猪链球菌2型sortase蛋白缺失株的构建及其毒力分析

1

作者 董亚青 王长军 +2 位作者 郑峰 潘秀珍 唐家琪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期17-20,26,共5页

为了研究对猪链球菌2型致病力的影响,试验构建srtA基因缺失株,体外观察突变株05ZYH33△srtA的基本生物学性状,并以猪为动物模型检测突变株05ZYH33ΔsrtA的毒力。结果表明:成功构建了srtA基因缺失株,突变株生物学性状无明显改变,毒力相... 为了研究对猪链球菌2型致病力的影响,试验构建srtA基因缺失株,体外观察突变株05ZYH33△srtA的基本生物学性状,并以猪为动物模型检测突变株05ZYH33ΔsrtA的毒力。结果表明:成功构建了srtA基因缺失株,突变株生物学性状无明显改变,毒力相对于亲本株有所下降。说明了srtA基因对菌株的生物学性状无明显影响,可能是猪链球菌2型潜在毒力因子。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 sortase蛋白 srta 基因敲除

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马腺疫链球菌SrtA的表达及其免疫原性评价

2

作者 汪丽 马陈 +2 位作者 吕芬芬 蒲小峰 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2019年第2期121-127,共7页

旨在表达马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)的SrtA蛋白并分析其免疫效果。以该菌基因组为模板,用PCR方法扩增SrtA基因,构建重组质粒pET-28a-SrtA,诱导表达SrtA,并以纯化蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体水平效价及... 旨在表达马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)的SrtA蛋白并分析其免疫效果。以该菌基因组为模板,用PCR方法扩增SrtA基因,构建重组质粒pET-28a-SrtA,诱导表达SrtA,并以纯化蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体水平效价及抗体亚型。首次免疫后第45天,对免疫小鼠用S.equi攻毒,测定免疫保护力、菌体载量和脾细胞表面CD4^+T和CD8^+T分子的表达,并对脏器进行病理组织学观察。结果表明,成功表达了SrtA蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白分子量为27 kDa。初次免疫45 d后,小鼠血清抗体效价达1∶218 700,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主;脾淋巴细胞中CD4^+T和CD8^+T细胞表达量升高;攻毒保护率可达75%;SrtA免疫可降低攻毒小鼠肺、脾、肝、肾组织的荷菌量。SrtA免疫可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 马腺疫链球菌 srta 表达与纯化 免疫效果

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srtA基因缺失对LM环境应激及生物膜生成能力的影响

3

作者 李杰 马勋 +2 位作者 徐华荣 高峰 马永福 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第5期-,共6页

为了解srtA对单增李斯特菌(LM)环境应激及生物膜生成的影响,本实验比较了缺失株LM90SB2-△srtA与野生株LM90SB2在不同温度、pH、渗透压、H_2O_2条件下的生长情况、药物敏感性及生物膜生成能力的差异。结果表明:缺失株在致死酸(pH 3.5的... 为了解srtA对单增李斯特菌(LM)环境应激及生物膜生成的影响,本实验比较了缺失株LM90SB2-△srtA与野生株LM90SB2在不同温度、pH、渗透压、H_2O_2条件下的生长情况、药物敏感性及生物膜生成能力的差异。结果表明:缺失株在致死酸(pH 3.5的盐酸和乳酸)条件下的存活率(55%和54%)低于野生株在致死酸(pH 3.5的盐酸和乳酸)条件下的存活率(71%和75%),统计学处理结果显示其差异显著;缺失株在培养12、24 h后生物膜交联程度和着色区域厚度低于野生株。但在不同温度、pH、渗透压、H_2O_2条件下的生长以及药物敏感性上均无明显差异。提示srtA分选的表面蛋白可能参与致死酸度条件下的存活和生物膜的密集度。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 srta 耐药性 应激环境 生物膜

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异牡荆苷作为sortase A抑制剂对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的保护作用 被引量：2

