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急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响 被引量：6
1
作者 魏殿华 高静雯 +2 位作者 汪骁轩 张莉 齐亚银 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第12期3680-3689,共10页
为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组(15℃±2℃)与冷应激组(-25℃±2℃),每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组(冷应激24 h后)和常温组的心脏、... 为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组(15℃±2℃)与冷应激组(-25℃±2℃),每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组(冷应激24 h后)和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP 60、HSP 70和HSP 90基因进行同源性分析。结果显示,HSP 70和HSP 90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP 60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP 60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著(P<0.01);冷刺激后HSP 70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P<0.01);冷刺激后HSP 90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著(P<0.05),而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P<0.01)。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。 展开更多
关键词 急性冷应激 HSP 60基因 HSP 70基因 HSP 90基因
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养殖刺参溃疡病病原菌RH2的鉴定及其生物学特性分析 被引量：38
2
作者 杨嘉龙 周丽 +2 位作者 绳秀珍 邢婧 战文斌 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期504-511,共8页
从患溃疡病养殖刺参（Apostichopus japonicus）病灶处分离出3株优势菌（RH1、RH2、RH3）,以浸浴、体腔注射、体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株RH2为养殖刺参溃疡病的病原菌,其对刺参的LD50（半数致死量）每尾为5.68×10^6C... 从患溃疡病养殖刺参（Apostichopus japonicus）病灶处分离出3株优势菌（RH1、RH2、RH3）,以浸浴、体腔注射、体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株RH2为养殖刺参溃疡病的病原菌,其对刺参的LD50（半数致死量）每尾为5.68×10^6CFU,并证实浸浴、体腔注射的方式无法感染刺参,该菌可能通过体表创伤侵入的方式感染刺参。经形态学观察、生理生化特性分析、16SrRNA和HSP60基因测序确定菌株RH2为溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）。基于16S rRNA基因构建的系统发育树显示,菌株RH2与溶藻弧菌（AF513447）亲缘关系最近,置信度为50%;HSP60基因序列分析表明RH2与溶藻弧菌（AY332570、AF230931）聚为一个分支,且置信度高达99%。菌株RH2的最适生长盐度为25～35,最适生长pH为7.2～8.0,最适生长温度为14～22℃。对18种药物的敏感实验证实菌株RH2对诺氟沙星、复方新诺明、壮观霉素等较为敏感。 展开更多
关键词 刺参 溃疡病 溶藻弧菌 16SRRNA基因 HSP60基因 生物学特性
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养殖大菱鲆腹水症病原菌SR1的分离及鉴定 被引量：31
3
作者 张伟妮 周丽 +1 位作者 邢婧 战文斌 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期603-609,共7页
从患腹水症的养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水分离到1株优势细菌SR1,人工感染实验证实其具有致病性。经API ID32E系统鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus),并测定了其16S rRNA基因序列和热激蛋白HSP60(Heatshock protein,HSP)... 从患腹水症的养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水分离到1株优势细菌SR1,人工感染实验证实其具有致病性。经API ID32E系统鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus),并测定了其16S rRNA基因序列和热激蛋白HSP60(Heatshock protein,HSP)基因序列。基于16S rRNA基因序列构建的系统树结果表明,菌株SR1与溶藻弧菌(AY967727)亲缘关系最近,然而置信度较低,仅有27%,不能有效地鉴定到种。HSP60基因序列分析表明,该菌株与溶藻弧菌(AF230931)同源性最高,为99.2%。系统发育树表明SR1确与溶藻弧菌(AF230931)聚为一个分支,且置信度较高,为84%。综合上述结果,菌株SR1可鉴定为溶藻弧菌。[中国水产科学,2006,13(4):603-609] 展开更多
关键词 腹水症大菱鲆 16S RRNA基因 HSP60基因 溶藻弧菌
