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马铃薯X病毒湖南分离物的鉴定与分组研究 被引量：3
1
作者 杜志游 陈集双 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期119-123,共5页
从湖南石门采集表现重花叶症状的马铃薯叶片中分离纯化到一株线状病毒HN021.经双链RNA(ds-RNA)抽提、寄主反应测定、病毒粒子和内含体的形状观察, 初步确定该病毒为马铃薯X病毒 (Potato virus X).以ds-RNA作为模板,用相应引物对HN021分... 从湖南石门采集表现重花叶症状的马铃薯叶片中分离纯化到一株线状病毒HN021.经双链RNA(ds-RNA)抽提、寄主反应测定、病毒粒子和内含体的形状观察, 初步确定该病毒为马铃薯X病毒 (Potato virus X).以ds-RNA作为模板,用相应引物对HN021分离物的ORF4-UTR-ORF5片段进行RT-PCR,得到1kb左右的双链cDNA片段.对该片段进行克隆和测序,并将测序所得的核苷酸序列与Genbank登录的11株不同分离物的相应片段的核苷酸序列进行同源性比较和分析.结果表明,HN021与分离自南美洲的三株分离物(COAT,KPA和HB)的同源性为78.4%~79.4%,与其它8株(分离自亚洲、欧洲、大洋州和北美洲)分离物的同源性为96.4%-97.8%.从氨基酸水平比较,HN021与COAT,KPA和HB三者CP和8kDa蛋白氨基酸序列同源性分别为86.5%~89.0%和74.3%~75.7%,相应地与其它8株分离物的同源性分别为97.1%-98.7% 和97.1%-100%.序列分析的结果证实了HN021分离物为马铃薯X病毒,同时表明PVX明显存在两个组(组Ⅰ和组Ⅱ),HN021和其它来自亚洲、欧洲、大洋州、北美洲分离物的组II,3个南美洲分离物属于组I. 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 湖南分离物 鉴定 分组 外壳蛋白 8kda蛋白
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几种日本血吸虫新基因的表达特性分析 被引量：2
2
作者 彭鸿娟 陈晓光 +3 位作者 李华 周晓红 沈树满 王珣章 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期46-49,共4页
目的　对从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中筛选出的 3种新基因 ,腺苷酸激酶 (AK)、蛋白酶体激活因子PA2 8β亚单位 (PA2 8)、8kDa钙结合蛋白 (CBP)基因进行表达特性研究。方法　分别提取雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫的总RNA ,利用RT-PCR酶混合... 目的　对从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中筛选出的 3种新基因 ,腺苷酸激酶 (AK)、蛋白酶体激活因子PA2 8β亚单位 (PA2 8)、8kDa钙结合蛋白 (CBP)基因进行表达特性研究。方法　分别提取雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫的总RNA ,利用RT-PCR酶混合物试剂盒 ,一步法对总RNA进行反转录及PCR扩增。结果　AK及PA2 8蛋白基因可以在雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫体内表达 ,CBP只在尾蚴及断尾童虫中表达。结论　所筛到的AK、PA2 8、CBP基因均是日本血吸虫特异基因 ,AK及PA2 8基因可以在雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫体内表达 ,CBP可能是日本血吸虫尾蚴。 展开更多
关键词 日本血吸虫 新基因 表达特性 腺苷酸激酶 蛋白酶体激活因子 8kda钙结合蛋白
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日本血吸虫新基因—Ⅲ8kDa钙结合蛋白基因的发现与克隆 被引量：1
3
作者 彭鸿娟 陈晓光 +1 位作者 支国舟 王珣章 《热带医学杂志》 CAS 2002年第2期114-117,共4页
目的　将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因—Ⅲ 8kDa钙结合蛋白 (Calcium -bindingprotein ,CBP)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上 ,为下一步对该基因的功能进行研究做准备。方法　将插入于pTriplEx2质粒上的cDNA进行测序 ,... 目的　将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因—Ⅲ 8kDa钙结合蛋白 (Calcium -bindingprotein ,CBP)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上 ,为下一步对该基因的功能进行研究做准备。方法　将插入于pTriplEx2质粒上的cDNA进行测序 ,测序结果经BLASTn程序搜索 ,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫钙结合蛋白cDNA高度同源。根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物 ,将PCR产物纯化后连接到pMD 1 8-T载体上 ,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjCBP基因亚克隆入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中。结果　所发现的新基因与曼氏血吸虫 8kDaCBP基因的同源性达 82 % ,PCR产物的片段长度与预期大小一致 ,重组T载体及表达质粒经EcoRI及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论　所发现的cDNA与曼氏血吸虫 8kDaCBPcDAN高度同源 ,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a(+) -SjCBP。 展开更多
关键词 日本血吸虫 曼氏血吸虫 8kda钙结合蛋白 pET32a(+) 基因克隆
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