4

作者 田莉莉 母丹 +4 位作者 王莉 王铁东 王大成 高丰 王琳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1339-1346,共8页

sortase A(SrtA)是一种重要的毒力决定因子,负责将多种毒力相关蛋白锚定在金黄色葡萄球菌(S.aureus)的细胞表面,在其致病过程中发挥重要作用,是开发抗金黄色葡萄球菌毒力药物的理想靶点。本研究首先通过荧光共振能量转移试验发现异牡荆... sortase A(SrtA)是一种重要的毒力决定因子,负责将多种毒力相关蛋白锚定在金黄色葡萄球菌(S.aureus)的细胞表面,在其致病过程中发挥重要作用,是开发抗金黄色葡萄球菌毒力药物的理想靶点。本研究首先通过荧光共振能量转移试验发现异牡荆苷是SrtA的可逆抑制剂;又利用细胞侵袭试验证明异牡荆苷能够显著抑制金黄色葡萄球菌对A549细胞的内化作用;最后考察了异牡荆苷对小鼠肺炎的保护作用,发现异牡荆苷能明显减轻金黄色葡萄球菌感染性肺炎小鼠肺组织的病理损伤和炎症反应,减少肺部载菌量,显著提高小鼠存活率。以上结果表明,异牡荆苷能够通过抑制毒力因子SrtA对金黄色葡萄球菌引起的小鼠肺炎起到保护作用,是一种很有前景的抗金黄色葡萄球菌毒力活性化合物,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染药物的先导化合物。 展开更多

关键词 异牡荆苷 金黄色葡萄球菌 sortase A(srta) 小鼠肺炎

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变异链球菌转肽酶A基因型与乳牙高龋的相关性 被引量：2

5

作者 于丽霞 庄沛林 林焕彩 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2016年第4期238-243,共6页

目的在控制乳牙龋危险指标的前提下,探讨乳牙高龋与变异链球菌(简称变链菌)转肽酶A(srt A)基因型的关系。方法采用ABI Variant Reporter软件对121株分离于高龋儿童的变链菌和121株分离于无龋儿童的变链菌srt A基因测序结果进行基因型分... 目的在控制乳牙龋危险指标的前提下,探讨乳牙高龋与变异链球菌(简称变链菌)转肽酶A(srt A)基因型的关系。方法采用ABI Variant Reporter软件对121株分离于高龋儿童的变链菌和121株分离于无龋儿童的变链菌srt A基因测序结果进行基因型分析。采用单因素分析方法分析srt A基因型数量、srt A各基因型以及社会、行为变量在两组中的频率分布情况,采用多因素Logistic回归方法控制混杂因素,分析变链菌srt A基因型与乳牙高龋的相关性。结果共发现15种基因型,其中无龋组中9种,高龋组中11种。3A基因型在无龋组中的突变率高于高龋组(P=0.033),3E基因型在高龋组中的突变率高于无龋组(P=0.037)。多因素分析结果表明:高月龄、低出生体重、过长的母乳喂养时间、高固体糖摄入频率、较高的可视菌斑百分率、较少的srt A 3A基因型与乳牙高龋相关。结论在有变链菌定植的儿童中,变链菌srt A 3A基因型与乳牙龋易感性相关。此外,月龄、出生体重、母乳持续喂养时间、固体糖摄入频率、可视菌斑等因素也参与早期儿童龋的发生、发展。 展开更多

关键词 龋病 变异链球菌 转肽酶A 基因型

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SortaseA酶抑制剂的研究进展

6

作者 王敬雯 陈坤 姜颖 《广东医学院学报》 2012年第2期208-210,共3页

Sortase A酶是一种介导革兰氏阳性细菌细胞壁与表面蛋白共价结合的蛋白酶。近年来研究表明SortaseA酶在变形链球菌黏附于牙面的过程中起到关键作用,而口腔变形链球菌是主要致龋菌之一,通过对Sortase A酶的研究有望开辟新型抗菌药物的筛... Sortase A酶是一种介导革兰氏阳性细菌细胞壁与表面蛋白共价结合的蛋白酶。近年来研究表明SortaseA酶在变形链球菌黏附于牙面的过程中起到关键作用,而口腔变形链球菌是主要致龋菌之一,通过对Sortase A酶的研究有望开辟新型抗菌药物的筛选途径和新的治疗方法。目前,有关用SortaseA酶作为靶蛋白的研究主要集中在抑制剂的方面,尤其集中在对天然产物及其来源衍生物的研究,本文就该方面作一综述。 展开更多