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兔出血症病毒2型的分离鉴定与序列分析 被引量：25
4
作者 魏后军 胡波 +5 位作者 范志宇 宋艳华 仇汝龙 陈萌萌 薛家宾 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期404-409,共6页
兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV... 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV毒株制备的疫苗几乎不能预防家兔感染RHDV2,从而给世界养兔业造成了巨大的经济损失。2020年4月,中国四川省某兔场首次发生由疑似RHDV2引起的RHD,笔者所在实验室通过红细胞凝集试验(Hemagglutination,HA)、逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增、vp60基因序列分析和病毒复制试验,对采集的病死家兔肝脏样本进行病原鉴定。HA结果显示,部分病死家兔的肝脏样本不能引起血凝现象;RT-PCR结果显示,样品中出现了RHDV2的特异性条带。对新发现毒株cDNA的RT-PCR产物进一步分析发现,所扩增vp60基因核苷酸序列与经典RHDV vp60基因核苷酸序列的一致性为77.5%~80.1%,与RHDV2 vp60基因核苷酸序列的一致性为93.6%~96.1%,并且与RHDV2处于同一个进化分支。病毒复制试验结果显示,用病死家兔肝脏组织与磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline,PBS)按1 g∶10 ml混合后制成的悬液分别人工感染5只非免疫25日龄未断奶仔兔和5只2月龄兔,在24~48 h全部死亡。基于以上试验结果,确定本研究新发现的RHDV毒株为RHDV2,并将其命名为SC2020,这是在中国首次发现RHDV2毒株,应引起高度重视。 展开更多
关键词 兔出血症 兔出血症病毒2型(RHDV2) VP60基因 鉴定 序列分析
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两株对虾幼体弧菌病病原的分离和鉴定 被引量：24
5
作者 温崇庆 温崇 +2 位作者 薛明 何红 周世宁 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期346-352,共7页
从患弧菌病的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼体中分离到两株病原菌zouA和zouB,常规形态和生理生化试验表明均为弧菌属菌种,弧菌编码鉴定系统分别鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)。副溶血弧... 从患弧菌病的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼体中分离到两株病原菌zouA和zouB,常规形态和生理生化试验表明均为弧菌属菌种,弧菌编码鉴定系统分别鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)。副溶血弧菌R72H序列检测结果进一步证实菌株zouB为副溶血弧菌。对菌株zouA的16S rRNA基因序列分析表明该菌株与溶藻弧菌、副溶血弧菌等弧菌的相似性均高于98%,相互间不能区分;HSP60基因序列分析表明该菌株与溶藻弧菌相似性达98%以上,而与所有其它弧菌的相似性不到92%。结合表型和分子特征的鉴定结果,菌株zouA和zouB分别被鉴定为溶藻弧菌和副溶血弧菌。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 溶藻弧菌 R72H序列 16S RRNA基因 HSP60基因 鉴定
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基于16S rRNA和HSP60基因序列分析粘细菌孢囊杆菌亚目形态分类的种属之间的亲缘关系 被引量：16
6
作者 蒋德明 周秀文 +2 位作者 田晓翔 吴志红 李越中 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期711-716,共6页
【目的】利用16SrRNA和HSP60基因分子标记分析鉴定形态分类特征不稳定的粘细菌种属。【方法】利用粘细菌的传统分离纯化方法从土壤中分离粘细菌,根据菌株的形态特征进行分类,PCR方法扩增菌株的16SrRNA和HSP60基因序列并进行系统发育关... 【目的】利用16SrRNA和HSP60基因分子标记分析鉴定形态分类特征不稳定的粘细菌种属。【方法】利用粘细菌的传统分离纯化方法从土壤中分离粘细菌,根据菌株的形态特征进行分类,PCR方法扩增菌株的16SrRNA和HSP60基因序列并进行系统发育关系分析。【结果】根据形态特征,分离得到的15株粘细菌菌株归入孢囊杆菌亚目(Cystobacterineae)的2个科3个属。其中11株粘细菌具有典型的所在种属的子实体结构,而菌株0085-4、0121-3、NM03和Myx9736的子实体结构发生了不同程度退化。15株粘细菌的16SrRNA基因序列的相似性在95.4%到99.5%之间。而HSP60基因序列差异较大。【结论】在属水平上,粘细菌形态分类特征和16SrRNA基因系统进化关系具有很好的一致性;在揭示粘细菌种间系统发育关系中,HSP60基因序列更为适用。 展开更多
关键词 粘细菌 分类 形态 16S RRNA基因 HSP60基因
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中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定 被引量：14
7
作者 严维巍 崔治中 王永坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期447-449,共3页
