对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究。通过盐析、DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTHFR,采用荧光法分析测定该酶纯化结果和酶促动力学性质。结果表明,MTHFR的...对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究。通过盐析、DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTHFR,采用荧光法分析测定该酶纯化结果和酶促动力学性质。结果表明,MTHFR的纯化倍数可达20倍以上;测得最适酶促反应条件为pH 6.8,37℃;NADPH浓度1.2 mmol/L;以5,10-亚甲基四氢叶酸为底物测得米氏常数km=70.3μmol/L。研究发现,别构抑制剂S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使MTHFR的体外活性降到原活性的60%以下。本文初步探讨了MTHFR的催化性质,对MTHFR催化活性的主要影响因素进行研究,为酶促法合成5-甲基四氢叶酸的进一步研究奠定了基础。展开更多
以叶酸为原料,采用一锅煮法合成5-甲基四氢叶酸,用活性炭吸附和半胱氨酸、乙醇和水混合液洗脱进行提纯分离,再与氯化钙反应制备较稳定的5-甲基四氢叶酸钙,最佳反应条件为n(叶酸):n(硼氢化钠)=1∶12,甲基化时间为2h,甲基化温度为30℃,活...以叶酸为原料,采用一锅煮法合成5-甲基四氢叶酸,用活性炭吸附和半胱氨酸、乙醇和水混合液洗脱进行提纯分离,再与氯化钙反应制备较稳定的5-甲基四氢叶酸钙,最佳反应条件为n(叶酸):n(硼氢化钠)=1∶12,甲基化时间为2h,甲基化温度为30℃,活性炭吸附时间为3h,洗脱时间为5h.此条件下5-甲基四氢叶酸钙收率为82.4%,纯度为92.7%.用HPLC,元素分析,IR,UV,1 H NRM,MS等方法对目标产物结构进行了表征.展开更多
文摘以叶酸为原料,采用一锅煮法合成5-甲基四氢叶酸,用活性炭吸附和半胱氨酸、乙醇和水混合液洗脱进行提纯分离,再与氯化钙反应制备较稳定的5-甲基四氢叶酸钙,最佳反应条件为n(叶酸):n(硼氢化钠)=1∶12,甲基化时间为2h,甲基化温度为30℃,活性炭吸附时间为3h,洗脱时间为5h.此条件下5-甲基四氢叶酸钙收率为82.4%,纯度为92.7%.用HPLC,元素分析,IR,UV,1 H NRM,MS等方法对目标产物结构进行了表征.