关键词 srta 抑制剂 变形链球菌 天然产物 综述文献

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Sortase A酶突变体的原核表达、纯化及活性测定（英文）

7

作者 张庆彬 黄宗庆 +2 位作者 路建光 赵文杰 冯军 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期37-47,共11页

本研究采用pET28a载体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶A(sortase A,SrtA)截短体SrtA?N25以及突变体m5SrtA?N59、m9SrtA?N59进行了原核发酵表达,并通过镍柱亲和色谱、阳离子交换色谱进行蛋白纯化。随后,通过荧光共振... 本研究采用pET28a载体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶A(sortase A,SrtA)截短体SrtA?N25以及突变体m5SrtA?N59、m9SrtA?N59进行了原核发酵表达,并通过镍柱亲和色谱、阳离子交换色谱进行蛋白纯化。随后,通过荧光共振能量转移试验比较了3种酶的催化活性,测定了酶反应动力学常数、筛选了最适反应条件,并进一步探究了不同生化试剂对SrtA酶学活性的影响。结果显示,SrtA?N25、m5SrtA?N59、m9SrtA?N59在大肠埃希菌中均能以可溶形式高效表达,且纯化后得到的高纯度SrtA酶均具有生物学活性。相较于SrtA?N25,m5SrtA?N59、m9SrtA?N59活性分别提高了约68、5 544倍,尤其是m9SrtA?N59的催化活性大大提高。m9SrtA?N59的最适反应温度为30~37℃,最适反应pH值为6.0~7.0,反应体系中加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)、二硫苏糖醇(DTT)等还原剂有助于增强SrtA酶催化活性。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 转肽酶A 酶学活性 纯化

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SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定

8

作者 张秀娟 于海威 +2 位作者 刘栋琦 赵晋彤 熊向华 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第10期83-88,共6页

按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srt A基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni^(2+)柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LH_N-LPETG和G-H_C蛋白检测SrtA蛋白活性。菌液PCR鉴定和测定序... 按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srt A基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni^(2+)柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LH_N-LPETG和G-H_C蛋白检测SrtA蛋白活性。菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni^(2+)柱亲和层析后得到纯度大于95%的SrtA蛋白,LH_N-LPETG和G-H_C蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性。 展开更多

关键词 srta 密码子优化 酶连接法 A型肉毒毒素

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单核细胞增生性李斯特菌srtA基因的克隆与原核表达 被引量：12

9

作者 吴学林 曹树珠 马勋 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第2期196-200,共5页

为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌(简称LM90SB2)srt A基因的特异性及其在原核表达质粒p ET32a中的表达,本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srt A基因,测序后并进行序列比对分析,将其克隆到原核表达质粒p ET32a中... 为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌(简称LM90SB2)srt A基因的特异性及其在原核表达质粒p ET32a中的表达,本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srt A基因,测序后并进行序列比对分析,将其克隆到原核表达质粒p ET32a中构成重组表达质粒p ET32a-srt A。重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导使其表达,SDS-PAGE电泳检测,同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明:Srt A蛋白在BL21(DE3)中大量表达,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测分析其为1个分子量为47 ku的融合蛋白,与预期的大小相符合,成功的构建了重组质粒p ET32a-srt A,并使其在BL21(DE3)中获得了高效的表达。本研究为下一步研究其对李斯特菌致病性的影响及制备单克隆抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 pET32a srta基因 原核表达

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分选酶A在pET32a(+)原核表达载体中的表达和鉴定 被引量：10