应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆... 应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1株 ,在 1.0 m mol/ L IPTG和 37℃的条件下诱导 ,VP6 0 - GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western- blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的 870 0 0相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠 ,所得抗血清应用间接 EL ISA检测 ,与 RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明 ,大肠杆菌中表达的 RHDV VP6 展开更多
关键词 中国株 兔出血症病毒 衣壳蛋白 VP60基因 大肠杆菌 基因表达 免疫原性 鉴定 RT-PCR ELISA 病毒性出血症
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立克次体目微生物的系统分类进展 被引量：15
8
作者 宝福凯 柳爱华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1262-1264,共3页
关键词 立克次体 系统分类 微生物 DNA序列分析 16SRRNA基因 HSP60基因 再现传染病 胞内寄生
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海产品中溶藻弧菌的筛选及其致病因子的研究 被引量：15
9
作者 彭喜春 张宁 +2 位作者 冉艳红 桂博 陈龙 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第4期312-315,共4页
溶藻弧菌能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT)是致病性微生物中常见的致病因子。本文对从扇贝、牡蛎、贻贝、沙虾、虾蛄等海产品中筛选的溶藻弧菌的种属和致病因子进行了研究,生化鉴定显示分离到的两... 溶藻弧菌能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT)是致病性微生物中常见的致病因子。本文对从扇贝、牡蛎、贻贝、沙虾、虾蛄等海产品中筛选的溶藻弧菌的种属和致病因子进行了研究,生化鉴定显示分离到的两株溶藻弧菌来源不同,基因测定显示它们同属于溶藻弧菌(V.alginolyticus);血琼脂平板法、兔小肠结扎法和乳鼠灌胃法显示来源不同的溶藻弧菌其产毒种类也不同,两株溶藻弧菌都能产生不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST),但只有1株能产生溶血毒素。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 HSP60基因 耐热性肠毒素 不耐热性肠毒素 溶血毒素
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四川牦牛奶和曲拉中九株乳酸菌的分子鉴定 被引量：11
10
作者 包秋华 吕嫱 +3 位作者 于洁 王宏梅 张和平 孙天松 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期396-401,共6页
为准确鉴定分离自我国四川鲜牦牛奶和曲拉中9株乳酸菌到种水平,作者运用16S rDNA序列分析、recA基因特异扩增和hsp60-RFLP等多种分子技术对分离自我国四川地区鲜牦牛奶和曲拉中的9株乳酸菌进行分类鉴定。结果证实,16S rDNA序列分析法可... 为准确鉴定分离自我国四川鲜牦牛奶和曲拉中9株乳酸菌到种水平,作者运用16S rDNA序列分析、recA基因特异扩增和hsp60-RFLP等多种分子技术对分离自我国四川地区鲜牦牛奶和曲拉中的9株乳酸菌进行分类鉴定。结果证实,16S rDNA序列分析法可将9株乳酸菌初步归类为植物乳杆菌群(4株),肠膜明串珠菌(4株),瑞士乳杆菌(1株)。由于16S rDNA序列分析法不能区分植物乳杆菌和戊糖乳杆菌,为了进一步鉴定植物乳杆菌群中的4株菌,继续采用recA基因特异扩增和hsp60-RFLP技术对其细分,结果表明recA基因特异扩增和hsp60-RFLP的方法均能很好地把植物乳杆菌群中的4株菌鉴定到种水平,且均为植物乳杆菌。 展开更多
关键词 乳酸菌 分类鉴定 16s RDNA RECA基因 hsp60基因 RFLP
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婴儿粪便长双歧杆菌的分离与多样性分析 被引量：12
11
作者 张秋雪 刘晓婵 +4 位作者 朱宗涛 万峰 孙思睿 贾芳芳 孟祥晨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第24期8-14,共7页
本研究旨在分析婴儿粪便长双歧杆菌的多样性,采用改良MRS培养基从哈尔滨地区健康婴儿粪便中分离双歧杆菌,采用生理生化实验结合16S rDNA和热应激蛋白60基因(heat-shock protein 60,hsp60)同源性分析鉴定分离株,利用同源性分析及随机扩... 本研究旨在分析婴儿粪便长双歧杆菌的多样性,采用改良MRS培养基从哈尔滨地区健康婴儿粪便中分离双歧杆菌,采用生理生化实验结合16S rDNA和热应激蛋白60基因(heat-shock protein 60,hsp60)同源性分析鉴定分离株,利用同源性分析及随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphism DNA,RAPD)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进一步分析长双歧杆菌多态性。实验从11个婴儿体内分离得到18株厌氧的细菌菌株,经形态学分析、生理生化实验、16S rDNA测序及hsp60测序实验发现,其中7株为长双歧杆菌长亚种,3株为长双歧杆菌婴儿亚种。RAPD和MLST结果表明:7株长双歧杆菌长亚种为6个基因型,3株长双歧杆菌婴儿亚种为2个基因型,上述结果说明不同人源婴儿粪便长双歧杆菌基因型差异较大。 展开更多
关键词 长双歧杆菌 热应激蛋白60基因(hsp60) 随机扩增多态性DNA(RAPD) 多位点序列分型(MLST)
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兔出血症病毒Yaan株衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量：10
12
