 ,识别相似抗原区 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 单克隆抗体 表位 CDNA 相似抗原区 基因序列
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DHAV-3 VP1蛋白优势抗原区的初步鉴定 被引量：2
16
作者 崔嘉琦 张雪莲 +5 位作者 刘悦 戚海惠 张忠 张桂红 王君伟 马波 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期53-57,共5页
为了研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)VP1蛋白的优势抗原区,试验根据DHAV-3 VP1基因序列设计4对特异性表达引物,用PCR获得VP1-a^d基因片段,并在p ET-30a(+)/Rosetta(DE3)p LysS系统中进行原核表达;经IPTG诱导重组蛋白获得表达,用Ni-NTA柱亲和... 为了研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)VP1蛋白的优势抗原区,试验根据DHAV-3 VP1基因序列设计4对特异性表达引物,用PCR获得VP1-a^d基因片段,并在p ET-30a(+)/Rosetta(DE3)p LysS系统中进行原核表达;经IPTG诱导重组蛋白获得表达,用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白;同时以DHAV-3病毒为免疫原制备鼠抗DHAV-3多克隆抗体,通过I-ELISA和Westernblot初步鉴定。结果表明:p ET-30a-VP1-a、p ET-30a-VP1-b、p ET-30a-VP1-c和p ET-30a-VP1-d与鼠抗DHAV-3多克隆抗体都发生反应,抗原量相同的情况下VP1-c和VP1-d段显色较VP1-a和VP1-b深,说明这两段反应性相对较强;4种截短蛋白与鸭抗DHAV-3阳性血清进行反应,只有p ET-30a-VP1-c显色。说明VP1-c免疫原性较强,DHAV-3 VP1蛋白的90~175 aa为其优势抗原区。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒3型(DHAV-3) VPL 表达 多克隆抗体 优势抗原区
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兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定 被引量：2
17
作者 孟春春 程英杰 +5 位作者 李传峰 王玢瑸 缪秋红 陈宗艳 吴润 刘光清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期239-242,共4页
为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB... 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。 展开更多
关键词 VP60优势抗原区 Th细胞表位 原核表达 免疫效力测定
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基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立 被引量：1
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作者 李宁 孟春春 +8 位作者 梁瑞英 李传峰 陈宗艳 缪秋红 毕庄莉 朱英奇 郭慧敏 刘光清 王桂军 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期1-7,共7页
为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染... 为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB）,重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60 优势抗原区 间接ELISA
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噬菌体显示抗乳腺癌单链抗体的基因克隆和筛选 被引量：1
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作者 王德发 刘成虎 +2 位作者 乔欢 张园 牛瑞芳 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期88-91,共4页
克隆和连接乳腺癌杂交瘤单克隆抗体的轻、重链可变区基因 ,构建该单链抗体的噬菌体显示系统 ,经严格的相关肿瘤细胞株的固相细胞正负筛选和多步液相结合 -洗脱细胞筛选 ,得到特异性高、亲和力强的单链抗体基因 ,用于进一步构建重组免疫... 克隆和连接乳腺癌杂交瘤单克隆抗体的轻、重链可变区基因 ,构建该单链抗体的噬菌体显示系统 ,经严格的相关肿瘤细胞株的固相细胞正负筛选和多步液相结合 -洗脱细胞筛选 ,得到特异性高、亲和力强的单链抗体基因 ,用于进一步构建重组免疫毒素 ,为临床乳腺癌和生物靶向治疗奠定基础 . 展开更多
关键词 抗乳腺癌单链抗体 噬菌体展示 细胞筛选 抗原区补区序列分析
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犬冠状病毒S蛋白主要抗原区基因片断的表达及免疫原性 被引量：1
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作者 乔军 夏咸柱 +4 位作者 胡桂学 杨松涛 赵忠鹏 谢之景 黄耕 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期616-619,共4页
应用 Pichia pastoris 酵母表达了犬冠状病毒大熊猫野毒株(CCV DXMV) S 蛋白主要抗原区基因片断。用特异性引物扩增出 CCV DXMV 株 S1 基因片断,并将其克隆到 pGEM-T 载体中得到 pTS1。用 Kpn I 和 NotI 双酶切pTS1 回收目的基因 S1 定... 应用 Pichia pastoris 酵母表达了犬冠状病毒大熊猫野毒株(CCV DXMV) S 蛋白主要抗原区基因片断。用特异性引物扩增出 CCV DXMV 株 S1 基因片断,并将其克隆到 pGEM-T 载体中得到 pTS1。用 Kpn I 和 NotI 双酶切pTS1 回收目的基因 S1 定向克隆到 pPICZαA 中,构建出重组质粒 pPICZαAS1。将 pPICZαAS1 用 Sac I 内切酶线性化后,电转化感受态 GS115 酵母细胞,用 PCR 法筛选阳性重组子。用 1%的甲醇诱导重组酵母菌,取培养物上清进行重组蛋白的检测。结果重组酵母菌培养物上清用 SDS-PAGE 电泳可检测到相对分子量为 106kDa 大小的重组蛋白, Western-blot 证实该重组蛋白可以与 CCV 多克隆抗体发生特异性血清学反应。凝胶薄层扫描分析表明,3 株重组酵母菌在 1%甲醇诱导 144h 后,重组蛋白 S1 表达量约占培养物上清总蛋白量的 6.6-8.6%左右。用重组蛋白 S1 免疫 BALB/C 小鼠 3 次后,小鼠血清 CCV 中和抗体可达 1:8-1:16,表明重组 S1 蛋白具有一定的免疫原性。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 S蛋白主要抗原区 表达 免疫原性
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