10

作者 朱芳 邓思 罗立新 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期218-222,共5页

旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定。以合有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA_(△N24)和SrtA_(△N59)基因,经过BamHⅠ、XhoⅠ酶切,克隆入表... 旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定。以合有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA_(△N24)和SrtA_(△N59)基因,经过BamHⅠ、XhoⅠ酶切,克隆入表达载体pET32a(+)中,构建重组载体pET32a-SrtA_(△N24)及pET32a-SrtA_(△N59),并转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物分别进行分析和鉴定。然后对重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达条件进行了优化。结果显示重组载体pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59)分别表达出相对分子量为约42 kD和37 kD的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting检测显示其分子量与预期的大小相符合。成功构建了重组质粒pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59),并且在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效融合表达。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌pET32a.srta△N2A pET32a-srta△N59 大肠杆菌原核表达

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单增李斯特菌srtA基因缺失株的构建及srtA基因对其毒力的影响研究 被引量：5

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作者 张奇文 凌晨 +2 位作者 吴学林 马勋 薄新文 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期23-31,共9页

为了研究srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2毒力的影响,本研究利用同源重组技术构建了LM90SB2 srtA 基因缺失株LM90SB2-ΔsrtA,比较分析了亲本株LM90SB2与缺失株LM90SB2-ΔsrtA对MBMEC、HBMEC、RAW264.7、SIEC 4种细胞系的粘附、侵袭、胞... 为了研究srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2毒力的影响,本研究利用同源重组技术构建了LM90SB2 srtA 基因缺失株LM90SB2-ΔsrtA,比较分析了亲本株LM90SB2与缺失株LM90SB2-ΔsrtA对MBMEC、HBMEC、RAW264.7、SIEC 4种细胞系的粘附、侵袭、胞内增值能力及LM90SB2和LM90SB2-ΔsrtA 感染小鼠后,小鼠的LD50及肝脏、脾脏、脑载菌量变化差异。结果显示,本研究成功构建了srtA 基因缺失株;与亲本株LM90SB2比较,缺失株LM90SB2-ΔsrtA 对RAW264.7和SIEC的粘附率、侵袭率及胞内细菌数量均下降,且差异具有显著统计学意义(p <0.05);小鼠 LD50降低了21.38倍,肝脏、脾脏载菌量降低,差异具有显著统计学意义(p <0.05)。本研究结果表明,srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2的毒力具有关键作用,参与粘附、侵袭BMEC,该研究结果为进一步阐明单增李斯特菌毒力因子的致病机制提供理论依据。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 srta基因 毒力 粘附 侵袭

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SrtA基因在金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎致病过程中的作用研究 被引量：4

12

作者 郭健 严秋芳 沈利华 《临床和实验医学杂志》 2017年第10期950-954,共5页

目的研究分选酶A基因(SrtA)在金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎致病过程中的作用。方法金黄色葡萄球菌野生型菌株及SrtA基因缺失突变型菌株分别通过乳导管注射到相应组BALB/c小鼠乳腺中,构建小鼠乳腺炎模型。对照组小鼠注射等量的无菌生... 目的研究分选酶A基因(SrtA)在金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎致病过程中的作用。方法金黄色葡萄球菌野生型菌株及SrtA基因缺失突变型菌株分别通过乳导管注射到相应组BALB/c小鼠乳腺中,构建小鼠乳腺炎模型。对照组小鼠注射等量的无菌生理盐水。用TUNEL法检测各组小鼠乳腺细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测乳腺组织中炎症细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)和IL-10的含量,Western blot检测乳腺组织中JAK-STAT信号通路p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达和核因子(NF-κB)信号通路p-IκBα、p-p65蛋白的表达。结果与对照组相比,野生型菌株处理组乳腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01),炎症细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10含量显著增加(P<0.01),乳腺组织中p-JAK2、p-STAT3、p-IκBα、p-p65蛋白表达显著上调(P<0.01)。与野生型菌株处理组相比,突变型菌株处理组乳腺细胞凋亡率显著降低(P<0.01),炎症细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10含量显著减少(P<0.01),乳腺组织中p-JAK2、p-STAT3、p-IκBα、p-p65蛋白表达显著下调(P<0.01)。突变型菌株处理组与对照组相比,各项检测无显著性差异(P>0.05)。结论金黄色葡萄球菌SrtA基因的缺失突变可能通过抑制JAK-STAT和NF-κB信号通路的激活,从而减少乳腺细胞的凋亡和炎症细胞因子的释放,最终减弱金黄色葡萄球菌对乳腺炎的致病作用。 展开更多