作者 田浪 王红宁 +3 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 王鸿宾 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第12期983-987,共5页
采用RT-PCR方法扩增兔出血症病毒(RHDV)Yaan株衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD 18-T载体上,经酶切及PCR鉴定后测序.结果显示,VP60基因全长1 740 bp,编码579个氨基酸.将Yaan株与其他RHDV分离株进行比较,结果显示,核苷酸同源性为90... 采用RT-PCR方法扩增兔出血症病毒(RHDV)Yaan株衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD 18-T载体上,经酶切及PCR鉴定后测序.结果显示,VP60基因全长1 740 bp,编码579个氨基酸.将Yaan株与其他RHDV分离株进行比较,结果显示,核苷酸同源性为90.5%～97.5%,氨基酸同源性为94.3%～99.5%,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区,表明毒株具有高度保守性;同时对Yaan株与国外标准株AST/89的VP60蛋白氨基酸变异及其亲水性、柔性区、抗原区和表面结构进行了比较分析. 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析
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兔出血症病毒JL株分离鉴定及VP60基因主要抗原表位分析 被引量：11
13
作者 金明兰 侯继波 +4 位作者 郑其升 鲁会军 韩松 南文龙 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期833-838,共6页
采用血凝试验、电镜观察、RT-PCR方法分离鉴定了1株JL株兔出血症病毒(RHDV),扩增衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体上,经酶切鉴定后测序。结果显示,VP60基因全长1 740bp,编码580个氨基酸;JL株与其他RHDV分离株比较,核苷酸... 采用血凝试验、电镜观察、RT-PCR方法分离鉴定了1株JL株兔出血症病毒(RHDV),扩增衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体上,经酶切鉴定后测序。结果显示,VP60基因全长1 740bp,编码580个氨基酸;JL株与其他RHDV分离株比较,核苷酸同源性为93.7%～99.2%,氨基酸同源性在97.3%～99.5%,在VP60 6个区中,A、B、D、F是稳定区,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区,表明毒株具有高度保守性;将JL株与国内外标准株蛋白氨基酸变异及其亲水性、柔性区、抗原区和表面结构进行比较分析,预测RHDV VP60细胞表位。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 分离鉴定 VP60基因 序列分析
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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量：10
14
作者 田浪 王红宁 +4 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 周万蓉 王鸿宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1078-1083,共6页
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成... 从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 无血凝性 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析 RT—PCR
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兔出血症病毒套式PCR检测方法的建立 被引量：8
15
作者 周智君 陈军 +1 位作者 俞远京 肖献忠 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期261-263,共3页
根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR... 根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR的假阳性结果.用该方法对12份RHD样本进行检测,检出率为100%. 展开更多
关键词 兔出血症病毒 套式PCR VP60基因
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患溃烂症的眼斑拟石首鱼分离的灿烂弧菌的鉴定 被引量：8
16
作者 马爱敏 闫茂仓 +4 位作者 胡利华 谢起浪 陈少波 单乐州 邵鑫斌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期542-547,共6页
【目的】从患溃烂症的眼斑拟石首鱼分离到优势菌株M-1,并进一步对该菌的系统发育学进行了分析。【方法】采用形态学、生理生化鉴定,结合16SrRNA和HSP60基因序列分析。【结果】16SrRNA基因同源性分析,菌株M-1与灿烂弧菌(AJ874361、AY0469... 【目的】从患溃烂症的眼斑拟石首鱼分离到优势菌株M-1,并进一步对该菌的系统发育学进行了分析。【方法】采用形态学、生理生化鉴定,结合16SrRNA和HSP60基因序列分析。【结果】16SrRNA基因同源性分析,菌株M-1与灿烂弧菌(AJ874361、AY046955)聚为一群;HSP60基因(groES)序列分析表明M-1与弧菌(EU653883、AY837440)聚为一个分支。【结论】菌株M-1属于灿烂弧菌(Vibrio splendidus)。 展开更多
关键词 M-1菌株 致病性 16SRRNA基因 HSP60基因 灿烂弧菌
原文传递
兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用 被引量：7
17