关键词 小鼠 乳腺炎 金黄色葡萄球菌 srta基因 JAK-STAT NF-ΚB

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新型硬质合金数控刀具材料的铸造工艺研究 被引量：4

13

作者 陈子银 杨海峰 黄美英 《热加工工艺》 北大核心 2020年第13期73-76,共4页

采用不同工艺参数进行了YG20-SrTa新型硬质合金数控刀具材料的离心铸造试验,并进行了300℃×96 h高温氧化和300℃高温磨损试验。结果表明,随浇注温度从1500℃增至1600℃或旋转速度从200 r/min增至600 r/min,合金材料的高温氧化性能... 采用不同工艺参数进行了YG20-SrTa新型硬质合金数控刀具材料的离心铸造试验,并进行了300℃×96 h高温氧化和300℃高温磨损试验。结果表明,随浇注温度从1500℃增至1600℃或旋转速度从200 r/min增至600 r/min,合金材料的高温氧化性能及其磨损性能都先提高后下降。与浇注温度1500℃相比,合金材料在1550℃进行浇注浇注时高温氧化单位面积质量增重减小28.97%,高温磨损体积减小45.76%。与200 r/min旋转速度相比,旋转速度400r/min时合金材料高温氧化单位面积质量增重减小25.12%,高温磨损体积减小37.25%。YG20-SrTa新型硬质合金数控刀具材料离心铸造时浇注温度优选1550℃、旋转速度优选400 r/min。 展开更多

关键词 YG20-srta新型硬质合金 数控刀具材料 铸造工艺 离心铸造

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CRISPR/Cas9构建srtA基因敲除的金黄色葡萄球菌 被引量：2

14

作者 蒋成辉 曾巧英 +3 位作者 王萌 潘阳阳 刘旭明 尚天甜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期253-265,共13页

利用CRISPR/Cas9技术构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300的srtA基因缺失株及回补株,分析其对菌株毒力的影响。设计3对srtA基因sgRNA,以pCasSA为载体,构建pCasSA-sgRNA质粒。经缺陷型金黄色葡萄球菌RN4220菌株修饰后,转入USA300中,检测p... 利用CRISPR/Cas9技术构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300的srtA基因缺失株及回补株,分析其对菌株毒力的影响。设计3对srtA基因sgRNA,以pCasSA为载体,构建pCasSA-sgRNA质粒。经缺陷型金黄色葡萄球菌RN4220菌株修饰后,转入USA300中,检测pCasSA-sgRNA质粒的切割效率。扩增并融合srtA基因左右同源臂并将其插入pCasSA-sgRNA质粒中,构建敲除质粒pCasSA-sgRNA-srtA。敲除质粒经修饰,转入USA300中,筛选并鉴定获得srtA基因缺失株。比较分析srtA基因缺失后对USA300菌株生长,小鼠存活率、器官载菌量及其肾脏组织病理学变化差异。同时,以pLI50质粒为载体,构建回补质粒pLI50-srtA及回补株,验证不同菌株表型是否存在差异。经氯霉素筛选,获得2个基因缺失株。与野生型菌株相比,srtA基因缺失后不影响USA300菌株的生长,但显著降低感染小鼠的死亡率,心脏、肾脏载菌量及肾脏组织病变程度。经srtA基因回补后其功能得以恢复。成功建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300菌株srtA基因缺失株和回补株基因编辑方法。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 金黄色葡萄球菌 srta基因 基因敲除 基因回补

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单增李斯特菌srtA基因敲除菌株的构建及其生物学特性 被引量：2

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作者 李森 热依汉古丽.麦麦提力 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期113-117,共5页