作者 刘怀然 胡迎东 +4 位作者 陈洪岩 张龄 李昌文 关云涛 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期201-204,共4页
VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，... VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠，免疫血清经全病毒ELISA检测，效价可达1：3200-1：6400，经琼脂扩散试验检测效价为1：16。重组蛋白纯化、复性后，作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法，并检测了48份免血清样品，与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同。实验结果表明．用原核系统表达的VP60蛋白．可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 VP60基因 原核表达 诊斯
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诸氏鲻虾虎鱼致病性创伤弧菌的分离与鉴定 被引量：7
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作者 余露军 蔡磊 +2 位作者 陈小曲 叶惠欣 李建军 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期51-54,共4页
从患病的诸氏鲻虾虎鱼分离病原,研究其致病性。通过形态学观察、生理生化特性、HSP60序列扩增及系统发育树分析等方法系统鉴定,并进行了人工感染和毒力基因检测。结果表明,从患病的诸氏鲻虾虎鱼肝脏组织分离到1株革兰阴性杆菌,编号PYMc1... 从患病的诸氏鲻虾虎鱼分离病原,研究其致病性。通过形态学观察、生理生化特性、HSP60序列扩增及系统发育树分析等方法系统鉴定,并进行了人工感染和毒力基因检测。结果表明,从患病的诸氏鲻虾虎鱼肝脏组织分离到1株革兰阴性杆菌,编号PYMc14-2,回归感染试验证实该菌株为诸氏鲻虾虎鱼的病原菌,毒力基因hemo检测结果阳性。生化特性结果与创伤弧菌类似,PCR扩增获得的486bp的HSP60基因序列与创伤弧菌(登录号AF230955.1)同源性达94%;系统进化树分析表明,PYMc14-2与创伤弧菌(登录号AF230955.1)聚为一簇,初步鉴定该菌为创伤弧菌。 展开更多
关键词 诸氏鲻虾虎鱼 病原菌 创伤弧菌 HSP60基因
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从患病黑鲪分离病原菌HV0811的鉴定及其系统发育分析 被引量：6
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作者 孟鹏 战文斌 绳秀珍 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期48-54,共7页
从症状为渍疡瞎眼的养殖黑鲪（Sebastodes fuscescens）病灶处分离到3株优势菌HV0811、PT0811和JH0811，以肌肉注射人工感染实验证实菌株HV0811为致病菌，其对黑鳕的半致死浓度为7．15×10^5CFu／尾。通过对致病菌的形态学观察、生... 从症状为渍疡瞎眼的养殖黑鲪（Sebastodes fuscescens）病灶处分离到3株优势菌HV0811、PT0811和JH0811，以肌肉注射人工感染实验证实菌株HV0811为致病菌，其对黑鳕的半致死浓度为7．15×10^5CFu／尾。通过对致病菌的形态学观察、生理生化分析表明：菌株HV0811为革兰氏阴性菌，极生单鞭毛，短杆状，直径1～3mm，需Na＋生长，低于4℃、高于42℃不生长。基于16SrRNA和HSP60基因序列构建的系统发育树表明：HV0811分别与哈维氏弧菌（AY750578和AY332571）相类聚，其中16SrRNA基因序列与哈维氏弧菌（AY750578）聚合置信度较低，仅有10％，不能有效地确定该种；HSP60基因序列与哈维氏弧菌（AY332571）聚合为一个分支的置信度达100％。综合该菌的形态、生理生化及HSP60基因序列比对结果，表明分离到的病原菌HV0811为哈维氏弧菌。药敏试验结果显示病原哈维氏弧菌（HV0811）对庆大霉素、新霉素、氟哌酸等较为敏感。 展开更多
关键词 黑鲪(Sebastodes fuscescens) 溃疡 瞎眼 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi) 16S RRNA基因 HSP60基因
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小球隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15/60基因的克隆和序列分析 被引量：3
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作者 何宏轩 张西臣 +5 位作者 欧阳红生 徐卫东 陈建宝 尹继刚 李建华 杨举 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期182-184,共3页
将小球隐孢子虫子孢子表面蛋白 (CP15 / 6 0 )编码区基因克隆及测序 ,并对其抗原决定簇进行分析。抽提牛源小球隐孢子虫孵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP15 / 6 0的基因 ,然后将其克隆到pMD18_T载体中 ,用双脱氧链末端终... 将小球隐孢子虫子孢子表面蛋白 (CP15 / 6 0 )编码区基因克隆及测序 ,并对其抗原决定簇进行分析。抽提牛源小球隐孢子虫孵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP15 / 6 0的基因 ,然后将其克隆到pMD18_T载体中 ,用双脱氧链末端终止法测DNA序列。结果 ,用PCR扩增获得了CP15 / 6 0的编码区基因 ,并测定了该基因编码区序列。与GenBank比较 ,核苷酸序列同源性为 :98.9% ;推导的氨基酸序列同源性为 :99.3%。 展开更多
关键词 小球隐孢子虫 子孢子表面蛋白 CP15/60基因 序列分析 基因克隆 CP15/60基因
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