单核细胞增生性李斯特菌是常见的食源性致病菌,其细胞壁上存在的表面蛋白与其致病性和细菌菌膜的形成密切相关,而srt A基因是介导表面蛋白膜表面定位的关键因子,通过识别特定的蛋白序列将表面蛋白共价结合在细胞壁上,也是单增李斯特菌... 单核细胞增生性李斯特菌是常见的食源性致病菌,其细胞壁上存在的表面蛋白与其致病性和细菌菌膜的形成密切相关,而srt A基因是介导表面蛋白膜表面定位的关键因子,通过识别特定的蛋白序列将表面蛋白共价结合在细胞壁上,也是单增李斯特菌的重要毒力基因。为深入研究srtA的功能及其对细菌毒力的调控,本研究通过同源重组技术敲除了单增李斯特菌中的srt A基因,并对基因敲除菌株的生物学特性进行了初步研究。通过生长曲线的测定,发现srtA基因敲除株的生长活性低于野生型菌株。进一步利用该菌株对星形胶质细胞系U251的侵袭实验发现,srtA基因敲除菌株的侵袭效率低于野生菌株,提示srtA基因在调控单增李斯特菌的侵袭能力方面发挥重要作用。本研究可为单增李斯特菌毒力基因调控和细菌菌膜的研究提供理论依据。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 srta基因 同源重组 生长曲线 侵袭

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利用框内缺失法构建变异链球菌srtA基因缺失株 被引量：2

16

作者 陈璇 刘海霞 +1 位作者 彭显 邹玲 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期588-592,共5页

目的利用框内缺失法,通过IFDC2基因盒及融合聚合酶链反应(PCR)、同源重组技术构建变异链球菌UA159菌株srt A基因缺失株。方法 PCR扩增变异链球菌UA159菌株srt A基因上下游同源片段及IFDC2基因盒,将这些片段连接、转化入UA159,替换srt A... 目的利用框内缺失法,通过IFDC2基因盒及融合聚合酶链反应(PCR)、同源重组技术构建变异链球菌UA159菌株srt A基因缺失株。方法 PCR扩增变异链球菌UA159菌株srt A基因上下游同源片段及IFDC2基因盒,将这些片段连接、转化入UA159,替换srt A基因同源片段,筛选、鉴定红霉素抗性克隆;PCR扩增、连接UA159 srt A基因上下游同源片段,将连接片段转化入前述红霉素抗性克隆中替换IFDC2同源片段,筛选、鉴定抗苯丙氨酸类似物p-chloro-phenylalanine(p-Cl-Phe)克隆。结果 PCR、琼脂糖凝胶电泳及DNA测序结果均证明srt A基因编码区被完全删除,上下游片段无缝连接,成功构建UA159 srt A基因缺失株。结论本研究成功构建了无标记的变异链球菌UA159 srt A基因缺失株,为进一步研究该基因在生物膜中的作用及其调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 变异链球菌 srta基因缺失 框内缺失法

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srtA基因调节变异链球菌氧化耐受的机制研究 被引量：1

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作者 何远丽 任彪 +1 位作者 陈璇 邹玲 《口腔疾病防治》 2020年第5期292-297,共6页

目的探究srtA基因对变异链球菌氧化耐受能力的调节作用并初步探讨其机制。方法通过氧化耐受实验,对比变异链球菌UA159菌株及其srtA基因缺失株及回复株在浮游及生物膜状态下的氧化耐受能力差异;用Illumina Hiseq 4000测序平台对UA159菌... 目的探究srtA基因对变异链球菌氧化耐受能力的调节作用并初步探讨其机制。方法通过氧化耐受实验,对比变异链球菌UA159菌株及其srtA基因缺失株及回复株在浮游及生物膜状态下的氧化耐受能力差异;用Illumina Hiseq 4000测序平台对UA159菌株及其srtA基因缺失株在对数中期及稳定期的基因转录组测序,比较其氧化耐受相关基因的转录表达差异,进一步探讨srtA基因缺失后变异链球菌氧化耐受能力的变化与其基因转录组的内在联系;并采用qPCR来验证相关基因表达水平的变化。结果srtA基因缺失后变异链球菌在浮游状态、生物膜状态的氧化耐受能力均较UA159降低(P<0.05)。分析33个氧化耐受相关基因在转录组测序结果中的表达水平发现,过氧化物合成与代谢相关酶类基因无明显变化,但稳定期样本中双组份信号转导系统编码基因lrgA、lrgB、lytT表达下调2.2~2.4倍;qPCR结果进一步表明对数中期、稳定期的浮游菌lrgB、lytT表达下调11.01~53.51倍,且另一双组分系统编码基因vicK表达下调6.57~10.88倍(P<0.001)。结论srtA基因缺失后,变异链球菌过氧化物合成及代谢酶类编码基因表达水平不变,但氧化耐受相关转录调节因子表达水平下降,进而减弱变异链球菌的氧化耐受能力。 展开更多

关键词 变异链球菌 龋病 生物膜 分选酶A srta基因 氧化应激 氧化耐受 活性氧 转录组测序 双组份信号转导系统

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分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定 被引量：4

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作者 邓思 罗立新 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期121-125,共5页

构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A(SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性。以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrtA△N59基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1... 构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A(SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性。以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrtA△N59基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-SrtA△N59,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析分离纯化得到SrtA△N59,与展示在酵母表面的底物序列QALPETGEE-linker-EGFP作用,产生游离的EGFP,通过酶标仪检测EGFP荧光强度确定分选酶的活性。结果显示,重组表达载体pGEX-SrtA△N59经IPTG诱导,表达出相对分子质量约为42 kD的融合蛋白,SDS-PAGE分析,该融合蛋白是以可溶形式表达。分离纯化得到的分选酶与底物作用,其荧光强度由568.66±12.14增加至921.43±13.02。以上结果表明,成功构建了重组表达载体pGEX-SrtA△N59,并在大肠杆菌中获得了可溶表达的有活性的分选酶。 展开更多

关键词 分选酶A GST融合表达 纯化 底物 活性测定

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柠檬酸络合法合成H2SrTa2O7材料及其光催化还原CO2活性（英文）

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作者 卫少杰 陈威 +1 位作者 高丽 毛立群 《化学研究》 CAS 2019年第4期378-383,共6页

利用柠檬酸络合法及离子交换合成质子化钙钛矿H2SrTa2O7(HST)光催化材料. HST的比表面积和结晶度由焙烧温度控制调节.结果表明,当焙烧温度为1000℃时, HST同时具有较高的结晶度和大的比表面积从而具有最高的活性, CO的最大生产速率为0.2... 利用柠檬酸络合法及离子交换合成质子化钙钛矿H2SrTa2O7(HST)光催化材料. HST的比表面积和结晶度由焙烧温度控制调节.结果表明,当焙烧温度为1000℃时, HST同时具有较高的结晶度和大的比表面积从而具有最高的活性, CO的最大生产速率为0.25μmol·g^-1·h^-1.另外,相对于H2的析出, CO的产生更依赖于大的比表面积.该工作对制备高活性的还原CO2光催化剂材料具有一定的指导意义. 展开更多

关键词 光催化剂 H2srta2O7 CO2还原 比表面积 结晶度

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2型猪链球菌SrtA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

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作者 丁晨曦 艾乐乐 +5 位作者 龚秀芳 胡丹 陈家锋 郭晓璐 潘秀珍 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1144-1147,共4页

目的制备并鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)强毒株05ZYH33分选酶A(Sortase A,SrtA)的单克隆抗体。方法 PCR扩增2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组SrtA全长,构建表达质粒pETDuet-1/SrtA,导入E.coli BL21(DE3)感受... 目的制备并鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)强毒株05ZYH33分选酶A(Sortase A,SrtA)的单克隆抗体。方法 PCR扩增2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组SrtA全长,构建表达质粒pETDuet-1/SrtA,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达SrtA蛋白,柱纯化后免疫BALB/c雌鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,收集培养上清并制备小鼠腹水,采用Western blot单克隆抗体特异性,ELISA检测单抗效价。结果筛选到1株能持久、稳定分泌抗SrtA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,标记为1F5,抗体亚型为IgM型/κ链;Western blot显示该抗体能识别SrtA蛋白。结论成功制备分泌抗SrtA蛋白的杂交瘤细胞株,制备的单抗效价高,为研究2型猪链球菌感染致病过程中SrtA的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 SORTASE A 原核表达 单克隆抗体

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